胍盐裂解液对自动化提取工作站DNA回收率的影响

目的研究不同稀释度胍盐裂解液对自动化提取工作站DNA回收效率的影响。方法制备不同浓度的DNA样本,并将EQ1000法医DNA提取试剂盒中的胍盐裂解液梯度稀释,在本实验室配置的自动化提取工作站上,运行＂工作站磁珠法＂提取程序,AB-7500型荧光定量PCR仪检测提取前后的样本DNA浓度。选取2～7号梯度组DNA回收效率数据进行统计学检验,比较不同稀释度胍盐裂解液的处理对样品DNA回收效率的影响。结果 90%～60%稀释度胍盐裂解液组样品回收效率在66%左右;50%～20%稀释度组样品DNA回收效率在41%左右;稀释度在50%以下与60%以上组样品回收效率之间差异极显著。结论应用＂工作站磁珠法＂提取生物检材DNA,其DNA回收效率受胍盐裂解液浓度的影响。     

阴道斑型物质特性初探

<正> 目前,在性犯罪的两性分泌物中,对精液(斑)的研究及理化特性已有一定的揭示,但对阴道分泌物(斑)的研究至今报道甚少。作者应用凝胶层析方法,对阴道分泌物中型物质的某些特性作了些探索,并与精斑、混合精斑进行比较。现报道如下。     

河南地区人群3个基因座的基因频率分布

从血痕、血液、精斑中提取DNA对河南地区随机人群CSFIPO、TPOX和TH01基因座（CTT）进行了基因频率分布调查,现报道如下。1材料与方法137例血样取自河南省血液中心和本实验室检案材料;精斑为本实验室检案积累。采用Chexelx－100处理法提取DNA模板,混合斑中DNA的提取采用两步消化法（‘］。复合扩增采用Promega公司Geneprint试剂盒试剂,按试剂盒说明书操作。扩增产物用4％聚丙烯酸胺变性凝胶分离,恒功率40W电泳1．sh。检测用eromesa公司银染试剂盒,按其说明书操作。通过凝胶中标本扩增带与Promege公司提供的全等位基因标准…     

国产法医DNA检验试剂耗材检测DNA标准品的准确性研究

目的利用法医DNA标准品对自主研发的法医DNA检验试剂耗材进行电泳检测准确性的实验考查。方法实验平台分为2个：平台1全部由美国AppliedBiosystems公司进口的3130xl遗传分析仪、16道电泳毛细管与甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶构成;平台2由AppliedBiosystems公司进口的3130xl遗传分析仪、16道电泳毛细管与本实验室研发的甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶构成。在实验平台上对allelicladder、内标等标准品以及阳性对照9947a的STR复合扩增产物进行电泳检测,利用GeneMapper软件对电泳结果进行分析。结果自主研发的法医DNA检验试剂耗材可与国外进口的3130xl遗传分析仪配套使用,构建的实验平台对法医DNA标准品的检测结果准确无误。结论自主研发的甲酰胺、电泳缓冲液、凝胶等法医DNA检验试剂耗材检测准确性达到了国外同类产品水平。     

HaeⅢ和HinfⅠ酶解DNA指纹图的比较——一例乱伦案的亲子鉴定

<正> DNA指纹技术已经在法医生物物证鉴定中被日益广泛地应用。从理论上说,两种不同的限制性内切酶酶解同一个体DNA产生完全不同的指纹图,虽有这方面的一般性报道,但无进一步的研究。作者用α—珠蛋白-3’HVR探针比较了HinfI和HaeⅢ酶解的DNA指纹图,并将此结果应用于案例鉴定,报道如下。     

模糊指印DNA检验1例

<正>汗潜指印的DNA检测有报道,但在实际案件应用较少。笔者工作中遇到1例磁性碳粉显现后呈现的模糊指纹,经相关检验获得DNA图谱。现报道如下:     

磁珠法回收纯化DNA样本

DNA回收纯化技术是法医DNA检验的关键技术之一。目前,国际上采用的方法主要有基于吸附解离原理的磁珠法[1,2]、硅珠法[3~6]和基于分子量差异的柱法[7]、滤膜法[8]。相比之下,磁珠法由于将磁场作用引入生物分离过程,简化了手工操作步骤,节省了时间,对DNA样本的回收和纯化具有特殊的优势。本文采用吉林大学化学学院赠送的磁珠,在DNA回收纯化方面进行了一些探索。1材料与方法1.1样本DNA标准品9947A购自Promega公司;其他样本取自本实验室的案件检材。1.2主要仪器设备及试剂3100型基因分析仪(AB I公司);9700型PCR扩增仪(AB I公司);Pow…     

DNA IQTM System试剂盒在精斑检验中的应用

在性犯罪案件中,常常遇到混合斑的DNA检验,其中精子DNA的提取是检验的关键。本研究利用DNA IQTM System试剂盒在精斑检验中取得了良好的效果,现报道如下。     

TE-MAGS磁珠法提取效率定量研究

目的利用TE-MAGS在TECAN自动化工作站上结合磁珠试剂盒,定量研究微量DNA提取回收效率和纯化能力。方法 0.1~1ng9947A和混有6种常见PCR抑制剂的1ng9947A,经自动化提取后进行荧光定量和STR分型,定量分析回收效率和纯化能力。结果 0.1~1ng9947A提取后实际回收效率在38.92~60.01%之间,0.3ng以上9947A提取扩增后可以得到完整的STR图谱。胆汁酸盐、胶原质、尿素去除效率大于94.5%,血红素、黑色素、腐殖酸去除效率分别为97.5%、97.85%、82.14%。结论 TE-MAGS磁珠法对微量DNA回收效率较高,纯化能力较强,适合微量DNA提取。     

Chelex-100法和QIAcube纯化法在接触性检材检验中的比较

<正>在法医DNA检验中,能否提取到足够浓度与纯度的DNA模板,是决定DNA检验成败的关键之一。本研究分别采用Chelex-100法与QIAamp DNA Investigator试剂盒结合QIAcube核酸自动化提取仪(QIAcube纯化法)提取实际检案中的DNA,同等条件下进行PCR扩增与电泳,比较分析二者的图谱,报道如下。1材料与方法1.1材料65份接触性生物检材来自本实验室日常检案积累,其中瓶口32份,工具手柄18份,绳索衣物类     

微量DNA:容易忽略的生物物证

PCR技术的出现,大大提高了法医DNA分析技术的灵敏度,尤其是STR复合扩增技术的应用,不仅如同DNA指纹技术一样能够进行同一认定,而且使其灵敏度达到了纳克级以下的水平,大大提高了其解决微量、降解DNA的分析能力.Findlay等[1]成功地分析了低至单个细胞水平的模板DNA;Van Hoofstat等[2]利用DNA技术分析现场遗留指纹进行检验;Barbaro等[3]利用DNA技术对毛干进行检验;Schmerer等[4]和Burger等[5]分别用60和50个循环分析古代骨骼DNA;Van Oorschot和Jones[6]利用PCR检验,从电话话筒、钢笔、手提箱把手等提取的检材样品中得到DNA分型;Wickenheiser[7]从被盗汽车的方向盘上提取DNA进行STR分型,从而认定罪犯.以上研究报道的结果表明,现有的DNA技术能够对微量DNA进行检验.     

从聚丙烯酰凝胶中回收DNA片段直接PCR的简易方法

将聚丙烯酰胺凝胶中ＤＮＡＳ片段于ＰＣＲ缓冲液中洗脱，加入ＰＣＲ反应试剂直接扩增目的ＤＮＡ作进一步分析，ＤＮＡ片段回收效率为０．８９&#177;０．０５，本方法简便、快速。     

DNA遗传标记STR基因座的高分辨电泳分型

应用聚丙烯酰胺凝胶水平不连续电泳和自动激光荧光DNA分析等两种高分辨电泳技术，比较和评估它们对4个STR基因座分型的准确性。结果表明，两者对HUMTH01、HUMVWA和HUM-FES三个基因座的分型结果完全一致。对HUMTHF13A基因座分型，聚丙烯酰胺凝胶水平不连续电泳获得的结果与自动激光荧光DNA分析不具可比性。     

超薄PAGIEF法检测PGM1亚型

葡糖磷酸变位酶(PGM)型是一个有重要实际意义的遗传多型性系统.自1972年Ishimoto等将聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦技术(PAGIEF)应用于PGMI同工酶的研究,并发现PGMI亚型以来,相继有许多学者进行了这方面的研究,他们所应用的都是凝胶厚度为1 mm的薄层PAGIEF技术;自1982年以来又有应用凝胶厚度为0.15mm的超薄层PAGIEF技术的报道、国内自王嵬等报道应用薄层技术检测PGM_1亚型以来,尚未见有应用超薄层技术进行此项检测的报道.本文将已在我室实际应用的0.1mm超薄技术报道如下.     

土埋60余年牙齿DNA检验1例

随着DNA检验技术的进步,各种微量、陈旧和复杂检材的DNA检验已逐见报道,本文作者遇到1例死后在土中埋葬60余年牙齿DNA检验的案例,报道如下。     

腐败尸体不同组织的DNA扩增效果

<正> 在法医实际检案工作中,经常需对腐败尸体进行DNA鉴定。提取腐败尸体组织进行DNA检验所需的检材,不同检验技术要求不尽相同。为提高腐败检材检出效率,本文作者对从高度腐败尸体上提取的软骨、指甲、肌肉、头皮、血液等进行DNA的提取、荧光标记STR复合扩增技术进行扩增分型,并比较分析了扩增效果,现报道如下。     

泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响

目的 研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法 泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果 混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 969.7±376.9 RFU、9 706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论 泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。     

利用DNA条形码技术鉴别植物

目的研究利用DNA条形码技术鉴定上海地区常见植物叶片种类,在物种鉴定水平的基础上,进一步讨论利用分子标记技术对该类物证进行同一认定可行性。方法随机选取上海地区常见的9种植物,在其非新鲜的状态下利用高盐法提取植物组织的DNA,PCR扩增叶绿体rbcL和matK基因片段并且回收测序,通过数据库比对确定植物的物种。结果利用双基因鉴定分析系统,在随机收集的9份样品中,均达到物种水平的鉴定。结论利用DNA条形码技术,可以在物种水平准确地鉴定植物叶片类物证。     

QIAshredderTM柱结合M48纯化试剂盒提取微量DNA

法医检材中DNA含量少、质量差是DNA检验失败的重要原因之一，在提取时．裂解液能否实现全部转移。是减少DNA损失的重要环节。法医DNA检材载体大多为纱线、脱脂棉类，吸附力强，本研究利用QIAshredderTM柱结合使用M48纯化试剂盒．提取、纯化此类检材中的DNA．在多起脱落细胞类检材DNA检验中取得了成功，发挥了较好的作用。现报道如下。     

糖类检材上脱落细胞采集方法的比较

<正>刑事案件中常遇到以糖类为载体的生物检材,虽然有成功获取DNA的案例报道[1],但由于糖的特殊性,从该类载体上转移、提取DNA一直未见系统研究。本研究以奶糖、硬糖、软糖3种类型的糖为代表,通过4种DNA采集方法比较其STR检出率,以此来寻求最适合糖类生物检材上附着脱落细胞的DNA采集方法。1材料与方法1.1样本采购大白兔奶糖(奶糖)、上好佳柑橘味硬糖(硬