日本脑炎病毒基因Ⅰ型与Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立 |
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引用本文: | 张 亮,刘澣扬,石双艳,袁 磊,伍 锐,黄小波,文翼平,文心田,曹三杰.日本脑炎病毒基因Ⅰ型与Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立[J].中国兽医科学,2014(4):419-424. |
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作者姓名: | 张 亮 刘澣扬 石双艳 袁 磊 伍 锐 黄小波 文翼平 文心田 曹三杰 |
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作者单位: | 四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心;四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室;农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站; |
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基金项目: | 公益性行业(农业)科研专项(201203082) |
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摘 要: | 为建立一种简单快捷的鉴别日本脑炎病毒(JEV)基因Ⅰ型与基因Ⅲ型的方法,根据基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的保守序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1、P3和P2、P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型与Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并用建立的方法对27份临床样品进行了检测。结果显示,以设计合成的引物进行复合RT-PCR扩增,得到与基因Ⅰ型JEV预期相符的381bp的特异性条带,得到与基因Ⅲ型JEV预期相符的550bp的特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病病毒核酸的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为1.0pg/μL和10pg/μL。利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品进行检测,结果5份为基因Ⅰ型,2份为Ⅲ型,与核苷酸序列分析结果一致。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于检测及鉴别基因Ⅰ型与基因Ⅲ型JEV。
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关 键 词: | 日本脑炎病毒 复合RT-PCR 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别 |
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