基于切口酶的等温全基因组扩增体系的建立与应用

目的 建立依赖切口酶Nt.BstNBI的等温全基因组扩增体系，并对该体系的微量生物物证STR分型效能进行验证。方法 选用切口酶Nt.BstNBI（识别序列为GAGTC）和等温扩增的聚合酶Bst，建立切口酶依赖的扩增体系（NDA）。对DNA样本进行NDA并纯化NDA产物，对NDA前后的样本进行复合扩增和毛细管电泳，检测该方法的有效性、灵敏性。结果 007标准品12个常染色体基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为3 pg/μL;19个Y染色体个基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为6 pg/μL。8个人血样本扩增效率提高2倍以上的常染色体基因座与007标准品一致。结论 本文建立的NDA体系准确性好，能够对包含特定侧翼序列的STR基因座进行有效的线性扩增，对法医微量生物物证的高效扩增检测具有重要意义。