| 猪血凝性脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 臧德跃,王栋,李明谦,赵魁,张冰冰,陆慧君,贺文琦,陈克研,岳占碰,高丰.猪血凝性脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学,2011(1). |
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| 作者姓名： | 臧德跃 王栋 李明谦 赵魁 张冰冰 陆慧君 贺文琦 陈克研 岳占碰 高丰 |
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| 作者单位： | 吉林大学畜牧兽医学院;吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30871849,31072134); 吉林省科技发展国际合作项目(20080722); 吉林省青年科研基金项目(20090154) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中的猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)S蛋白基因的保守序列设计合成1对特异性引物,经PCR扩增S基因并构建含有该基因片段的重组质粒,将该重组质粒作为阳性标准品,建立了检测HEV的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,相关系数为0.994;敏感性高,检测下限为1.6×104 copies/μL;特异性强,与牛冠状病毒、伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不发生交叉反应;并且重复性好,组内、组间的变异系数均小于2%。应用该方法对采集的20份疑似HEV感染病料进行检测,其中16份为阳性,而用常规PCR检测同样的样品,仅8份为阳性。表明建立的SYBRGreen Ⅰ real-time PCR方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于临床上HEV的检测及定量分析。
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| 关 键 词： | 猪血凝性脑脊髓炎病毒 S蛋白基因 荧光定量聚合酶链反应 |
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