常染色体InDel基因座判定疑难单亲鉴定1例

<正>1案例资料1.1案例来源王某,28岁,要求对其与女儿进行亲权鉴定。1.2检验方法DNA提取采用常规Chelex-100法提取基因组DNA。STR分型采用Goldeneye?20A试剂盒、AGCU EX22试剂盒及AGCU 21+1试剂盒在AB公司9700型PCR仪扩增,进行常染色体的STR分型检测,采用Investigator DIPplex kit(Qiagen,     

亲子鉴定中STR基因座D18S51罕见多步突变1例

<正>我中心在进行某例亲子鉴定检测过程中在D15S51基因座上发现1例涉及4步或5步的罕见复杂突变,现报道如下。1材料和方法1.1材料检材来源于我中心受理的某三联体检测案例,其中生母35岁,女儿12岁,被检父40岁。1.2方法使用Qiagen公司的QIAamp?DNA Blood Mini Kit,按照技术手册进行检材的DNA提取;常染色     

Qubit~快速荧光定量系统在法医学中的应用

目的研究Qubit定量系统在法医学中的应用。方法使用Quant-iTTM试剂盒检测法医DNA样本并得出样本浓度。结果Quant-iTTM试剂盒能检测并定量各种生物学检材DNA样本。结论Quant-iTTM试剂盒能够应用在法医学检验中。     

亲子鉴定检出染色体三倍体1例

<正>1案例资料1.1简要案情受检者为孕妇、疑父和孕妇腹中胎儿。孕妇22岁,怀孕24周。签署知情同意书后,采集孕妇和疑父外周静脉血、胎儿羊水样本用于鉴定分析。1.2 DNA分型检测Chelex-100法提取DNA,采用Power Plex?21试剂盒(美国Promega公司)进行复合扩增,扩增产物用3500XL基因分析仪(美国ABI公司)进行DNA分型检测。应用Identifiler~(TM)试剂盒(美国     

纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

目的对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考。方法取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和King Fisher仪器自动化提取法提取DNA,IdentifilerPlus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较。结果骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之King Fisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05)。结论用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用。     

Qubit?快速荧光定量系统在法医学中的应用

目的 研究Qubit 定量系统在法医学中的应用.方法 使用Quant-iTTM试剂盒检测法医DNA样本并得出样本浓度.结果 Quant-iTTM试剂盒能检测并定量各种生物学检材DNA样本.结论 Quant-iTTM试剂盒能够应用在法医学检验中.     

使用QIAamp DNA Stool MiniKit提取粪便DNA并检验

笔者应用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIAGEN公司)提取粪便DNA,并用不同试剂盒进行了对比试验,以寻找合适的检测方法. 1 材料和方法 1.1 样本 自愿者提供的粪便样本15份,于-20℃保存,粪便样本提供者提供的唾液样本15份.     

利用AutoMate Express~(TM)自动化法医DNA提取系统提取骨骼及牙齿DNA

目的探讨建立骨骼及牙齿DNA自动化提取的新方法。方法将33份骨骼及15份牙齿样本分别用冷冻研磨和手工处理两种方法研磨成粉,采用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统提取DNA并定量。结果 AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统能够在3h左右完成骨骼、牙齿DNA的提取,两种方法处理的骨骼样本所得DNA质量浓度差异无统计学意义。冷冻研磨处理的骨骼和牙齿样本均获得了较好的STR分型结果,且牙齿样本所得DNA质量浓度高于手工提取所得。结论应用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统是自动化提取骨骼、牙齿DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验。     

胍盐裂解液对自动化提取工作站DNA回收率的影响

目的研究不同稀释度胍盐裂解液对自动化提取工作站DNA回收效率的影响。方法制备不同浓度的DNA样本,并将EQ1000法医DNA提取试剂盒中的胍盐裂解液梯度稀释,在本实验室配置的自动化提取工作站上,运行＂工作站磁珠法＂提取程序,AB-7500型荧光定量PCR仪检测提取前后的样本DNA浓度。选取2～7号梯度组DNA回收效率数据进行统计学检验,比较不同稀释度胍盐裂解液的处理对样品DNA回收效率的影响。结果 90%～60%稀释度胍盐裂解液组样品回收效率在66%左右;50%～20%稀释度组样品DNA回收效率在41%左右;稀释度在50%以下与60%以上组样品回收效率之间差异极显著。结论应用＂工作站磁珠法＂提取生物检材DNA,其DNA回收效率受胍盐裂解液浓度的影响。     

常见嗜尸性甲虫及蝇类虫体不同部位mtDNA的提取效果

目的探讨改良后十六烷基三甲基溴化铵(cetyltriethylammnonium bromide,CTAB)法对常见嗜尸性昆虫虫体不同部位mtDNA的提取效果。方法随机采集放置在呼和浩特地区室外草地家兔尸体上丽蝇科的丝光绿蝇[Lucilia sericata(Meigen)]、埋葬甲科的Nicrophorus fossor(Erichson)各13例,采用改良CTAB法分别提取每只昆虫头部、胸肌、腿部、翅膀4个部位的mtDNA,核酸蛋白测定仪检测DNA纯度及质量浓度,琼脂糖凝胶电泳检测其PCR产物,测定PCR产物序列,上传GenBank。结果 13例丝光绿蝇[Lu-cilia sericata(Meigen)]的胸肌均提取到了DNA,10例头部样本、6例腿部样本、4例翅膀样本得到DNA;13例Nicrophorus fossor(Erichson)胸肌DNA均提取成功,5例头部样本、8例腿部样本及3例翅膀样本提取出DNA。结论改良CTAB法可用于对嗜尸性昆虫胸肌及其他部位进行DNA的提取。     

4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕DNA效果的比较

目的探讨4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕样本DNA的效果。方法含有1μL静脉血的滤纸血痕180份,分为4组,每组45份。分别采用4种固相颗粒吸附法(DNAIQ~(TM)系统、D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规的硅珠法)对上述样本进行DNA提取,对比各组DNA溶液的浓度及STR分型检验结果。结果 D盾超敏DNA提取试剂盒[(3.764±1.790)μg/mL]、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒(3.634±1.112)及常规硅珠法(3.350±1.250)提取到DNA溶液的浓度无统计学差异(P0.05),但均高于DNA IQ~(TM)系统(1.864±1.207)(P0.001);D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法样本图谱峰高大于DNA IQ~(TM)系统(P0.001),超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠法样本图谱峰高大于D盾超敏DNA提取试剂盒(P0.01)。结论 D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法对于滤纸血痕的DNA提取效率高于DNA IQ~(TM)系统;超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠提取到的DNA溶液可能具有更高的质量。     

使用QIAmnp DNA Stool Mini Kit提取粪便DNA并检验

笔者应用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIA-GEN公司)提取粪便DNA,并用不同试剂盒进行了对比试验,以寻找合适的检测方法。1材料和方法1.1样本自愿者提供的粪便样本15份,于-20℃保存,粪便样本提供者提供的唾液样本15份。1.2 DNA提取用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIAGEN公司)提取,稍作改动,过程如下:取220mg粪便放于2ml离心管中,加1.6ml Buffer ASL,振荡至粪便样品完全均质,14000r/min离心2min,上清移至一新2ml离心管,加一片InhibitEX,振荡至InhibitEX片完全溶解,室温放置2min,14000r/min离心3min,吸取所有上清于另一新2ml离…     

Penta E基因座稀有等位基因32的确认

1 案例资料 1.1 简要案情 本鉴定中心日常检案中一起亲子鉴定案件,案件样本为血液样本. 1.2 初次检验 采用chelex-100方法提取血液样本DNA,使用AGCU EX22人类荧光标记STR复合扩增检测试剂(无锡中德美联生物技术有限公司)在9700扩增仪(美国Applied Biosystems公司)上进行复合...     

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。     

山羊10个STR基因座遗传多态性

随着我国法制建设的发展,涉及动物个体识别的案件逐年增多,山羊是我国农牧地区常见的家畜,相关案件的审理可能需要个体识别或亲缘鉴定结论作为依据.本文对山羊的10个STR基因座遗传多态性进行初步调查,旨在为法医遗传学鉴定和相关研究及实践提供基础数据. 1材料与方法 1.1样本来源和DNA提取 123只山羊血液样本采自山东青岛市和莱芜市.采用QIAGEN公司的M48 DNA试剂盒,参照说明书提取样本模板DNA,应用荧光光度计检测模板DNA浓度与质量后备检.     

QIAcube小型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究

目的 探讨QIAcube工作站在生物接触类检材中的提取效果。方法 将90份以脱落细胞粘取膜、实物样本(纱线转移)或棉签擦拭物为载体的生物接触类检材,分别采用QIAcube工作站、EZ1工作站和手工硅珠法进行基因组DNA提取、定量并检测15个常染色体基因座的STR分型。结果 利用QIAcube工作站提取的生物接触类检材平均检出率达到44.4%,其中脱落细胞粘取膜组检出率为56.7%,实物纱线转移组检出率为46.7%,棉签擦拭物组检出率为30.0%。脱落细胞粘取膜组和实物样本(纱线转移)组均获得较好的STR分型结果,所得DNA浓度均优于棉签擦拭物组样本。QIAcube工作站组平均检出率为44.4%,手工硅珠法组平均检出率为43.2%,而EZ1工作站组平均检出率为26.9%,前两者平均检出率明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组所得DNA浓度无显著差异,但均明显高于EZ1工作站组。QIAcube工作站组与硅珠法组检测得到的STR分型RFU值及峰值均衡性均优于EZ1工作站组,尤其是大片段基因在前两组中均能够被完整检测到。结论 采用QIAcube工作站提取生物接触类检材检出率高,STR分型结果良好,可应用于法医物证实际案件检验。     

一种快速批量DNA检测方法

本文在硅珠法提取DNA的基础上,研究建立了一种快速高效批量提取、扩增、检测DNA的方法。现介绍如下。1材料与方法1.1样本所有嫌疑人员的血样均用滤纸采集。1.2主要仪器设备及试剂9700扩增仪(ABI公司)、3100遗传分析仪(ABI公司)。裂解液(12g硫氰酸胍、10ml0.1M Tris-HCL,pH6.4、0.8ml0.5MEDTA,pH8.0、0.5ml TritonX-100),硅珠悬液(6g SiO2加水到100ml),10%十二烷基肌氨酸钠(SLS),Profiler Plus试剂盒(ABI公司),去离子甲酰胺、Rox500内标(ABI公司)。1.3方法DNA提取分别剪取2mm×3mm大小的血痕放入96孔板相应的孔中。用排枪…     

D2S1338基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料1.1样本与检测某区县公安局送检的未知名尸体心血(滤纸)。采用Chelex-100法提取样本基因组DNA,分别用Identifiler-Plus和MiniFiler复合扩增系统进行复合扩增,扩增产物用ABI 3130XL型DNA测序仪检测,数据收集及分析采用GeneMapper 3.2软件。     

联苯胺预试验处理血痕后样本DNA定量的研究

目的探讨联苯胺血痕预试验处理后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法选取10名无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,保存干燥时间分0．5h、1h、3h、6h、12h、24h六个实验组,并采用磁珠提取法、QIAcubeDNA提取纯化法、chelex-100提取法提取样本DNA,应用RT-PCR定量技术检测样本DNA含量,同时应用PCR-STR技术和Idfiler-plus试剂盒检测相应样本STR分型。结果联苯胺血痕预试验后处理样本,随保存时间的延长,其样本DNA含量显示逐渐降低的趋势。回归线性对数分析显示,磁珠提取法：Y=-0．40871n（x）＋0．7044R0—0．7633;QIAcubeDNA提取纯化法：Y=-0．23931n（x）＋0．4764R0—0．8715;chelex-100提取法：Y=-0．11781n（x）＋0．2302R2=0．9571。不同DNA提取方法对同一保存时间的联苯胺血痕预试验试剂处理样本DNA含量间差异有极显著性,P〈O．01。结论联苯胺血痕预试验后对后续STR分型影响较大,联苯胺血痕预实验后的血痕不能继续进行STR分型检测。     

应用自动化工作站提取常见生物样本DNA

目的建立使用自动化工作站提取法医案件生物样本DNA的方法。方法选用Biomek 3000自动化工作站,采用DNA IQTM系统及Chelex法对法医案件中常见生物样本进行DNA提取,荧光定量技术进行定量,PCR扩增16个STR基因座并与手工提取方法比较。结果与手工提取方法进行比较,选用自动化工作站结合使用DNAIQTM系统及Chelex法提取DNA可获得满意的STR检验结果。结论自动化工作站可用于法医案件中常见生物样本的DNA提取。