HLA-DQ_α基因的PCR扩增分型技术在88例刑事案件物证检验中应用的回顾

自从PCR（聚合酶链反应）技术问世以来，已有许多基因位点的分型系统开始应用于法医物证的DNA分析[1]，其中应用最为广泛，技术最为成熟的则是HLA－DQ。基因分型系统。此系统应用PCR技术扩增HLA－DQα基因特异片段，结合等位基因特异性寡核着酸（ASO）探针杂交技术检测HLA－DQα位点的四个等位基因，具有特异性好、灵敏度高、结果稳定、准确可靠等优点。本文应用姜先华等人[2]报告的方法，对88例刑事案件的物证进行了HLA－DQα基因的PCR扩增与分型。现报告如下：材料和方法一、检材233份检材来自于全国十九个省市送检的88例刑…     

中国北方汉族人群HLA-DQα基因型及其等位基因频率的分布

应用PCR和等位基因特异性寡该苷酸（ASO）探针杂交技术对中国北方汉族人群的HLA－DQα基因进行分型。在246例无关个体中观察到4种等位基因组成的10种基因型。等位基因频率分布在10．0～31．9％之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律。DP值为0．8669。对6个家系49个个体的调查表明，HLA－DQα基因按孟德尔方式遗传。不同人群HLA－DQα的DP值比较，中国人群高于其它人群。     

用PCR-SSCP法进行亲子鉴定及个体识别

HLA－DR位点是一个具有高度遗传多态性的基因位点。到目前为止已发现其具有68个等位基因，此外还有7个假性基因。从国内外DRll基因频率调查来看，各基因频率的分布比较均衡。因此通过检测HLA－DRB基因位点进行亲子鉴定能获得较高的父权排除率，进行个体识别时能达到较高的个体识别率。以往用RFI，P（限制性片段长度多态性）或SSO（序列特异性寡核着酸）方法进行HI，A－DRB基因的定型所需时间较多，而且不能同时对其假性基因进行分析。根据单链构象多态性（polymerasechainreaction－singlestrandconformatlonPoly－mornhism，PC…     

PCR-SSP法检验HLA-DRB基因多态性的法医学应用

HLA是迄今发现的最复杂的人类遗传标记，具有高度多态性。由于用传统的淋巴细胞毒试验检验HLA分型，对检材要求很高，因此很难应用于法医学领域中。随着分子生物学技术的迅猛发展，HLA分型已深入到基因水平。国内陆续研究报道了应用PCR一特异性寡核着酸探针（SSOP）及PCR-单链构象多态性（SSCP）对HLAⅡ类抗原的DQ－A及DQ－B等位基因进行分型，使HLA在法医学中的应用成为现实。本文应用1992年瑞典Olerup和Zetterquist首创的PCR-序列特异引物（PCR-SSP）方法对HLA－DRB基因分型在法医学中的应用进行了初探，认为在法医…     

PM+HLADQA1位点扩增分型技术的应用

多标记系统（polymarker、PM）位点检测技术包括有低密度脂蛋白的受体（LDLR）、血型糖蛋白A（GYPA）、血红蛋白G球蛋白（HBGG）、型特异性成分（GC）及D７S８等５个位点,分别位于第１９、４、１１、４、７号染色体上。HLADQA１位点位于HLAⅡ类基因HLA－DQ亚区中的DQA１基因座,在其第三个外显子中存在一个等位基因变异区,该区经克隆和序列分析已确定有８个等位基因。PM系统和HLADQA１可用PCR反向斑点印迹杂交技术进行检测,由PE公司生产的PM＋HLADQA１试剂盒正是采取以上PM与HLADQA１位点联合扩增技术使在同…     

回族和维吾尔族人群HLA-A、HLA-B多态性调查

人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）存在于人体有核细胞的表面,在不同种族、不同个体间呈现高度多态性。HLA个体遗传学差异的本质是在编码其抗原产物的基因水平上,因此HLA基因型检测优于血清学和细胞学方法,能直接从基因水平反映HLA的多态性。     

生物素掺入反向杂交法在法医学中应用的研究

建立了一套快速、准确检测人类 HLA－ DQA基因的反向杂交检测技术,可准确判定 HLA－ DQA基因位点的 6个等位基因即 0101、 0102、 0103、 0201、 0301、 0401。调查了中国北方汉族人群中 200例无关个体的 HLA－ DQA基因频率及基因型的频率分布,杂合度 (H)为 0.75,个体识别能力 (DP)为 0.928。采用生物素直接掺入 PCR扩增的方法, 1ng的 DNA样品即可准确判型。对血液、血斑、精斑、精液与阴道液的混合斑、肌肉组织等检材进行检测,效果良好。在刑事案件及亲子关系鉴定中应用,准确地判定了检材的 HLA－ DQA基因型,为侦察破案提供了科学依据。将此项技术商品化,完成了试剂盒的研制。     

PCR法对HLA-DQ_α基因的分型及其在性犯罪鉴定中的应用

本文应用 PCR 法及 ASO 探针斑点杂交技术,对100例无关个体血液 DNA 及10例性犯罪案件混合斑中精子 DNA 进行了 HLA-DQα基因的扩增及其 DNA 分型。结果正常人0.1～0.3μgDNA 就能满足 DQα基因扩增的需要。在100例个体中可以观察到由4种等位基因组成的10种 DQα基因型。10例不同条件的混合斑中精子 DNA 经30～60次扩增后与 ASO 探针杂交均能准确地判定 DQα基因型。HLA-DQα是个体识别能力较强的遗传标志。本文为性犯罪中精子来源的个体识别提供了一个新方法,具有一定的实用价值。     

中国人pMCT118位点扩增产物HinfⅠ限制性片段长度多态性

pMCT118（又称DIS80）是一个高度多态性的VNTR位点（重复单位16bp，核心序列为GNNGTGGG），位于1号染色体上。用PCR方法分析其多态性，国内外已有报道ti，2］K。s。i等人（‘］通过对pMCTlls位点碱基序列进行分析，发现该位点扩增物正链5’端第61个碱基由C转换成T，引入了Hinfl的酶切位点，使其产生了两种多态性Hinfl十和Hinfl－。本文对中国人pMCTlls位点扩增产物Hinfl限制性片段长度多态性进行了研究，现报告如下。材料与方法1．样品48例中国人无关个体血样由本实验室日常积累，DNA提取用Chelex快速提取法［’］。2．pMC…     

VNTR遗传标记的亲权鉴定研究

采用Amp－FLP技术研究人类血液、组织VNTR位点D1S80（pMCT118）、D17S30（pCNZ－22）和ApoB3’位点的遗传多态性，并应用于亲权鉴定案件，获得满意结果。D1S80、D17S30和ApoB3’的DP值分别为0．962、0．956和0．960，累积父权排除率（EPP）为94．51％，远远高于传统血型的DP值和EPP值，是亲权鉴定和个体识别有效方法。     

中国汉族人群 8个 STR位点荧光标记同步检测及其频率分布

目的 对血液等微量生物学检材进行 8个 STR多态性位点及一个性别鉴定位点的复合检测 ,并调查了 350名中国汉族无关个体上述基因位点等位基因分布情况。方法 所选位点为 vWA、 TH01、 TPOX、 CSF1PO、 D5S818、 D13S317、 D7S820、 D16S539及性别鉴定位点 Amelogenin,应用荧光染料标记引物,利用 PE－ 377 DNA片段分析仪对扩增产物进行基因分型。结果 共检出 63个等位基因及两个性别决定基因 ,总鉴别机率（ TDP）值达 99.999 999 98％,对法医学常见极微量生物学检材的检测获得成功, DNA模板需要量为 0.5～ 1.0ng,通过家系调查,证明上述位点遗传稳定,符合孟德尔遗传规律。结论 上述 8个 STR多态性位点具备了个体认定能力 ,是对微量生物学检材进行个体识别鉴定的理想方法。     

中国北方汉族群体TPH基因座T3792A位点遗传多态性

目的研究中国北方汉族群体色胺酸羟化酶（TPH）基因座T3792A位点的遗传多态性及其法医学应用价值。方法应用等位基因特异性PCR的方法，检测173例中国北方汉族无关个体TPH基因座T3792A位点的遗传多态性。结果TPH基因座T3792A位点在中国北方汉族群体中的多态性分布符合Hardy—Weinberg平衡定律，等位基因A及T的频率分别为0．486和0．514。结论TPH基因座T3792A位点具有较好的遗传多态性．可应用于个体识别与亲权鉴定。     

HLA-A位点DNA分型及其法医学应用

应用聚合酶链反应0寡核苷酸探针（PCR－SSO）斑点杂交技术，对222名辽宁地区汉族人群无关个体进行HLA－A基因检测，研究中国辽宁地区汉族群体的HLA－A座位基因分布状况。共检出HLA－A等位基因24个，其中以等位基因HLA－A0201最为常见，频率为0．2635；依次是2402101和1101，等位基因频率分别为0．1847和0．1262.理论杂合度为87％，个人鉴别机率为92％，非父排除率为73．3％。在中国辽宁汉族中检出73种基因型，对观察值和期望值进行X2检验，符合Hardy－Weinberg平衡定律（x2＝6．28，df＝9，0．5＜P＜0．75）。家系分析结果表明按照孟德尔方式遗传。提出的中国辽宁汉族HLA－A等位基因的遗传基因情况，可用于法医学个人识别和亲子鉴定。人类学，HLA相关疾病，及器官移植研究。     

单核苷酸多态性与DNA芯片技术在法医学中的应用

８０年代中期,Jeffreys建立的DNA指纹技术是法医学DNA分型的里程碑。针对人类基因组小卫星VNTR位点靶序列作RFLP分析,获得高度个体特异性DNA指纹图,使法医学第一次能够作出认定同一性,认定亲生关系的鉴定结论。此为第一代法医DNA分型技术。８０年代后期,Mullis建立PCR技术,以基因组内STR位点多态性位点为靶序列作PCR扩增,利用电泳分离,分析STR位点多态性。PCR－STR分型结合了PCR高效扩增和STR位点高度多态性的特点,成功地解决了检测灵敏度问题,采用复合扩增多STR位点的办法,鉴别能力达到或接近DNA指纹水平…     

DNA芯片技术检测HLA-DRB1和ABO基因型

用DNA芯片技术检测HLA-DRB1-ABO基因型。根据HLA和ABO不同基因亚型的独特序列设计探针,制成分型芯片;待检测样品经PCR反应标记上荧光之后,与探针在芯片上进行杂交,通过对杂交产生的荧光信号值进行分析,确定样品DRB1位点和ABO位点的基因亚型。将这一方法应用于111份样本的HLA-DRB1-ABO基因分型并将部分样品进行基因测序。检测结果证明本实验研制的HLA-DR-ABO基因分型芯片可准确分辨出DRB1位点30个等位基因、ABO位点6种基因型。该方法分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便,对比常规的PCR-SSP方法,HLA-DR-ABO基因芯片方法更为直观,并具有集成化优势,可以在一张芯片上同时检测HLA和ABO位点,并实现一张芯片多人份,不仅适用于法医学亲子鉴定和个体识别,亦可应用于移植配型、HLA相关疾病及人类遗传学研究。     

解读“生命天书”的攻坚战——攻克“法医学DNA芯片”

上海，光复西路的苏州河东畔，宋慈楼中。当“法医学DNA芯片技术研究”课题以全票通过验收的喜讯从会议室内传出时，静候佳音的全体课题组成员都忍不住欢呼起来。由公安部、司法部组织的、以杨胜利院士为组长的验收专家组，在评价意见中，有两段评价最为耀目——“……(课题组)选取了合适的多态性DNA位点用作中国人群的遗传学标志，自主设计了引物和寡核苷酸探针，应用和优化了微量DNA提取和复合扩增方法，编制了芯片分析软件，建立了HLA－DR、ABO、SNP位点的法医学芯片系统，比预计提前并超额完成了攻关目标，达到了国际先进水平。…     

采用Pyrosequencing和Pooling技术对SNP位点多态性分析

目的建立基于pyrosequencing和Pooling技术进行SNP位点的法医学多态性分析技术。方法对50名无关个体样本建立一适合pyrosequencing检测的组池;采用PyroMark Assay Design 2.0软件进行SNP位点等位基因定量分析的引物设计;对组池样本PCR产物进行焦磷酸测序检测。结果检测的3个SNP位点多态性良好,其中位点rs220028与以往人群调查后频率数据无显著差异。结论采用pyrosequencing和Pooling技术对SNP位点进行多态性分析,适合于位点的初筛及大规模群体调查。该技术准确可靠,方便快捷。     

ABO位点限制性扩增片段长度多态性的研究

建立了PCR扩增、限制性酶切、8％（T）、5％（C）聚丙烯酸胺凝胶垂直电泳和银染检测ABO位点的限制性片段长度多态性的方法体系。应用Amp-RFLP技术对185名中国人（哈尔滨）ABO位点的基因频率和基因型分布进行了调查和统计分析。ABO位点特异片段长度为140～200bp，基因频率为0．2000～0．5568。6种基因型频率为0．973～0．3135，杂合度0．5838，Dp值0．7146。经H－W平衡吻合度检测，完全符合群体遗传多态分布。通过对11个家庭33名相关个体的分析，证明完全符合孟德尔遗传定律。ABO基因型检验适用于法庭科学的个体识别和亲权鉴定。     

采用Pyrosequencing和Pooling技术对SNP位点多态性分析

目的 建立基于pyrosequencing和Pooling技术进行SNP位点的法医学多态性分析技术.方法 对50名无关个体样本建立一适合pyrosequencing检测的组池;采用PyroMark Assay Design 2.0软件进行SNP位点等位基因定量分析的引物设计;对组池样本PCR产物进行焦磷酸测序检测.结果 检测的3个SNP位点多态性良好,其中位点rs220028与以往人群调查后频率数据无显著差异.结论 采用pyrosequencing和Pooling技术对SNP位点进行多态性分析,适合于位点的初筛及大规模群体调查.该技术准确可靠,方便快捷.     

亲子鉴定DNA分型亲权指数的简化计算法

PCR扩增DNA片段长度多态性位点，如AmP－FLP、PCR－STR分型技术，在亲子鉴定中应用日益增加。由于被选择应用的DNA位点均具高杂合度、高非父排除率，以及PCR技术取材广泛、灵敏度高等特点，PCR－DNA分型有。逐步取代常规血型检测的趋势。PCR－DNA分型结果表明，杂合子个体呈2条片段，纯合于及条片段，等位基因为共显性遗传，位点均具有不连续基因频率分布。所以，亲权指数计算并不复杂。本文依据单位点DNA分型特发，根据Esse。M6ller计算理论，提出一套简明亲权指数计算公式。同时对父子单亲亲子鉴定的亲权指数计算公式也作…