| 摘 要： | 本研究旨在探究单增李斯特菌10403s TatD-like DNase蛋白的序列结构特征与原核表达重组蛋白的核酸酶活性。应用生物信息学软件预测分析蛋白序列结构特征,构建重组原核表达质粒pET-32a-TatDlike DNase,转化入大肠杆菌Rosetta。重组蛋白经IPTG诱导表达、亲和层析纯化、透析复性后进行核酸酶活性分析。结果显示,单增李斯特菌10403s TatD-like DNase由265个氨基酸组成,理论蛋白分子质量为30.16 ku,与芽孢杆菌属TatD蛋白同源性最高。二级结构主要由49.43%的α-螺旋、29.81%的无规则卷曲和16.6%的β-折叠构成。SDS-PAGE和Western-blot显示,重组原核表达蛋白大小约52 ku,主要以包涵体形式表达。琼脂糖凝胶电泳证实,重组蛋白在Mg2+存在时切割λDNA的核酸酶活性显著增强,且最适反应温度和pH值分别为37℃和pH6.0。本研究系统性分析了单增李斯特菌TatD-like DNase的序列结构特征,得到了重组原核表达蛋白,且该重组蛋白具有Mg~(2+)依赖性核酸酶活性,这为进一步研究TatD-like DNase在单增李斯特菌感染中的作用奠定了基础。
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