脑络欣通对脑缺血再灌注模型鼠神经细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的: 研究脑络欣通对脑缺血再灌注模型鼠神经细胞凋亡及P53蛋白表达的影响.方法:采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复制大鼠气虚血瘀证模型,然后用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉2 h,复制局灶性脑缺血再灌注模型,于再灌注1,3 d,用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑缺血半暗带凋亡细胞和P53蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组脑缺血半暗带的凋亡细胞和P53蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论:抑制P53蛋白的表达是脑络欣通抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一.     

缺血性脑损伤神经干细胞与突触可塑性研究进展

脑血管疾病是目前人类三大死因之一,也是致残的主要原因,存活者中50%～70%严重致残,其中缺血性脑血管疾病约占80%[1].虽然超早期溶栓和急性期神经细胞保护取得了重要进展,但对于大多数脑缺血患者而言,神经细胞死亡不可避免,如何积极有效地促进脑缺血损伤后神经细胞的恢复仍然是目前研究的重点.     

中医药对脑缺血凋亡相关基因表达的影响

1972年,Kerr等首次根据细胞的超微结构特征将细胞死亡形式分为凋亡和坏死.1980年,Wyllie首次诱导多细胞动物体外细胞发生凋亡.凋亡是指细胞主动死亡方式,与细胞坏死的区别在于发生凋亡的细胞周围无炎性反应.凋亡初期,细胞核内染色体凝缩并沿核膜形成月牙形团块,细胞质开始浓缩,但各种细胞器,如线粒体、内质网等均正常;中期,染色体进一步固缩成形态规则的数个紧密小球,细胞核裂解为碎片,每个碎片由基本完整的核膜包裹着染色体小球组成.细胞质浓缩,内质网解体,线粒体略有肿胀,细胞膜皱缩.末期,细胞通过"出芽"离散为数个"凋亡小体",每个小体中含有部分细胞质,残存细胞器和一定量的核碎片,并由细胞质膜紧紧包裹.细胞在凋亡过程中,细胞内的细胞器不发生裂解,细胞内容物亦不外漏,而是通过启动特定的基因,使原来完整的细胞膜向外皱缩形成凋亡小体,巨噬细胞或邻近的细胞吞噬这些凋亡小体进入体循环.     

黄芪对脑缺血后细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨黄芪对脑缺血后脑细胞凋亡相关基因的表达的影响。方法：用结扎双侧颈内动脉的方法复制脑缺血模型，免疫化和流式细胞仪分别检测bcl-2,p53免疫阳性细胞和凋亡细胞。结果：结扎双侧颈内动脉后，脑局部血流量下降，脑皮质促凋亡基因表家明显增强，但未出现凋亡群体细胞。通过腹腔注射黄芪注射液后可抑制p53表达、增强bcl-2表达，结论：黄芪可抑制缺血区促凋亡基因的表达，增强抑凋亡基因的表达。     

电针治疗脊髓损伤机制研究进展

脊髓损伤近年来发病率为(20～40)/百万,其所致的截瘫是一种比较常见的严重伤残,常引起各种并发症,甚至死亡,给人们的生产、生活带来一定负面影响.其治疗,目前尚无特效方法.而中医在这方面却有一定优势.针灸通过调节细胞因子、神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs)、细胞凋亡基因、Nogo蛋白、钙离子等影响因素,对于脊髓损伤恢复有肯定的促进作用.同时在改善膀胱功能障碍等并发症方面有较好的疗效.在所有被用来治疗脊髓损伤的针灸疗法中,电针治疗脊髓损伤在临床上取得比较满意的疗效,因此笔者拟对电针治疗脊髓损伤的作用机制研究做一综述.     

细胞凋亡及中医药相关研究进展

细胞凋亡及中医药相关研究进展李平刘俊（安徽省立医院中医科合肥２３０００１）关键词：细胞凋亡；发病学；综述中图法分类号：Ｒ３６３．２细胞的分裂、增殖与细胞主动死亡之间的平衡是生物体维持正常结构与功能的重要保证，细胞的主动死亡即细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓ...     

中药诱导肝癌细胞凋亡

凋亡(apoptosis)一词由Kerr于1972年首先提出.细胞凋亡是指在特定时空中发生的、受机体严密调控的细胞"自杀"现象,它呈现其独特的、有别于细胞坏死的形态学和生物化学特点,被普遍认为是有机体维持个体内稳态恒定的极其重要的机制之一.它与有丝分裂相反而又互补,并共同参与调控细胞群落、细胞数量的恒定,其调控机制的失常则是包括肿瘤在内的一系列疾病的产生根源.因此,细胞凋亡已成为当前细胞生物学,尤其是肿瘤学基础与临床研究的前沿与热点.近年来,有关中药诱导肝癌细胞凋亡的研究报道逐年增多.作者简介:李柏(1964-),男,博士研究生,副教授.     

脑络欣通对脑缺血再灌大鼠神经细胞凋亡率及NMDAR蛋白表达的影响

目的:研究脑络欣通对气虚血瘀脑缺血再灌注模型鼠神经细胞凋亡率及N 甲基 D 天冬氨酸受体(NMDAR)蛋白表达的影响.方法:采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复制大鼠气虚血瘀模型,然后用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉2 h再灌注6,24,72 h,复制局灶性脑缺血再灌注模型,用流式细胞仪和免疫组化法分别检测缺血半暗带神经细胞凋亡率和NMDAR蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组神经细胞凋亡率和NMDAR蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论:脑络欣通抑制NMDAR蛋白表达,是其抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一.     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 研究丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.方法 以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1～100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达.结论 在0.1～100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关.     

天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的 研究天麻素（gastrodin,Gas）通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法 建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果 天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1~10 μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论 天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。     

桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用

目的 观察桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用。方法 采用氧-葡萄糖剥夺再恢复的方法诱导脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, BMECs）和PC12细胞共培养体系的缺糖缺氧再灌注损伤模型,并通过流式细胞仪检测PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,采用Western Blot法检测Bcl-2、Bax和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的表达水平。结果 桃红四物汤促进PC12细胞的活力,抑制细胞凋亡和ROS的产生,抑制MDA的活性,增强SOD和GSH-Px的活性,上调HIF-1α和Bcl-2的表达并下调Bax的表达。结论 桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抗氧化作用有关。     

2例合并死因的死亡性质判定

致命性的疾病和损伤是导致死亡的常见原因,两种以上原因同时起到致死的作用,可称为合并死因[1]。在多种原因致死的案例中其死亡性质的判定,有其复杂性,笔者在检案实践中遇到两例,现报道如下。     

电针对大鼠脑缺血致胃粘膜损伤的保护作用

建立大鼠脑缺血１ｈ后所致胃粘膜损伤模型，通过测定大鼠组织血流量、胃粘膜血流量、胃粘膜损伤指数，血液、胃粘膜和脑组织中一氧化氮含量，研究 对大鼠脑缺血后胃粘膜损伤的保护作用。     

冠心病心肌细胞亡及中药对其影响

1972年,Kerr和Wyllie等首次提出细胞凋亡(apotosis)以来,凋亡逐渐成为近年来生命科学的研究热点.随着分子生物学、细胞生物学、心血管病学、中药药理学等研究进展,已证实了细胞凋亡现象广泛存在于心血管系统的许多生理、病理过程中,并为进一步寻求中医药、中西医结合对心血管疾病的生物学防治提供了新的思路.笔者就中药(包括单体、复方、植物提取物等)对冠心病心肌细胞凋亡的影响综述如下.     

艾灸预处理对心肌缺血再灌注大鼠细胞凋亡及HSP70 mRNA表达的影响

目的:探讨艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法:利用大鼠心肌缺血再灌注模型,观察艾灸预处理组(分为艾灸每日1次组和艾灸每日2次组)、缺血预处理组、单纯模型组、假手术组和正常对照组大鼠细胞凋亡及热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)mRNA表达的情况.结果:艾灸预处理组细胞凋亡降低,HSP70 mRNA表达增加,且与艾灸预处理的次数有相关性.艾灸预处理每日1次与缺血预处理预防心肌缺血再灌注损伤的效应无显著性差异,艾灸预处理每日2次组优于缺血预处理组.结论:艾灸预处理对心肌细胞缺血再灌注具有保护作用,其效应与每日艾灸次数有关.     

原花青素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制研究

目的:探讨原花青素在体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制.方法:体外培养人前列腺癌PC-3细胞株,用100,200,300μg/ml原花青素作用24 h.荧光素标记的连接素V(An-nexin V-fluoresein isothiocyanate,Annexin V-FITC)和碘化吡啶(propidium iodide,P1)双染检测原花青素对PC-3细胞凋亡的影响,采用流式细胞术检测以不同浓度原花青素作用后PC-3细胞线粒体膜电位(△ψm)的变化.结果:100μg/ml原花青素作用细胞24 h,5.64%的细胞出现早期凋亡,84.7%的PC-3细胞呈现线粒体膜电位降低;300μg/ml原花青素组PC-3细胞凋亡率和坏死率分别为44.86%、50.81%.结论:原花青素可在体外诱导PC-3细胞凋亡,其机制与降低线粒体膜电位有关.     

人参川芎嗪注射液对局灶性脑缺血大鼠血浆t-PA含量及活性、PAI-1含量、脑组织形态学的影响

目的:复制局灶性脑缺血大鼠模型,研究人参川芎嗪注射液对局灶性脑缺血大鼠血浆纤溶指标及脑组织形态学的影响.方法:通过电凝大脑中动脉复制大鼠脑缺血模型,设立假手术组、模型组、川芎嗪注射液组、人参川芎嗪注射液组,观察大鼠脑梗死后的血浆纤溶指标,光镜下观察脑组织形态.结果:人参川芎嗪注射液能显著提高局灶性脑缺血大鼠血浆组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)含量及活性,降低脑缺血纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)含量,效果优于川芎嗪.结论:人参川芎嗪注射液通过提高血浆t-PA含量及活性,降低PAI-1含量对局灶性脑缺血损伤起到良好的干预作用,优于临床川芎嗪注射液.     

黄芩苷诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡作用的研究

目的:探讨植物雌激素结构类似物黄芩苷诱导人乳腺癌雌激素受体阴性细胞株MDA-MB-231(ER-)凋亡的作用.方法:MTT法测定不同剂量黄芩苷对MDA-MB-231细胞株增殖的抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡及黄芩苷的作用;流式细胞术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞周期变化的影响;RT-PCR技术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞bcl-2、bax mRNA水平表达的影响.结果:在一定剂量范围内,黄芩苷对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用呈时效、量效关系,IC50为151 μmol/L;透射电镜结果显示黄芩苷作用细胞48 h后出现明显的凋亡现象,流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率随着黄芩苷的浓度增加而增大,并阻滞细胞于G2/M期;RT-PCR结果表明,黄芩苷作用细胞后bax mRNA水平的表达增加而bcl-2的表达降低. 结论:黄芩苷可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡的发生,可能是通过调节bcl-2、bax的表达和干涉细胞周期而发挥诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用.     

针刺对大鼠局灶性脑缺血后脑电变化的影响

应用热凝法阻断大鼠一侧在脑中动脉形成局灶灶性脑缺血模型，应用反映脑缺血、缺氧及脑功能的灵敏的脑电图为指标，观察电针督脉“大椎”、“百会”八对大鼠局灶性脑缺血前、后脑电的影响，探讨针剌对局灶性脑缺血后神经元损伤的保护作用。结果表明：在轻主麻醉下，正常大鼠两侧额顶区脑电图基本是对称的，幅值、频率和波形基本相等、似，用热凝法阻断一侧大脑中动脉后，损伤侧脑电民前和对侧建侧相比，脑电幅值明显下降，为原水平３     

益气活血方与补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带形态学影响

目的 观察益气活血方(脑络欣通)和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带形态学的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血方组及补肾生髓方组.采用线栓法复制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,分别再灌注1,2,3周,采用苏木精-伊红、Spoerrl染色法观察缺血半暗带形态学变化.结果 苏木精-伊红染色示再灌注3周时模型大鼠缺血半暗带神经细胞变性坏死严重,可见核浓缩现象与胶质细胞增生及少量淋巴细胞浸润.两种中药复方在再灌注3周时,缺血半暗带神经细胞变性坏死减轻,胶质细胞增生不明显,可见少量核浓缩现象.Spoerrl染色示神经细胞突触呈蓝红色,模型组神经突触阳性总面积单位显著减小(P<0.01);再灌注各时间点,两种中药复方组神经细胞突触阳性总面积单位较模型组显著增多(P<0.01);再灌注2周补肾生髓方组比益气活血方阳性染色面积显著减少(P<0.01).结论 益气活血方与补肾生髓方通过减轻缺血半暗带区神经细胞突触损伤或促进神经细胞突触再生,提高中枢神经系统可塑性,抗脑缺血损伤.