有机法及两步扩增技术检验微量DNA1例

1 案例资料 1．1 简要案情 刘某，女，44岁。2006年7月12日凌晨2时许，被人杀死在自家院内，现场提取到1个酸奶袋，袋角撕开，推测为喝奶人用嘴撕开。要求进行DNA鉴定。     

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。     

磁珠法回收纯化DNA样本

DNA回收纯化技术是法医DNA检验的关键技术之一。目前,国际上采用的方法主要有基于吸附解离原理的磁珠法[1,2]、硅珠法[3~6]和基于分子量差异的柱法[7]、滤膜法[8]。相比之下,磁珠法由于将磁场作用引入生物分离过程,简化了手工操作步骤,节省了时间,对DNA样本的回收和纯化具有特殊的优势。本文采用吉林大学化学学院赠送的磁珠,在DNA回收纯化方面进行了一些探索。1材料与方法1.1样本DNA标准品9947A购自Promega公司;其他样本取自本实验室的案件检材。1.2主要仪器设备及试剂3100型基因分析仪(AB I公司);9700型PCR扩增仪(AB I公司);Pow…     

从聚丙烯酰凝胶中回收DNA片段直接PCR的简易方法

将聚丙烯酰胺凝胶中ＤＮＡＳ片段于ＰＣＲ缓冲液中洗脱，加入ＰＣＲ反应试剂直接扩增目的ＤＮＡ作进一步分析，ＤＮＡ片段回收效率为０．８９±０．０５，本方法简便、快速。     

全基因组扩增在微量检材DNA分型中的应用

目的探索全基因组扩增技术对微量检材DNA分型的有效性。方法通过显微操作制备含1~20个细胞的模拟微量检材样本,在常规PCR-STR分型前加入全基因组扩增步骤,从等位基因不平衡、等位基因丢失、基因座丢失、伪等位基因(包含stutter峰)等方面探究PEP和MDA两种全基因组扩增方法对微量检材DNA分型的有效性。结果 MDA扩增效率高于PEP,但等位基因丢失和伪等位基因严重;PEP方法的正确分型率高于MDA,但小片段DNA优势扩增现象较严重。结论 MDA方法并不适合目前以STR分型为主导的法庭科学,当微量检材样本的绝对量相当少时,可以考虑使用PEP方法来扩大样本量,以满足重复检验的要求,但可能面临大片段DNA扩增失败的风险。     

荧光标记8个 miniSTR 及 Amelogenin 复合扩增体系的建立

目的建立非CODIS系统miniSTR以及Amelogenin基因座的荧光复合扩增体系。方法筛选8个多态性高的非CODIS系统miniSTR基因座（D20S1082、D6s474、D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3$4529、D2S441）,并结合Amelogenin基因座设计荧光标记引物,优化反应条件,建立复合扩增体系。应用该体系对204份广州地区汉族血样,30个家系样本,及30份降解检材进行检测。结果建立的荧光标记8个miniSTR及Amelogenin复合扩增体系分型结果明确,稳定性好,且所有片段长度均少于200bp,提高了降解检材的分型成功率。在广州汉族人群的累积个人识别率为0．99999993,累积非父排除率为0．992287。结论构建的miniSTR荧光复合扩增体系,操作简便,分型准确,重复性好,对降解检材有效,易于在法医实验室推广应用,可对现有试剂盒起补充作用。     

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。     

甲醛固定标本DNA提取及荧光标记STRs复合扩增

甲醛固定标本和石蜡包埋组织的病理切片是医院病理科和法医鉴定机构档案中重要的个人实物档案 ,是可靠的分子生物学研究材料的来源 ,同时也是医疗纠纷和一些刑事案件的重要证据。由于案情的需要 ,常需对甲醛固定标本和石蜡包埋组织及病理切片等进行个人识别和同一认定。但由于甲醛可使DNA发生降解 ,导致PCR反应的成功率降低。本文探索了应用TES、SDS、PK、尿素和DTT消化及酚 /氯仿提取DNA ,并用Chelex10 0溶解DNA ,应用灵敏度高的荧光标记STRs复合扩增 ,对甲醛固定标本和病理切片进行个人识别鉴定 ,取得了令人满意的结果。1　材…     

建立法医DNA数据库的初步探讨

<正> 本研究在国外成功建库的基础上,经几年的摸索,逐渐形成了一套建立DNA数据库的思路,并初步建立了北京地区法医DNA数据库,与同仁探讨。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样本 取自本中心1998年至今受理的未破案件现场遗留物中与被害人STR分型结果不同的样本     

分析扩增DNA序列测定人发的性别

最常用的DNA分析方法是测DNA的限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP).此法需要微克量的未降解大分子DNA,一般难以从案例检材中获得.聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)能使DNA的特异区域扩增,供序列分析,鉴定生物性检材的性别.酶促扩增法可使     

粪便DNA提取及检验

目的　研究人类粪便DNA的提取和检验方法。方法　 8人份粪便样本 ,磁珠法提取DNA后 ,进行STR复合扩增和mtDNAHVI区测序分析。结果　用 2种方法提取的粪便DNA ,STR复合扩增检验均未获成功 ;方法1提取的粪便DNA有 6个样本、方法 2有 7个样本获得了清晰可读的mtDNAHVI区序列 ,并与唾液对照样本DNA的序列完全一致。结论　用本文建立的方法提取粪便DNA ,不适于STR分析 ,可通过mtDNA测序分析进行检验。     

排便后擦拭手纸DNA检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情樊某,女,4岁。2011年2月被一男性猥亵,因其之后已洗澡,故提取现场粘有粪便的手纸、樊某当时穿的棉毛裤及樊某血样,要求进行DNA分型检验。1.2 DNA检验DNA提取剪取手纸(P30试验阴性)及棉毛裤上的可疑斑迹(P30试验阳性)少许,用双蒸水浸泡、离心,手纸疑斑迹用Chelex-100法提取DNA并采用磁珠法进     

杀人案件中接触性DNA检验的分析

<正>1案例资料1.1简要案情2010年9月3日,韦某(男,42岁,残疾)被人发现死于家中,颈部缠有白色电线、白布,旁边有木棍1根,上附暗红色斑迹。现场卧室内凌乱,床上有被人翻动过的枕头,枕头拉链被拉开。死者家中的香烟丢失。初步分析认定该案属于入室抢劫杀人。对现场     

法医DNA标准物质备选细胞STR等位基因片段长度的定值

目的 研究建立法医DNA标准物质备选细胞基因组STR基因座等位基因片段长度标准定值的方法.方法 利用有机法提取HPF和HSSM细胞基因组DNA并进行STR复合扩增,将产物进行电泳检测.利用Gene Mapper软件分析电泳结果,记录STR基因座等位基因的数值,并对目前我国公安系统应用较为广泛的DNATyperTM15、IdentifilerTM两种试剂盒扩增产物进行相应的DNA片段长度(bp)统计以及定值.结果 HPF为男性个体细胞,HSSM为女性个体细胞.HPF和HSSM细胞DNATyperTM15系统等位基因片段长度范围分别为126.26±0.05～367.53±0.20bp和125.33±0.07～370.08±0.17bp,IdentifilerTM系统等位基因片段长度范围分别为117.22±0.04～340.02±0.08bp和117.21±0.03～323.86±0.09bp.结论 对STR基因座等位基因片段长度进行标准定值,可为法医DNA标准物质提供有效的溯源途径.     

火柴棍上汗斑DNA检验3例

留在刑事案件现场物品上的汗斑,因其含脱落上皮细胞少,DNA含量低,使用常规酚-氯仿法或chelex法提取DNA进行STR分型成功率较低。本文作者应用QIAamp DNA Micro Kit(QIAGEN公司)提取3起案件汗斑DNA并进行了STR检验及mtDNA测序,现报道如下。1检材检材1某县1起纵火案现场提取到的点     

直接扩增法用于常见现场检材DNA检验

<正>本文采用PowerPlex16 HS和Identifiler-Direct试剂盒,对血斑及烟蒂等检材进行直接扩增,以探讨直接扩增技术对常见现场检材的有效性。1材料与方法1.1样本现场提取各种载体上(包括衣物、地面、植被等)的血迹30份、烟蒂50份以及受害人、嫌疑人的血斑样本20份(滤纸或纱布),为本实验室日常检案积累。     

3种常用PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果比较

目的探讨常用的ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA的差异。方法510名无关中国汉族个体血样,分别用ProfilerPlusTM与Powerplex(16试剂盒进行DNA检验,然后对有不同检验结果的同一样本,再用ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16等三种试剂盒进行检验,并比较其结果。结果在510名个体血样的DNA检测结果中,发现同一样本有不同结果的有7例,其差异率为1.3725%;ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16各有1例在D13S317或FGA基因座上出现等位基因缺失现象,缺失率为0.1961%;ProfilerPlusTM有5例在D8S1179基因座上出现扩增严重不平衡现象,相应的IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒的检验结果为正常杂合子。结论ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA均会出现扩增不平衡和/或基因丢失现象,其发生几率IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒较ProfilerPlusTM少。     

砂纸擦蹭皮肤的DNA提取及检验

<正>目前,DNA检验技术已广泛用于实际办案,日常检案可能遇到不同的检材载体,其内含的抑制物成分是对检验成功的干扰因素,本文针对砂纸上擦蹭的人体生物检材进行检验,并对抑制因素的影响进行了初步探讨。1样本及检验1.1样本送检的被鉴定人手臂擦蹭细砂纸1块,约2cm×2cm;志愿者用与上述检材一致的细砂纸擦蹭皮肤1次的检材1块,以有砂面可见皮肤碎屑为纳入标准。1.2 DNA检验     

快速PCR扩增检验体系的建立及技术指标验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法运用快速扩增酶Fast Start与DNA TyperTM15 plus primer mix组合并优化建立快速扩增体系,对50份静脉血卡和35份案例检材提取的DNA进行扩增,并对体系检测结果的准确性、稳定性和检材适应性进行验证;采用不同稀释浓度的标准品9947,采用快速扩增方法进行检测,验证体系的灵敏度。结果模板DNA浓度达到0.50ng/μL,采用快速扩增体系可能获得准确分型;扩增耗时仅为69min,比常规扩增方法明显缩短;不同种类检材,经检测均获得良好分型图谱,同一份样本重复实验结果一致、稳定。结论本文建立的快速扩增体系可显著提升检测速率,其灵敏度、准确性、稳定性、检材适用性等技术性能,可满足实际检验的需求。     

2组miniSTR复合扩增体系的建立

本文在参考文献的基础上，建立了两组荧光标记复合扩增体系，分别用于13个miniSTR基因座、1个性别基因座的分型检验，与minifiler试剂盒进行了对比，并对实际案例中微量、高度降解检材进行了检测。