| H5亚型猪流感病毒HAl重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 尹可,郭军庆,黄杰,黎满香,周继勇.H5亚型猪流感病毒HAl重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立[J].中国兽医科学,2008,38(9). |
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| 作者姓名： | 尹可 郭军庆 黄杰 黎满香 周继勇 |
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| 摘 要： | 利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体Pet-28a( ),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA(iHAI-ELISA)检测方法.SDS-PAGE分析结果显示,在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His-HA1融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在;Western-blot分析结果显示,表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别.优化iHAI-ELISA中HA1/H5重组蛋白的包被浓度为0.31 μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1:100.特异性测定结果显示,iHAI-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应;iHAI-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93.5%.表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性.
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 H5亚型 HAl蛋白 |
Production of a recombinant HA1 protein of swine influenza virus H5 subtype and development of an indirect ELISA |
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| YIN Ke,GUO Jun-qing,HUANG Jie,LI Man-xiang,ZHOU ji-yong.Production of a recombinant HA1 protein of swine influenza virus H5 subtype and development of an indirect ELISA[J].Veterinary Science in China,2008,38(9). |
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| Authors: | YIN Ke GUO Jun-qing HUANG Jie LI Man-xiang ZHOU ji-yong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ElISA |
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