精斑检验干扰因素的研究

目的研究精斑检验中预试验与确证试验结果的关系,以及取材时间、生活习惯对确证检验结果的干扰。方法取376例阴道拭子,用酸性磷酸酶(ACP)染色法、斑点ELISA法和抗人精PSA金标试纸法检测检测精斑。结果ACP阴性时,可检出P30、精子,性生活后精斑确证检验大部分阳性检出分布在48小时以内样本中,结果经X2检验,P<0.01,差异性显著,而不同的生活习惯对P30检测具有显著性差异。结论研究结果对精斑的检验以及检材的提取具有推广应用和指导性意义。     

Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用

目的利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。     

IBS法鉴定全同胞关系的错判概率分析

目的以随机模拟法进行IBS鉴定全同胞关系的错判概率分析。方法分别在19、29、39个常染色体STR检测系统上,以随机模拟法产生1000万对全同胞和无关个体样本,按照《生物学全同胞关系鉴定实施规范》采用IBS法鉴定全同胞关系,统计假阳性概率和假阴性概率。结果在19个STR检测系统上,按照规范的IBS评分标准的假阳性概率和假阴性概率分别为1.6×10~(-4)和1.4×10~(-4);在29个STR检测系统上的假阳性概率和假阴性概率分别为2.4×10~(-4)和2.3×10-6;在39个STR检测系统上的假阳性概率和假阴性概率分别为2.9×10~(-4)和0。结论规范中IBS法错判概率极低,判定结果保守,具有很好的应用价值。     

DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

一种改良的精斑涂片DNA检验方法

目的建立一种有效的精斑涂片DNA检验方法。方法以本实验室平时积累的91例精斑涂片为研究对象,采用chelex法提取,结合硅珠法纯化浓缩,提高DNA浓度后进行PCR扩增和STR分型。结果尽管涂片上精子量较少,但chelex法的DNA提取率较高,且硅珠法可以纯化并浓缩模板DNA,本文建立的方法兼具了这两种提取方法的优点,成功率较高。结论精斑涂片可以作DNA检验,在法医检案中具有较高的应用价值。     

用斑点ELISA方法检测p30确证人类精斑

作者建立了检测精浆特异性抗原p30的斑点ELISA试验方法,确证人类精斑。p30最小检出量为0.4ng。用该法盲测了室温存放1年的生物性斑痕180例,无一例假阳性和假阴性,证明用此法确证人类精斑的敏感性和特异性均优于传统的方法,具有操作简便、快速,检材用量小,结果准确等优点。     

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。     

X-STR在精斑混合检材检验中的法医学应用

目的应用X和Y染色体STR分析含有相同父系祖先个体DNA的混合检材。方法用差异裂解法提取混合检材基因组DNA,用PowerPlex 21试剂盒、GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统27Y试剂盒、SureID?PathFinder扩增荧光检测试剂盒和GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统17X试剂盒检测混合检材。结果根据X-STR和Y-STR单倍型成功鉴别具有相同父系祖先的嫌疑人,确定混合检材中存在4个男性个体DNA。结论 X-STR可以应用于检验精斑混合检材,结合Y-STR数据可区分相同父系男性个体,并辅助判断混合检材中男性个体的数量。     

用酶标抗人精液单克隆抗体A_(10)C_6建立ELISA斑点法快速鉴定人精(液)斑

作者用过氧化物酶标记自己研制的抗人精液单克隆抗体A10C6建立了简便快速鉴定人精斑的ELISA斑点法，直接通过酶标抗体上的酶催化底物显示颜色变化，来判断结果，阳性呈灰色斑点，阴性为无色。其结果只对人精斑浸出液显示阳性斑点，对人的其他组织器官及体液均呈阴性，对动物精斑也无交叉反应，精斑浸出液稀释到1：3200倍仍呈阳性结果。     

应用免疫磁珠分离混合斑中精子

目的探讨应用免疫磁珠法分离精子-上皮细胞混合液中精子的可行性。方法制备不同比例的精子-上皮细胞混合液各15例,分别应用免疫磁珠法及差异裂解法提取精子,经PCR扩增进行DNA-STR分型,比较两者的差异。结果免疫磁珠可以特异性捕获精子,对精子个数为500～2 000/mL的混合斑STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU200)为93.33%,差异裂解法为46.67%,两种方法存在明显差异(P0.05)。结论免疫磁珠可有效分离精子和混合斑中其他成分,在精子个数低于2 000个/mL检材中优于差异裂解法。     

精斑定性检验52例回顾分析

在性犯8罪物证检验中,确认精斑存在与否是非常关键的.检验精斑的方法很多,如P30检验、抗人精血消沉淀环及琼脂糖扩散试验等,其特点各异.最近笔者以Dot-ELISA进行P30检验、抗人精血清沉淀环试验及沉渣涂片镜检精子3种不同的方法对52例性犯罪案件进行了检验并做了统计分析,报告如下1 检验方法(1)P30检验,以DO-ELIA直接法进行(HRP-P30购于公安部第二研究所)(2)沉淀环试验,所用抗人精血清效价为1:2000,分别购于公安部第二研究所及淮北市公安局(3)精子检验,沉渣涂片,用美蓝染色后直接镜检,一般可用化人精血清沉淀环试验后的沉渣涂片,不必干燥     

wizard clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法在100例检案中,利用wizardcleanup直接对精子消化液进行纯化浓缩。采用profilerplus试剂盒进行复合扩增,产物经ABI310基因分析仪检测。结果从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论wizardcleanup处理混合斑,能有效去除女性成份,得到精斑DNA进行分型。     

人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响

目的比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响。方法收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份;分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值;同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测。结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高I,PC CT值在26.63～27.19之间。用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70℃裂解方法提取的DNA量无显著性差异。STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法9,5℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异。结论人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率。     

P30试验阴性检出精子基因型1例

1案例某男怀疑其女友有外遇,自行提取女友黑色三角内裤一件送检,要求检验是否含人精斑。接案后,按照精斑检验常规,进行酸性磷酸酶(磷酸苯二钠)预试验和胶体金P30抗原检测试剂条(购自公安部物证鉴定中心)试验,结果均呈阴性,阴阳性对照结果准确。沉渣涂片,HE染色,镜下见有大量精子,透明顶体明显,大小一致,未能见明显尾部;分步消化后用硅珠法提取DNA,经荧光标记STR复合扩增技术,检出样品中15个位点的男性DNA。2讨论酸性磷酸酶(磷酸苯二钠)试验灵敏度较高,稀释20000倍的精液仍呈阳性反应;P30为前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen P…     

MiniFiler~(TM)试剂盒在LCN-STR分型中的应用

目的评估MiniFilerTM试剂盒在LCN-STR分型中的法医学应用价值。方法采用MiniFilerTM与IdentifilerTM试剂盒,对49份常量与39份LCN检材,包括血迹、精斑、骨骼等7类常见检材的检验结果进行比较,并对两种试剂盒的检测灵敏度进行比较。结果在49份常量检材的检验结果中,两种试剂盒的STR分型结果全部一致;在39份LCN生物检材的检验结果中,MiniFilerTM试剂盒获得全部STR分型的有30份,部分分型的5份,阴性的4份;IdentifilerTM试剂盒获得部分STR分型的22份,阴性的17份。MiniFilerTM试剂盒检验成功率明显高于IdentifilerTM试剂盒;MiniFilerTM试剂盒的检测灵敏略高于IdentifilerTM。结论MiniFilerTM试剂盒可显著提高LCN生物检材的检验成功率,适合应用于法庭科学实际检案中LCN生物检材的检验鉴定。     

用特异兔抗人精蛋白抗体间接ELISA法检测人精斑

本文报告利用抗人精血清进一步精制而得的特异兔抗人精蛋白抗体进行间接ELISA试验检测人精斑的方法。经用61例各种常见体液斑检材及多人不同浓度的精液、唾液、乳汁、血液等体液稀释液进行测试,结果正确检出精斑的准确率达100％。对混合多人精液稀释液的最高检出稀释度为1/10000,非精斑检材均不出现阳性反应。该法的特异性完全适合精斑确证检验鉴定的需要,其灵敏度明显高于传统的精斑确证检验方法。本法操作简单,无需特殊仪器设备,使用的抗体来源方便,便于应用。     

wiazrd clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的 建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法 在100例检案中，利用wizard clean up直接对于精子消化液进行纯化浓缩。采用profiler plus试剂盒进行复合扩增，产物经ABI310基因分析仪检测。结果 从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论 wizard clean up处理混合斑，能有效去除女性成份，得到精斑DNA进行分型。     

分析DNA亲缘关系侦破强奸杀人焚尸案1例

1案情2005年某日,某地发现一具无名女尸,头面部被焚烧,容貌被毁,全身赤裸。尸检发现死者生前有性行为,并提取了阴道及肛门拭子。对提取的阴道及肛门拭子进行精斑及STR检验,肛门拭子检出精斑及STR分型,阴道拭子未检出精斑。为查找尸源,取可疑父亲王某血样与尸体血样进行常染色体STR检验,结果显示死者血样DNA基因型与王某血样DNA基因型符合生物学单亲遗传关系。为排除重点嫌疑人,将尸体肛门拭子DNA基因型与多名重点嫌疑人     

Y染色体STR检验技术在侦查破案中的应用

Y染色体STR具有父系遗传特点,同一家族中男性个体的Y染色体STR分型检验结果完全一样。当在现场上发现了男性犯罪嫌疑人的生物检材,如精斑、血迹、烟头等,对相关范围内家系中男性个体进行调查,可以缩小侦查范围并节省大量经费。Y染色体作为常规DNA检验方法,在侦查破案中的作用越来越大,本文介绍本实验室两年来Y染色体STR检验技术的应用情况,供大家参考,以求共进。1用Y染色体STR父系遗传特点进行个体排查1.1明确方向缩小侦查范围在DNA检验人员少,资金不足的情况下,应有效利用资金及人力,不能盲目用DNA检验技术广泛排查。如果案件具…