边缘无浆体SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 何德肆,徐平源,陈文承,李芬,胡涛,彭运潮,刘毅.边缘无浆体SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2011(3). |
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作者姓名: | 何德肆 徐平源 陈文承 李芬 胡涛 彭运潮 刘毅 |
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作者单位: | 湖南生物机电职业技术学院;湖南农业大学动物医学院; |
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基金项目: | 湖南省教育厅重点项目(06A028);湖南省教育厅项目(09C1209); 湖南养殖科研项目(200813) |
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摘 要: | 根据GenBank中边缘无浆体的MSP4基因序列(EU677383)设计2对引物(AmspF3/R3和Am-spF4/R4)并克隆MSP4部分基因,构建含有MSP4基因的标准质粒,以AmspF3/R3为引物进行荧光定量PCR,建立了边缘无浆体的MSP4SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用于临床血样检测。结果显示,该方法可以检测到1×102 copies/μL的标准质粒DNA,该方法对绵羊无浆体、附红细胞体、东方巴贝斯虫、组织滴虫提取的DNA均为阴性反应。结果表明,该方法与常规PCR方法比较,阳性及阴性符合率都为100%,且具有敏感、重复性好、无污染特性,并具有能准确定量的特点,说明该方法具有很好的应用前景和研究价值。
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关 键 词: | 边缘无浆体 MSP4基因 SYBRGreenⅠ 标准曲线 |
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