禽源CCL19蛋白的表达纯化和抗体的制备 |
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引用本文: | 王秋霞,李鹏祥,李茵,刘兴友,余燕,张艳红,姜金庆,马金友,欧长波.禽源CCL19蛋白的表达纯化和抗体的制备[J].中国兽医科学,2018(2). |
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作者姓名: | 王秋霞 李鹏祥 李茵 刘兴友 余燕 张艳红 姜金庆 马金友 欧长波 |
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作者单位: | 河南科技学院动物科技学院;新乡学院; |
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摘 要: | 为研究趋化因子CCL19在禽源疾病发生发展过程中的作用,利用RT-PCR技术,从攻毒后的鸡腔上囊组织克隆了禽源CCL19基因,测序结果显示,该基因ORF长300 bp,编码100个氨基酸,与Gen Bank中登录的禽源CCL19序列完全一致;将该基因亚克隆至原核表达载体p ET30a,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE进行初步分析,在约13 ku处出现明显蛋白条带,与预期结果相符;经镍柱纯化后,获得了高纯度的重组融合蛋白,Western-blot分析显示,纯化后的重组融合蛋白能够与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔进行多克隆抗体的制备,经Western-blot检测,制备的抗体能与CCL19蛋白发生特异性反应。本研究首次克隆并表达了禽源CCL19蛋白,并对该蛋白进行了纯化和抗体的制备,该基因的成功克隆、表达和纯化以及针对目的蛋白抗体的制备,为进一步研究趋化因子CCL19在禽源疾病发生发展过程中的作用奠定了基础。
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