弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定 |
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引用本文: | 张花景,蒋蔚,刘迎春,陈永军,李欣彤,石金磊,乔元彪,薛俊欣,张梦,王权.弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定[J].中国兽医科学,2014(5):503-508. |
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作者姓名: | 张花景 蒋蔚 刘迎春 陈永军 李欣彤 石金磊 乔元彪 薛俊欣 张梦 王权 |
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作者单位: | 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室;南京农业大学动物医学院;上海大学生命科学学院 |
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基金项目: | 公益性行业(农业)科研专项(20130303045);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2013JB10) |
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摘 要: | 为深入研究弓形虫烯醇化酶的生物学功能,根据已发表的eno2基因序列设计引物,通过RTPCR方法扩增弓形虫RH株的eno2基因。将eno2克隆到载体pET-28a(+)中后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其免疫活性。结果显示,eno2基因全长1 353bp,编码444个氨基酸,与GenBank中登录的弓形虫烯醇化酶基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性均高达99.8%,与其他物种的烯醇化酶的同源性较低。在pH7.5、28℃和IPTG终浓度0.1mmol/L条件下,重组蛋白ENO2得到高效可溶性表达,分子质量约为55ku。Western-blot结果显示,重组蛋白能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明ENO2具有较好的反应原性,可以作为血清学诊断抗原。IFA表明,NO2在弓形虫的细胞质和细胞核中均有分布。结果表明,本研究成功获得了可溶性、具有良好免疫活性的弓形虫重组蛋白ENO2,为深入研究其生物学功能奠定了基础。
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关 键 词: | 弓形虫 烯醇化酶 原核表达 反应原性 |
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