中医药干预肝纤维化TGFβ1和(或)Smad信号通路研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)的发生是由于细胞外基质(ECM)的合成与降解的失衡.ECM主要来源于肝星形细胞(HSC),HSC激活并转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFB),后者可大量合成ECM,而ECM的大量沉积最终导致了HF形成.转化生长因子β(TGFβ)是一类调节细胞生长和分化的多肽,具有活化HSC,促进肝脏胶原基因表达,促进ECM合成等作用,是目前公认的最重要的致HF的细胞因子之一[1-2].     

基质金属蛋白酶与中医药抗肾纤维化的研究进展

肾脏疾病发展到慢性肾功能衰竭的晚期时,均会出现肾脏的纤维化[1]。肾纤维化(包括肾间质纤维化和肾小球硬化)的发生机制与多种因素有关,如细胞增殖失调、细胞间质代谢失调、细胞外基质分解合成失衡以及多种细胞因子的调控。MMPs作为肾脏内主要的基质降解体系之一,能够降解细胞外基质中多种胶原与非胶原成分,在肾纤维化过程中发挥重要作用。随着研究的进一步深入,证实中医药抗纤维化的作用与影响MMPs表达有关。1 MM P s家族1.1 MMPs分类依据其作用底物不同可分为五类:(1)胶原酶类,包括MMP-1、MMP-8、MMP-13;主要水解底物是纤维性胶…     

软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响

目的:研究软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响,以探讨软肝冲剂促进肝细胞再生及阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制.方法:复制免疫性肝纤维化动物模型,采用Rennard方法检测大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量.结果:模型组大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量明显增加,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01);中药软肝冲剂和西药秋水仙碱能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且中药高剂量组优于中药低剂量组和西药秋水仙碱组(P<0.05或P<0.01);中药低剂量组与西药秋水仙碱组比较,差异无显著性(P>0.05).结论:软肝冲剂能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,以促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成.     

中医药治疗脂肪肝的临床与实验研究进展

脂肪肝是由于多种原因引起的肝脏脂肪性病变.当肝细胞内脂质蓄积超过肝湿质量的5%,或组织学上每单位面积出现1/3以上肝细胞脂变时,称为脂肪肝.近年来,由于生活习惯、饮食结构等多数因素的影响,脂肪肝的发病率呈逐年上升趋势.部分脂肪肝患者可发展为肝纤维化,甚至肝硬化,可以认为脂肪肝是肝纤维化及肝硬化的前期病变.目前运用中医药治疗脂肪肝受到人们的重视,并取得了较好的效果.     

灵芝孢子粉对四氯化碳致大鼠肝硬化的干预作用

目的:观察灵芝孢子粉对肝硬化大鼠脏器指数及肝组织形态的影响.方法: 80只健康SD大鼠被随机均分为4组, 即空白对照组、模型组、灵芝孢子粉低剂量组、灵芝孢子粉高剂量组.除空白对照组不做处理外,其他各组采用四氯化碳菜籽油溶液复制模型,模型复制同时灌胃给予灵芝孢子粉混悬液,连续8周后测量肝脾湿质量,取肝左叶制备切片用于苏木精-伊红染色.结果:①与空白对照组比较,模型组体质量显著降低(P＜0.05),肝湿质量、肝指数、脾指数显著增加(P＜0.05);与模型组比较,灵芝孢子粉低、高剂量组肝指数显著降低(P＜0.05).②与模型组比较,灵芝孢子粉低、高剂量组肝脏汇管区有少量纤维组织增生,但未见假小叶结构.结论:灵芝孢子粉可以抑制四氯化碳对大鼠肝纤维化的作用.     

软肝饮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢水平的影响

目的：建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方软肝饮对血清层粘;连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、血清Ⅲ型前胶原(Precollagen typeⅢ,PCⅢ)、肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,软肝饮小剂量(1g／kg),大剂量(2g／kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药;放射性免疫方法测定大鼠血清中HA、LN、PCⅢ含量;化学法测定肝脏羟脯氨酸含量。结果：软肝饮两个剂量组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中HA、LN、PCⅢ的含量,同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。结论：软肝饮通过对肝脏胶原物质代谢的影响而产生抗肝纤维化的治疗作用。     

吴茱萸总生物碱对大鼠肝纤维化的防治作用

目的 研究吴茱萸总生物碱(total alkaloids of Evodia rutaecarpa,TAE)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)致大鼠实验性肝纤维化的防治作用,探索其作用机制.方法 采用40%CCl4皮下注射12周复制大鼠肝纤维化模型,检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST),层黏连蛋白(laminin,LN)、透明质酸(hayalurnic acid,HA)、Ⅲ型前胶原(precollagen typeⅢ,PCⅢ)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)水平,并对肝脏进行病理学检查.结果 模型组大鼠肝脏有明显胶原沉积、脂肪变性和肝纤维化,部分大鼠形成完整的假小叶;血清AIT、AST、MDA、SOD、LN、HA、PCⅢ和肝组织中Hyp含量明显高于正常组(P<0.05,或P<0.01).给药10周末,TAE 50,100mg/kg组肝小叶结构明显改善,脂肪变性减轻,胶原纤维间隔减少,ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ及肝组织中HYP水平明显下降.结论 TAE 50,100 mg/kg灌胃给药对CCl4致大鼠实验性肝纤维化有保护作用,其作用机制与抗脂质过氧化有关.     

丹参、黄芪注射液对肝硬化患者肝功能及肝纤维化血清学指标的影响

目的 :探讨丹参注射液和黄芪注射液联合治疗对肝硬化患者肝功能及肝纤维化血清学指标的影响。方法 :将 16 9例肝硬化患者按照随机原则分为 4组 ,对照组静滴甘利欣注射液 ,丹参组、黄芪组、联合组分别给予丹参注射液、黄芪注射液及丹参、黄芪注射液联合治疗 ,均以2 8d为 1个疗程。治疗前后分别检测肝功能丙氨酸转移酶、血浆白蛋白、血清总胆红素等指标和血清肝纤维化指标透明质酸、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量。结果 :丹参组、黄芪组、联合组患者的肝功能改善均优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中黄芪组和联合组血浆白蛋白明显高于丹参组(P <0 .0 5 ) ;丹参组、黄芪组、联合组患者的血清肝纤维化指标均明显降低 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,其中联合组降低的程度大于丹参组和黄芪组 (P <0 .0 5 )。结论 :丹参注射液和黄芪注射液对肝硬化患者肝功能及肝纤维化血清学指标均有一定的改善作用 ,联合使用效果更好。     

芦根多糖对四氯化碳致肝纤维化大鼠的保肝作用

目的：观察芦根多糖对四氯化碳(CCI4)致肝纤维化大鼠肝功能及病理形态学的影响。方法：以100ml／，LCCl4、花生油皮下注射13周复制大鼠肝纤维化模型，第5周开始以芦根多糖大剂量(420mg／kg)、芦根多糖小剂量(210mg／kg)连续灌胃9周，检测肝功能(ALT、AST、A、STP)、摘取肝脏称质量，计算肝脏系数，光镜下用苏木精-伊红染色及维多利亚蓝加丽春红染色，观察肝脏组织的病理形态学变化。结果：芦根多糖大、小剂量均可降低模型大鼠血清AST含量、芦根多糖小剂量能升高白蛋白与球蛋白(A／C)比值。光镜可发现芦根多糖大、小剂量组都对肝纤维化和脂肪肝有明显改善作用。结论：芦根多糖大、小剂量均可不同程度保护肝细胞，改善肝功能，降低肝脂肪化程度，抑制肝纤维化。     

322例慢性乙型肝炎患者肝脏病理与病毒学指标的相关性研究

目的 研究慢性乙型肝炎患者肝脏病理与肝组织中及血清病毒标志物等因素的相关性。方法 回顾322例HBsAg阳性超过6个月并行肝穿刺活组织检查患者的临床资料，分析肝脏病理与肝组织中病毒标志物、血清HBeAg状态、血清HBV DNA水平及血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）水平的相关性。结果 322例患者中，肝组织炎症分级（G）＞1且纤维化分期（S）＞1者314例，G≥3者44例，S≥3者40例。G与S呈明显正相关 (r=0.594，P<0.05)。 肝组织HBsAg、HBcAg不同表达状态患者，不同血清HBeAg状态患者，不同血清HBV DNA水平患者的肝脏炎症分级及其肝脏纤维化分期比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不同血清ALT水平患者的肝脏炎症分级比较，差异具有统计学意义（P<0.05），血清ALT水平与肝脏炎症分级呈正相关（r=0.322，P<0.05），而与肝脏纤维化分期的相关性无统计学意义(r=0.267，P>0.05)。结论 慢性乙型肝炎患者的肝脏炎症及纤维化程度与肝组织中病毒标志物、血清HBeAg状态、血清HBV DNA水平并无明显相关性，其炎症分级与血清ALT水平呈明显正相关。     

表儿茶素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用

目的 研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法 将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组（0.1 mg/kg）、表儿茶素高剂量组（100 mg/kg）、表儿茶素低剂量组（25 mg/kg）。除正常对照组腹腔注射橄榄油外，其余各组均腹腔注射四氯化碳（CCl4） 建立肝纤维化模型。复制模型的同时开始给药，各给药组大鼠灌胃相应药物，正常对照组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水，每日1次，连续6周。末次给药后，称取肝湿质量，计算肝脏指数；采用微板法检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT)水平；苏木精-伊红染色和Masson胶原染色观察肝脏病理学变化；Western blot法检测肝脏中平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin，α-SMA)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen，collα1)蛋白的表达水平。结果 与模型组相比，表儿茶素能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST的含量；显著降低肝组织中α-SMA、collα1蛋白的表达；肝组织病理学指标明显改善。结论 表儿茶素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有一定的保护作用，其机制可能与抑制α-SMA、collα1的表达有关。     

抗纤软肝汤治疗乙型肝炎肝纤维化21例

目的:观察抗纤软肝汤抗肝纤维化的临床疗效.方法:将40例慢性乙型肝炎患者随机分为治疗组(21例)和对照组(19例),对照组用齐墩果酸、西利宾胺和维生素C治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用抗纤软肝汤,并将两组的治疗效果进行比较.结果:治疗组在改善肝功能、降低血清肝纤维化指标(HA、LM、PCⅣ)和总有效率等方面明显优于对照组(P＜0.05或P<0.01).结论:抗纤软肝汤通过降低肝纤维化指标,改善肝功能,达到逆转肝纤维化的目的.     

慢性乙型病毒性肝炎患者血清TGFβ1水平和肝脏纤维化程度关系

目的:研究慢性乙型病毒性肝炎患者血清转化生长因子-β1(TGFβ1)水平和肝脏纤维化程度关系。方法:应用双抗体夹心ELISA法检测慢性乙型病毒性肝炎患者血清中TGFβ1含量,同时应用针刺活检患者肝脏组织,行常规苏木精-伊红染色及Masson三色染色法进行染色,判断肝脏标本的纤维化改变程度。分析二者关系。结果:慢性乙型病毒性肝炎病人血清TGFβ1在肝纤维化的S0、S1、S2、S3、S4期分别为(14.66±5.40)、(20.58±3.78)、(24.91±4.42)、(29.23±6.46)、(28.17±6.53)ng/m l;对照组为(16.20±4.35)ng/m l。对照组与S0组相比,两组数据之间差异无统计学意义,与S1、S2、S3、S4组相比,差异均有统计学意义;S3与S4两组数据相比,差异无统计学意义。结论:血清TGFβ1水平对早期判断肝纤维化具有临床意义。     

芦根多糖保肝作用及抗肝纤维化的研究

目的:观察芦根多糖对肝纤维化的作用,探讨可能的抗肝纤维化的作用机制。方法:以CC l4、花生油(1∶9)皮下注射13周复制大鼠肝纤维化模型,以芦根多糖大剂量(420 mg/kg)、芦根多糖小剂量(210 mg/kg)连续灌胃9周。检测唾液酸(SA)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。摘取肝脏,电镜下观察病理形态学变化。结果:芦根多糖大剂量可降低模型大鼠肝组织Hyp含量和组织中MDA含量;芦根多糖小剂量可降低模型大鼠血清SA和MDA含量,升高模型大鼠血清GSH-Px及血清和组织中SOD活性。电镜下芦根多糖大、小剂量组对肝细胞都有保护作用。结论:芦根多糖大、小剂量均可保护肝细胞并有抗氧化作用,大剂量还可降低胶原含量。提示芦根多糖可通过抗氧化、保护肝细胞、抑制胶原沉积等途径来抑制肝纤维化。     

护肝片对纤维化肝组织TGFβ1Ⅰ型受体表达的抑制作用

目的:观察护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1I型受体(Tβ1RⅠ)蛋白及其mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,用免疫组化S-P法检测大鼠肝组织Tβ1RⅠ蛋白的表达;用原位杂交检测Tβ1RⅠmRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对Tβ1RⅠ蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均显著高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组Tβ1RⅠ蛋白及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);其蛋白和mRNA的表达相互间均呈显著正相关(P<0.01).③除13周 Tβ1RⅠ蛋白外,护肝片均显著抑制模型复制8周和13周后纤维化肝组织Tβ1RⅠ蛋白及其mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制Tβ1RⅠ的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

四氯化碳肝纤维化大鼠的Ⅳ型胶原水平和超微结构的动态变化

目的：观察四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠的Ⅳ型胶原水平和超微结构的动态变化。方法：采用CCl4后腿皮下注射复制大鼠肝纤维化模型。结果：模型组大鼠病理片呈肝纤维化变，贮脂细胞增生活跃，有较大量的Ⅳ型胶原沉积。超微结构可见大量的胶原纤维生成和成纤维细胞。结论：CCl4肝纤维化大鼠3周的胶原沉积量并不高，6周起胶原纤维沉积量逐渐增大，并向肝细胞延伸。从9周开始分割肝小叶，在第12周已有假小叶生成。     

肝纤愈对免疫性肝纤维化大鼠肝功能及组织病理学改变的影响

目的:建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方肝纤愈(GXY)对肝纤维化模型动物肝功能指标及肝组织病理学的影响。方法:在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,GXY小剂量(6.1g/kg)、大剂量(12.2g/kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药。测定大鼠血清中ALT、AST、TP、Alb含量;光镜、电镜观察肝组织病理学改变。结果:GXY(大)组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中ALT、AST的含量,升高Alb的含量,同时可改善实验大鼠生存质量,且可显著改善肝组织病理学。结论:GXY具有明显的抗肝纤维化作用。     

儿童脂肪肝的防防治

儿童脂肪肝是肝脏对脂肪不能正确及时处理,使脂肪在肝脏上堆积而导致的一种病症。患儿大多无明显自觉症状,常在体检时被发现,或仅有食欲不振、腹部不适、易患口舌炎、乏力、疲劳、肝区或右上腹隐痛等症状。脂肪肝虽然是良性病变,但如不采取有效措施,可能会增加患动脉硬化、脂肪性肝硬化、高血压等顽固性疾病的危险。     

护肝片对纤维化肝组织TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自模型复制之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921 mg/kg)或溶媒,每日1次,直至8,13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片.免疫组化S-P法检测大鼠肝组织TGF-β1蛋白的表达;原位杂交检测TGF-β1 mRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对TGF-β1蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组TGF-β1及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);且其蛋白和mRNA的表达相互间呈显著正相关(P<0.01).③护肝片显著抑制8,13周纤维化肝组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制TGF-β1的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

针灸对克罗恩病大鼠结肠胶原合成及TGFβmRNA表达的调节

目的：观察针灸对克罗恩病大鼠结肠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白合成及转化生成因子-β(TGFB)mRNA表达的影响。方法：在建立克罗恩病大鼠模型基础上，进行针灸治疗。采用免疫组织化学方法检测各组大鼠结肠黏膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原表达；用RT-PCR方法检测各组大鼠脾脏、结肠组织TGFβ mRNA达情况。结果：与正常组大鼠比较，模型组大鼠结肠I、Ⅲ、Ⅳ型胶原及脾脏、结肠TGFβ mRNA表达均异常升高，隔药灸治疗可明显抑制克罗恩病大鼠纤维化进程，降低结肠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及脾脏、结肠TGFBβ mRNA表达。结论：结肠组织纤维化是克罗恩病大鼠的主要病理表现之一，隔药灸治疗大鼠克罗恩病肠纤维化的可能机制是通过下调克罗恩病大鼠结肠TGFβ mRNA过度表达，从而阻断或抑制细胞外基质(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原)的合成，促使其组织结构与功能改善。