| 鸡TLR2信号通路中相关分子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 马德星,高铭扬,马春丽,宋春林.鸡TLR2信号通路中相关分子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J].中国兽医科学,2011(11). |
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| 作者姓名： | 马德星 高铭扬 马春丽 宋春林 |
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| 作者单位： | 东北农业大学动物医学学院;东北农业大学食品学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30901061); 东北农业大学博士启动基金项目(2010RCB38); 中国博士后科学基金项目(2011M501007) |
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| 摘 要： | 为建立鸡Toll样受体2(ChTLR2)信号通路中相关分子的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中TLR2信号通路中的5种相关分子即ChTLR2-1,ChTLR2-2,ChTLR6,鸡骨髓分化蛋白88(ChMyD88)及鸡核因子κB(ChNF-κB)基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为参考基因,设计特异引物扩增目的基因片段。将6种基因克隆至pMD8-T载体后得到各自的阳性克隆质粒,以6种阳性质粒为标准品建立了标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验分析。应用建立的方法对堆形艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA/Ea3-1E免疫SPF雏鸡脾中ChMyD88和ChNF-κB mRNA的转录水平进行检测。结果显示,当标准品稀释度为1×102～1×1010copies/μL时,6种基因Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.995。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。免疫雏鸡脾中ChMyD88和ChNF-κB mRNA转录水平的检测结果表明,免疫组2种分子mRNA转录水平均极显著高于空白对照组(P<0.01)。本研究为ChTLR...
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| 关 键 词： | 鸡 TLR2信号通路 SYBRGreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR |
Establishment and application of real-time fluorescent quantitative RT-PCR method for the detection of related molecules involved in chicken TLR2 signal pathway |
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| MA De-xinga,GAO Ming-yanga,MA Chun-lib,SONG Chun-lina.Establishment and application of real-time fluorescent quantitative RT-PCR method for the detection of related molecules involved in chicken TLR2 signal pathway[J].Veterinary Science in China,2011(11). |
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| Authors: | MA De-xinga GAO Ming-yanga MA Chun-lib SONG Chun-lina |
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| Institution: | MA De-xinga,GAO Ming-yanga,MA Chun-lib,SONG Chun-lina (a.College of Veterinary Medicine,b.Food College,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China) |
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| Abstract: | |
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