| 马立克病病毒单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 宋利娜,滕蔓,郑鹿平,李会珍,朱志坚,薛正飞,郅玉宝,罗俊,张改平.马立克病病毒单克隆抗体的制备[J].中国兽医科学,2018(9). |
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| 作者姓名： | 宋利娜 滕蔓 郑鹿平 李会珍 朱志坚 薛正飞 郅玉宝 罗俊 张改平 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室;扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 摘 要： | 以纯化的经鸡胚成纤维细胞(CEF)培养的马立克病病毒(MDV)超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原,制备特异性识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次,离心取上清,选用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,浓缩液通过Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶作为层析介质分离纯化MDV病毒粒子,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR分析不同收集峰MDV病毒含量,并经过透射电子显微镜观察到直径约100 nm的MDV病毒粒子。进一步用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,制备峰尖病毒浓缩液,以此免疫雌性BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和Western-blot筛选,最终获得107个阳性克隆,由其中1株强阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株10B2制备的单克隆抗体腹水IPMA效价为1∶2.56×10~6。本研究结果为后续MDV单克隆抗体的筛选、鉴定及诊断试剂研发奠定了重要基础。
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