牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 董秀梅,朱远茂,蔡 虹,王 姝,吕 闯,马 磊,薛 飞.牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2014(6):617-623. |
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作者姓名: | 董秀梅 朱远茂 蔡 虹 王 姝 吕 闯 马 磊 薛 飞 |
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作者单位: | 东北农业大学动物医学学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室; |
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基金项目: | 国家科技支撑计划项目(2012BAD12B-03-3);家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目(SKLVEB2013KFKT015) |
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摘 要: | 根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。
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关 键 词: | 实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针 牛副流感病毒型 |
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