鉴定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株的三种简便方法

本文报道了我们用玻片凝集、抗甘露糖血凝反应和发酵棉子糖等三种方法,对相同菌株进行试验的结果。证明这三种方法用于签定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株都是简便有效的。它们不但可用于仔猪腹泻病的流行病学调查,而且对这种传染病的免疫预防研究也有一定的意义。 (一)材料和方法 1.菌株:菌株及其来源列在表1。     

大肠杆菌K_(88)抗原分子遗传学研究近况

1961年Φrskov等发现在一次猪腹泻流行中所分离的大肠杆菌含有一种新的K抗原,称K_(88)抗原。K_(88)抗原是一种粘附因子,它使K_(88)阳性菌株附着于肠壁上而不被机体清除。已知K_(88)是一种蛋白质,其基因位于质粒上。以往预防大肠杆菌性腹泻大多采用死菌苗,但效果不够满意,随着分子遗传学及DNA重组技术的迅速发展,可望应用基因工程技术来构建高效、稳定和安全的大肠杆菌苗。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)LTB遗传工程苗田间试验

从1985～1990年,笔者试用5批仔猪大肠杆菌K_(88)工程菌活苗在河南、陕西等地的12个猪场进行预防仔猪大肠杆菌性腹泻的免疫效力观察,并对其经济效益进行了测算,效果令人满意。     

临产母猪注射大肠杆菌K_(88)-K_(99)抗原工程苗预防仔猪黄痢

1986～1987年,我们用中科院上海植物生理研究所与上海市嘉定县畜牧兽医站共同协作研制的大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗,在本场东风机械化养猪场、少平村、立新饲养场进行了预防仔猪黄痢试验,获得了一定的效果。 (一)材料和方法 1.大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗:中科院上海植生所研制,批号860715、870103;20％氢氧化铝生理盐水,农业部南京药械厂生产,批号8596029。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)遗传工程菌苗免疫途径和剂量的研究

将61头怀孕母猪分成5个组,给第Ⅰ组皮下注射K_(88)遗传工程菌苗500亿死菌,第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别口服1000亿、500亿和250亿活菌;第Ⅴ组不接种菌苗作为对照。结果各免疫组母猪所生仔猪的发病率明显下降,其中第Ⅲ组的免疫效果最佳。     

鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌的多重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)与禽非致病性大肠杆菌(avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本进行鉴定和分群。结果显示,该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107CFU/m L;对其他种属的4株革兰阳性菌和5株革兰阴性菌无扩增。检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立了多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株。初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性。结果表明,APEC检出率为100%,ANPEC的检出率亦为100%。以上结果充分说明本研究建立的多重PCR特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC与ANPEC的快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查。     

猪源脑心肌炎病毒GXLC株对仔猪的致病性试验

为研究猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株对仔猪的致病性,将其接种4周龄健康断乳仔猪,观察临床症状及病理变化,检测心、脑、脾组织及血清中的病毒含量,测定血清抗体效价,检测心、脑、脾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平。结果显示,仔猪感染后,出现体温升高、精神不振、腹泻等症状;剖检发现心包积液,心脏变软,脑充血;组织病理学观察发现心肌炎、脑炎,病理炎症分值显著提高;心、脑、脾、血清中均可检测到大量病毒;血清中出现高效价的中和抗体;感染仔猪心、脑、脾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平显著上调,而且细胞因子的表达高峰期与出现临床症状、病理损害的时间密切相关。表明,猪源EMCV GXLC株对仔猪具有致病性,IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子在EMCV对仔猪的致病过程中发挥重要作用。     

产肠毒素大肠杆菌K_(99)抗原纯化的研究

产肠毒素大肠杆菌K_99阳性菌株,在改良M培养基中于37℃振荡培养18～20小时,离心收集细菌,于4℃搅拌1小时使K_99纤毛(粘附抗原)从菌体上脱落,然后以差速离心去除菌体和大的细胞碎片。再以适当饱和度的硫酸铵沉淀纤毛抗原。最后经A—50离子交换柱层析纯化K-99纤毛蛋白质。纯化的K_99抗原在SDS聚丙酰胺凝胶电泳上呈现出一条蛋白带。以标准蛋白作标准曲线。测出其蛋白质亚单位分子量为18800,这与国外学者报导的18500的结果相符。纯化的K_99抗原在电镜下可见大量均质的柔软丝状的纤毛。K_99抗原是一个等电点为pH9.7的阳离子蛋白质,在我们做的pH8.6的琼脂糖电泳中其缓慢向阴极迁移。     

孕母猪初生仔猪口服大肠杆菌K_(88)ITB双价工程疫苗免疫效力对比试验

用K_(88)ITB工程活疫苗(1)给怀孕母猪组于预产期之前3周,每头口服500亿活菌;(2)给初生仔猪组于出生后24小时,每头口服25亿活菌。试验结果:免疫的怀孕母猪组与初生仔猪组的仔猪腹泻发病率分别比对照组的下降了46.5％和40.9％;两免疫组的仔猪死亡率分别下降了29.4％和25.6％。说明K_(88)疫苗给怀孕母猪接种,更实用且免疫效果更佳。     

K_(88)ITB双价基因工程活疫苗安全量的试验

为了探求用K_(88)-ITB工程菌活疫苗预防仔猪大肠杆菌性腹泻所用剂量的安全范围,特进行了下述试验。     

大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗对绵羊的安全性及免疫原性试验研究

用大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗,按100亿活菌/只剂量于产前6周给149只妊娠杂交绵羊皮下接种,有28.86％的羊只出现临床反应,但所有免疫母羊均正常分娩,其所产羔羊均发育正常。对免疫母羊所产羔羊(66只)吮吸初乳后,给口服250亿强毒菌攻击,死亡率为4.55％,其发生腹泻持续期平均为1.78天,排菌持续期平均为2.94天。与未免疫对照组比较,差异极显著。本试验初步证明该疫苗对绵羊的安全性与免疫原性良好.     

猪伪狂犬病病毒变异株R13028株生物学特性及致病性的研究

为了解天津地区猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的流行情况,2013年从疑似PRV病例中分离纯化获得一株野毒株(R13028株),对其gC基因进行测序及分析,并研究病毒的细胞增殖特性和致病性.结果 显示,R13028株与参考毒株相比在139位至189位缺失51 bp核苷酸,遗传进化分析显示该...     

大肠杆菌K_(99)全细胞苗的试制及其免疫效果

新生羔羊大肠杆菌病为肠道致病性大肠杆菌(简称EEC)引起的1～7日龄羔羊的传染病。此病在世界很多国家中流行,常造成重大经济损失,引起各国兽医界的重视。EEC具     

猪和野生动物源大肠杆菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测

对从四川省10个规模化猪场和16种野生动物的粪样中分离鉴定出的67株大肠杆菌、57株沙门菌进行了药敏试验。结果,猪源和野生动物源分离菌对磺胺类药物的耐药率分别为72.0%(72/100)和29.2%(7/24)。根据GenBank中登录的序列,设计了3对特异性引物,对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了三重PCR检测。在这124株细菌中,Sul1基因的检出率最高,为47.6%(59/124),Sul2基因的检出率为17.7%(22/124),Sul3基因的检出率为18.5%(23/124)。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为89.9%。     

肠毒性大肠杆菌K_(99)抗原和F_(41)抗原的纯化及特性分析

本文主要介绍了通过硫酸铵沉淀,脱氧胆酸盐处理,Spehadex G200凝胶过滤,SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)等方法分离纯化K_(99)抗原和F_(41)抗原,并对其部分特性予以描述,还制备了特异性抗血清。     

禽致病性大肠杆菌sfsA基因缺失株的构建及生物学特性的分析

为研究sfs A基因对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,利用Red重组方法构建禽致病性大肠杆菌APEC94株的sfs A基因缺失株,分析野生株与缺失株在生长特性、黏附和入侵D F-1细胞及生物被膜形成等生物学特性上的差异。通过动物试验,评价sfs A在APEC感染樱桃谷鸭过程中的作用。结果表明,sfs A缺失不影响APEC94菌株的生长特性和黏附、入侵DF-1细胞能力,但缺失株的生物被膜形成能力明显下降(P0.000 1)。动物试验结果表明,与野生株相比,sfs A缺失株在樱桃谷鸭肝中的细菌载量显著降低(P0.05),而在肾、脾和血液中无显著下降(P0.05)。结果显示,sfs A基因的缺失显著降低禽致病性大肠杆菌的生物被膜形成能力及其在肝中的细菌载量,推测sfs A基因可能参与APEC对宿主的致病性。     

闽西地区猪源大肠杆菌耐药基因bla_(CTX-M-9G)的流行性分析

为了解闽西地区猪源大肠杆菌耐药基因blaCTX-M-9G流行性以及对β-内酰胺类药物的耐药情况,以期为本地区抗菌药的合理应用提供依据。从闽西地区规模化猪场采集腹泻仔猪肛门拭子分离大肠杆菌,对分离株进行β-内酰胺类药物敏感性测定及耐药基因检测。结果显示,共分离大肠杆菌213株;分离株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋和头孢噻肟表现出较高的耐药率,分别为46.9%、44.1%、28.6%和23.9%;经耐药基因检测,bla_(CTX-M-9G)基因检出率为17.4%(37/213),在bla_(CTX-M-9G)阳性菌中还检测出qnrA(5.4%)、qnrB(37.8%)、qnrS(73.0%)、oqxA(70.3%)、oqxB(75.7%)及qepA(18.9%)等PMQR耐药基因,其中83.8%含有三种以上耐药基因,以携带blaCTX-M-9G+qnr S+oqx A+oqx B基因型最为流行,检出率为32.4%。闽西地区猪源大肠杆菌对β-内酰胺类药物表现出一定的耐药性,bla_(CTX-M-9G)耐药基因携带率较高,并且耐药基因bla_(CTX-M-9G)阳性菌中PMQR基因的携带率较高。     

致病性大肠杆菌O_(157):H_7基因分型的研究进展

就目前的大肠杆菌O157:H7基因分型方法进行了综述,将其归纳为3类:基于DNA的限制性酶切技术、基于特异靶标的PCR扩增技术、基于基因组特定位点的DNA多态性分析技术,阐述和分析了这些技术所涉及的方法和技术特点。认为,大肠杆菌O157:H7具有重要的公共卫生学意义,开展流行病学调查和病原溯源追踪是防控大肠杆菌病的重要手段,而基因分型是大肠杆菌O157:H7鉴定和示踪的重要技术。     

三种不同方法检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的比较

三种不同方法检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的比较吴斌陈焕春方六荣李学伍周复春洪文洲（华中农业大学畜牧兽医学院武昌４３００７０）伪狂犬病是由伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）引起的一种传染病，给养猪业带来巨大损失。对该病的诊断方法主要有病毒分离鉴定、动物接种试验、血清...     

四种方法治疗猪疥癣的比较

猪疥癣是一种以剧痒不安、湿疹性皮炎、脱毛为特征的体表寄生虫病,猪群一旦感染很难彻底根治,该病严重影响仔猪生长发育,给猪场带来较大经济损失。为探索理想的根治方法,笔者选择了阿福丁粉剂、全虫净混悬剂、阿维虫净浇泼剂、双甲脒乳油,对１３３头仔猪按规定剂量和用法使用,同时进行了疗效跟踪观察,取得理想的效果。１　材料与方法１．１　药品　阿福丁粉剂,北京农业大学新技术开发总公司生产,批号９８１０２３,含阿佛菌素１０ｍｇ／ｇ;全虫净混悬剂,上海神宝动物保健品厂研制,含阿佛菌素６ｍｇ／ｍＬ;阿维虫净浇泼剂,宜兴…