免疫组织化学染色法检测旋毛虫病的研究——组织切片间接免疫过氧化物酶染色法

旋毛虫病是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)引起的。成虫寄生于肠管,幼虫寄生于横纹肌。人畜均感染本病,感染来源于摄食生的或未煮熟的含旋毛虫包囊的猪肉,故肉品检验中将旋毛虫列为首要项目。以往采用的传统压片镜检法,漏检率较高;人工消化法操作复杂,需时较长,目前多数采用补体结合反应、凝集试验、血凝试验、免疫扩散、免疫电泳、皮内试验、絮状试验、环蚴沉淀反应、荧光抗体试验、放射免疫测定及免疫酶标技术等血清学方法检测旋毛虫病,仍不同程度存在着敏感性不高、特异性不强等缺点。为提供一种敏感、特异、稳定可靠的,能用于旋毛虫病流行病学调查和肉品检验的方法,我们开展     

Ⅰ型鸭肝炎病毒间接免疫酶染色检测方法的建立

以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV-Ⅰ抗体,建立了检测石蜡组织切片中DHV-Ⅰ抗原的间接免疫酶染色(indirect immunoperoxidase staining,IIS)方法,并对DHV-Ⅰ强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行了检测。结果表明,IIS与DHV-Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝等呈现阳性反应,与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝以及健康雏鸭的肝呈现阴性反应。感染DHV-Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝、脾、肾、心、胸腺、腔上囊、胰腺、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠的免疫组织化学检测呈阳性或强阳性,DHV-Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。该IIS法具有良好的特异性,可用于DHV-Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV-Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。     

组织切片间接免疫酶染色法诊断耕牛血吸虫病

Kamiya(1981)用福尔马林固定的组织切片作卵内沉淀反应(Intraovalprecipitation reaction),神谷晴夫等(1981)用福尔马林固定的组织切片作间接免疫过氧化物酶试验(Indirect immun peroxidase test,IIP),曾宪芳等(1984)用肝卵组织切片间接免疫酶染色法诊断人体日本血吸虫病,均获满意结果。但在耕牛血吸虫病诊断方面,却未见同类报道,随着我国血防工作的深入开展,耕牛血吸虫病的感染率和感染度都大大下降,迫切需要寻找一种理想的方法诊断耕牛血吸虫病,为此,我们采用肝卵切片免疫酶染色法诊断耕牛血吸虫病,并与环卵(COP)和间接血凝(IHA)作了比较,现将结果报告如下:     

免疫酶标记抗体诊断猪瘟试验

免疫酶标记抗体(直接法,以下简称酶标法)法诊断猪瘟和兔体交互免疫试验相比,具有省时、经济、不需特殊仪器等优点。但此种诊断方法是否有很高的特异性,且不受所接种疫苗的影响,能否适应在基层推广应用?为此,做了如下试验。     

口蹄疫病毒:蚀斑减少中和试验

对口蹄疫传播和发病机理的研究。需要一种定量测定某些体液的中和效能的方法,用以估价动物对感染或免疫的反应。通常这些研究需从每一动物采集大量的各种样品,包括血清,食道—咽液,鼻粘液和泪液。标准量病毒—变量血清(50％保护量,PD_(50))的乳鼠中和试验既费时间又昂贵。组织培养微量滴定技术效率较高,但是,对于中和效能极低的样品只能用低倍稀释液,这常常对所用的细胞系统产生有害影响。Capstick、Sellers和Sewtart三氏曾建议对口蹄疫病毒应用蚀斑减少中和(PRN)试验,但是缺乏有关应用于口蹄疫病毒     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击鸡的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原     

三联抗原酶免疫试验诊断血吸虫病的方法简介

近年来,在血吸虫病研究中,我们设计了一种由尾蚴、成虫及虫卵三者切片组成的联合抗原酶免疫染色法,兹简介如下。(一)材料和方法1.成虫—虫卵—尾蚴三联抗原切片的制备:(1)组织块制备:①用1500条日本血吸虫尾蚴感染家兔,45天后剖杀取肝脏,将其剪成约0.5cm~3的小块,用生理盐水洗净。②取一正常小鼠心脏,用手术刀剖开,在心脏片中划数条槽;将感染家兔时预留的(固定或未固定)尾蚴约50条用滴管滴在心脏内包裹,再用线捆扎。③另取一正常小鼠心脏,用同样方法剖开,内放3～5条血吸虫成虫包裹捆扎。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎（ＩＢ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１８０，酶结合物、抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母源抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１１日龄经ＩＢＶＨ１２０弱毒苗免疫雏鸡的抗体，其Ｐ／Ｎ值于免疫后第１８ｄ达峰值（３．７）。调查的５４群发病鸡，其抗体阳性率为１００％，Ｐ／Ｎ值为４．０～７．５     

应用免疫酶组化法及兔体交互免疫试验诊断猪瘟

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病,是对养猪业危害最大的传染病之一。本病的早期诊断对于及时地采取预防措施,以制止疫病的传播蔓延并迅速扑灭猪瘟,具有重要意义。典型猪瘟的诊断一般可根据流行病学调查、临床观察、血清学诊断和病理解剖变化,结合...     

胶体金探针——免疫金、免疫金银染色方法

(一)胶体金的制备方法 胶体金多用还原法来制备。常用的还原剂有白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等。常用的还原法有以下几种: 1.白磷还原法(Zsigmondy 1905年):取0.01％氯金酸水溶液100ml,以0.2mol碳酸钾调节其pH7.2,加热煮沸。在刚开始沸腾时,迅速加入0.5ml白磷的饱和乙醚溶液,振摇混匀,直至溶液呈现橙红色时即可。此法制得的胶体金颗粒大小较均匀一致,直径为3nm左右,既适宜于细胞内外抗原成分的标记,又能用于病毒     

间接荧光抗体染色测定猪弓形体抗体的研究

试验采用兔抗猪IgG 荧光抗体(IgGFA),对弓形体虫体涂片进行IFA染色,检查了人工接种弓形体猪、现场自然感染弓形体猪和屠宰猪的血清样品共444头份。在这些样品中,检出弓形体阳性血清样品的抗体滴度在1:16～1:1024之间。 本文叙述了兔抗猪IgGFA的制备和弓形体IFA染色的操作方法,并对试验检出弓形体抗体的滴度结果和IFA诊断猪弓形体病的实用价值,做了简单的讨论。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡抗球虫早熟株三价苗抗体

将无球虫雏鸡随机分为2组,在7日龄和14日龄分别经口接种鸡球虫早熟株三价苗3000个/只卵囊和5000个/只卵囊,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗球虫抗体的变化情况.结果,在首免后的第3、5和7 d用间接ELISA检测OD值为0.331、0.342和0.418,上升缓慢;二免后抗体水平稍有下降(OD值0.383),随后迅速上升(OD值0.472),于二免后第12 d达最高峰(OD值0.855).对照组抗体水平稳中有降,OD值从免疫前0.290下降至0.224.免疫组和对照组比较,首免后第7 d两组的OD值差异显著(P＜0.05),二免后两组的OD值差异极显著(P＜0.01).     

猪瘟间接血凝试验的研究

猪瘟兔化弱毒珠的细胞培养物浓缩纯化后,致敏戊二醛鞣酸处理 的健康绵羊红细胞,制成冻干猪瘟间接血凝诊断液,用以检测血清中的抗猪 瘟抗体效价。经室内外376份免疫猪、45份非免疫猪血清检测结果表明符合 率高达98％。检测猪瘟抗体消长动态的结果证明,接种冻干猪瘟弱毒疫苗后第3～4天出现特异抗体,第15天抗体效价进入高峰期并维持到接种后的第3个月,然后缓慢地下降,于接种后的第11个月消失。该法操作简便,无需特殊仪器设备;特异性强不与其他传染病阳性血清发生交叉凝集;快速,2小时内可判定检测结果;重复性好,不同批次诊断液检测同一血清样品结果一致;保存期长,冻干的诊断液4℃贮存一年半有效。液体诊断液4℃贮存6个月效价不降,37℃存放14天对诊断液质量无影响。适合广大基层现地进行猪瘟弱毒冻干苗免疫猪群的抗体水平和仔猪母源抗体水平监测,以便制定合理的免疫程序,充分发挥疫苗的预防效果,确保养猪业的安生生产。     

以间接血凝试验诊断旋毛虫病

作者从1980年起,对旋毛虫病免疫诊断方法进行了研究,用纯化抗原制备抗原致敏绵羊醛化红细胞,进行间接血凝试验,诊断旋毛虫病,阳性检出率可达97.47％以上,凝集滴度最高可达1:512或1:1024,交叉反应极少,反应快,1小时内即可得出结果。     

氟对鸡甲状腺过氧化物酶活性的影响

选用1日龄蛋用鸡250只,随机分为5组,每组50只,饲喂相同的全价日粮.第1组为正常对照组,第2、3、4和5组在日粮中添加不同剂量的氟化钠,使日粮中氟的含量分别为500、1 000、1 500和2 000 mg/kg,试验期为150 d.每隔30 d采集血样,测定血清中氟含量及甲状腺匀浆中甲状腺过氧化物酶(TPO)活性.结果表明,本试验成功地复制出了不同程度的鸡慢性氟中毒模型,氟中毒各组鸡甲状腺匀浆中TPO活性均有不同程度的降低,而且TPO活性与血清氟含量呈显著的负相关(r=-0.778,P＜0.01).说明氟能抑制TPO的活性,破坏甲状腺中TPO的代谢.     

应用间接斑点酶联免疫吸附试验检测鸡减蛋综合征病毒抗原的研究

应用间接斑点酶联免疫吸附试验检测鸡减蛋综合征病毒抗原的研究孙刚潘兴广李英霞邢文杰朱琪（黑龙江省兽医卫生防疫站哈尔滨１５００３０）刘尚高张立昌（中国农业大学动物医学院）国内外对鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）进行了广泛的研究，已建立的检测ＥＤＳ－７６病毒抗...     

应用间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究

应用间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究查红波陈西钊张鹤晓１）蒋金书赵继勋蒋进（中国农业大学动物医学院北京１０００９４）自１９８７年在美国发现猪生殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）以来，世界各地均有报道。迄今检测ＰＲＲＳ抗体的方法有间接免...     

病毒电镜负染色条件试验

近年来,电镜负染色技术广泛应用于病毒学研究,对于观察病毒的形态结构和病毒性疾病的临床诊断有重要意义。为改善负染色方法制备样品的稳定性,提高成像效果,我们在应用电镜负染色法观察病毒的过程中对影响负染色效果的诸因素进行了试验。     

实验弓形体病的间接血凝试验

本文报告了检测弓形体抗体的间接血凝试验,以实验感染的32只高免兔血清供检,取得了100％检出的结果,有些滴度高达1:16384以上,并且有着良好的重复性。其中14只在首次感染后第7天检测,血清抗体均明显上升,提示了早期检出的可能性。整个试验无需特殊设备,操作简单快速,结果确实,适于弓形体病的生前诊断和流行病学调查。     

酶标记免疫吸附试验

酶标记技术是在标记抗体(荧光标记、同位素标记)试验和组织化学基础上发展起来的一种新技术。1966年Nakane和Avra-meas等首先应用酶标记的抗体和细胞抗原发生反应,再用细胞化学染色法显示出病毒抗原在细胞内的位置。其后,Miles和Hales首先在免疫测定中用酶代替同位素。直到1971年Van Weeman和Schuurs,以及En-gvall和Perlman才分别详细地介绍了酶免