肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 |
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引用本文: | 李富祥,廖德芳,姚俊,熊和丽,李华春.肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学,2014(12). |
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作者姓名: | 李富祥 廖德芳 姚俊 熊和丽 李华春 |
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作者单位: | 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室; |
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基金项目: | 云南省重大科技专项(2012ZA017);云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目(云财教[2013]160号) |
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摘 要: | 为建立肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据肺炎克雷伯菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法与猪肺炎支原体、猪鼻支原体、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽胞杆菌、猪丹毒杆菌、奇异变形杆菌和化脓隐秘杆菌共15种细菌无交叉反应;标准品浓度在2.29×109~2.29×104 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.29×102 copies/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%。临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和检测快速的优点,可用于肺炎克雷伯菌感染的早期诊断、样品的快速检测以及肺炎克雷伯菌的定量分析。
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关 键 词: | 肺炎克雷伯菌 TaqMan荧光定量PCR SrRNA基因 早期诊断 定量分析 |
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