两种提取骨骼、牙齿DNA的方法

目的建立提取骨骼、牙齿DNA的新方法。方法收集380例骨骼、牙齿检材,其中347份为常规骨骼、牙齿(常规组),33份为陈旧骨骼、牙齿(疑难组)。常规组检材以Handy-Eco仪器、疑难组则用冷冻研磨仪研磨成粉,以Kingfisher自动化系统提取DNA,用Identifiler Plus进行STR分型检测。结果用HandyEco Kingfisher法(H-K法)成功提取345例常规骨骼、牙齿检材的DNA,成功率99.42%;用Freeze-mill Kingfisher法(FM-K法)成功获取32例疑难骨骼、牙齿检材的DNA,成功率96.97%。结论采用H-K法和FM-K法对骨骼和牙齿DNA的检验成功率较高,可选择应用于工作实践中。     

一种快速、高效提取骨和牙齿DNA的方法

<正>对于高度腐败尸体、白骨化尸体的身源DNA检验,骨和牙齿是最重要的生物检材,本文介绍一种快速、高效提取常规、陈旧骨和牙齿DNA的方法,同时也介绍一种简便的粉碎研磨骨和牙齿的方法,以供参考。1材料与方法1.1仪器与试剂生物物证粉碎研磨器ALN-812型(奥力诺生物科技有限公司)、3500型遗传分析仪(美国Life     

一种改良的骨组织DNA提取方法

骨组织耐腐败 ,当其他软组织已完全腐败后 ,只能用骨组织进行种属鉴定 ,性别鉴定和个人识别。骨组织ＤＮＡ提取是骨组织ＤＮＡ分析的关键。作者曾用多种方法提取过骨组织ＤＮＡ ,本文报道一种改良的骨组织ＤＮＡ提取方法。方法1 去除骨骼表面的异物及残留的腐败软组织 ,用钢锯锯开骨组织 ,锯下骨松质骨片 2ｃｍ× 2ｃｍ× 0 5ｃｍ一块。2 ＥＤＴＡ脱钙 3天 ,每日更换一次脱钙液 ,(ＥＤＴＡ脱钙液 :0 2ＭＴｉｓ溶液 1 0 0ｍｌ +ＥＤＴＡ -2Ｎａ2 1 0 ｇ,用ＮａＯＨ缓慢调整ＰＨ7 0 )。3 剪碎已脱钙的海绵状骨松质于 2只 1 5ｍｌ消毒离心…     

一种改良的骨组织DNA提取方法

骨组织耐腐败,当其他软组织已完全腐败后,只能用骨组织进行种属鉴定,性别鉴定和个人识别.骨组织DNA提取是骨组织DNA分析的关键.作者曾用多种方法提取过骨组织DNA,本文报道一种改良的骨组织DNA提取方法.     

一种改良骨骼DNA的提取方法

采用十六烷基三甲基溴化铵(简称CTAB)及两次纯化浓缩的方法提取骨骼DNA,利用荧光标记复合扩增、自动毛细管电泳与分型的技术,成功检测到14个STR位点的分型.该方法稳定、结果可靠,为严重降解骨骼DNA的提取提供了一种可参用的方法.     

不同前处理方法提取牙齿DNA的比较

目的对三种不同前处理方法提取的牙齿DNA浓度进行比较,建立一种操作简便、经济适用、浓度较高的牙齿DNA提取的前处理方法。方法选择源自7具尸体的共21颗磨牙,每具尸体的3颗磨牙随机按牙屑法、球磨法、液氮研磨法进行前处理,并分别称取50 mg,采用Auto Mate Express~(TM)法医DNA提取系统提取DNA,对三种方法提取的DNA浓度和STR分型结果进行比较。结果牙屑法、球磨法和液氮研磨法提取的DNA质量浓度分别为0.055 6~1.989 1、0.036 6~1.175 6和0.037 8~1.249 0 ng/μL,牙屑法提取的DNA质量浓度较高(P0.05),且STR分型成功率高。结论牙屑法结合Auto Mate Express~(TM)法医DNA提取系统是提取牙齿DNA的一种切实可行的方法,可应用于法医学鉴定实践中。     

人骨骼及牙齿DNA提取方法的比较和优化

目的人骨骼和牙齿DNA提取方法的比较和优化。方法收集18份不同个体的长骨、30颗磨牙和同一个体2根股骨、8颗磨牙。利用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪和PreFiler Express BTA^TM法医DNA提取试剂盒（BTA法）,应用Automate Express^TM自动化法医DNA提取系统提取DNA,进行STR分型,与脱钙法进行比较,并进行实验条件优化。结果用TissueLyser-Ⅱ结合BTA法,约2.5h即可完成骨骼和牙齿的DNA提取,分型成功率分别为94.4%和96.7%。与脱钙法比较,两种方法获得DNA质量浓度和检出率比较接近（P〈0.05）,但BTA法在操作过程方面更具优势。最佳样本量为100mg,消化时间为2h。结论采用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪结合BTA法对骨骼和牙齿进行DNA提取和分型检验,能满足实际检案的要求,可在法医学实践中选择使用。     

牙齿的DNA提取及STR分型研究

目的建立有效的牙齿DNA提取方法。方法使用物理及化学方法去除牙齿表面污染物,经脱钙、裂解、纯化从牙粉中提取DNA进行STR分型。结果对96例牙齿检材进行DNA检验,获得STR分型的有94例,在查找尸源的案件中发挥了重要作用。结论本方法操作简单快速,能够显著提高牙齿DNA检验的成功率。     

2种陈旧骨骼、牙齿DNA纯化方法的比较

目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。     

一种改良Chelex地方法提取血痕DNA

对于新鲜或量足的血痕,采用文献报道的Chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得满意结果,但在日常检案过程中,陈旧而量少的血痕检材经常遇到,而且载体可能有泥沙、色素或吸附力强等PCR扩增抑制物的存在.这类检材DNA采用普通的Chelex-100快速提取法,有时很难奏效.针对以上问题,本文结合两例检案,对血痕DNA的Chelex-100快速提取法进行了一些改良,显著提高了检出率,使检案成功,报告如下:1 材料与方法1.1 材料:取自本实验室检验的两案例中的22份血痕.     

混合精斑DNA三种提取方法的比较

在法医物证学上,对于混合斑检材,一般采用Chelex法[1,2]抽提DNA,由于得率和纯度较低,检测存在失败的可能。为了提高成功率,作者对检案过程中抽提DNA的步骤进行了优化,现报道如下。1材料与方法1.1检验材料1号检材为卫生巾,2号检材为卫生纸,3、4号检材均为蓝色内裤,其中3号检材较脏且混有血痕。分别剪取1～4号检材微量,涂片经伊红美兰染色,镜检,1、2、4号检材均检见人精子,3号检材检见大量上皮细胞及少量人精子。1.2仪器与试剂梯度PCR仪(德国,Eppendorf);DYY-Ⅲ-4型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);人STR六个双基因座复合扩增银染试剂…     

全血中DNA6种提取方法的比较

目的 比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异.方法 收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析.结果 常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义.改良有机法得率最低,IQ法得率最高.统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义.结论 与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提.     

一种简便的DNA提取方法在动物毛发检验中的应用

目的建立一种简便的DNA提取方法,用于动物毛干的DNA抽提。方法利用PCR缓冲液及蛋白酶K在PCR仪上对毛发进行消化,以此DNA为模板,扩增mtDNA 12S rRNA基因的部分片段并进行序列测定,测序结果在GenBank上进行BLAST搜索,再利用DNAMAN软件进行同源性分析。结果利用这种新DNA抽提法能从无毛囊毛发中获得后续PCR扩增所需的线粒体DNA。结论该法在无毛囊毛发样本鉴定中具有较高的应用价值。     

利用AutoMate Express~(TM)自动化法医DNA提取系统提取骨骼及牙齿DNA

目的探讨建立骨骼及牙齿DNA自动化提取的新方法。方法将33份骨骼及15份牙齿样本分别用冷冻研磨和手工处理两种方法研磨成粉,采用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统提取DNA并定量。结果 AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统能够在3h左右完成骨骼、牙齿DNA的提取,两种方法处理的骨骼样本所得DNA质量浓度差异无统计学意义。冷冻研磨处理的骨骼和牙齿样本均获得了较好的STR分型结果,且牙齿样本所得DNA质量浓度高于手工提取所得。结论应用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统是自动化提取骨骼、牙齿DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验。     

一种嗜尸性蝇类干样本DNA提取方法的改良

高度腐败尸体的死后间隔时间一直是法医实践中的难题。通过在现场腐败尸体上提取的嗜尸性昆虫,判断其生活习性,可以较准确地进行死亡时间推断,因此对嗜尸性昆虫种类的准确鉴定十分重要。由于案发现场环境复杂多变、人为破坏等情况,往往现场仅能发现一些干的嗜尸性昆虫样本、昆虫破残的肢体以及于蛹壳等,用形态学方法对其进行分类受到一定限制,取而代之用分子生物学方法可对嗜尸性昆虫进行种类鉴别。     

3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较

目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。     

两种方法提取汗潜手印DNA的比较研究

目的比较M48和DNeasy○R plant Mini两种方法提取汗潜手印DNA的优劣。方法用M48和DNeasy○Rplant Mini两种方法分别提取16对汗潜手印DNA,并进行DNA定量,比较定量结果。结果 M48法明显比plant Mini法提取到的DNA量多（配对t检验：α=0.05,t=3.45,γ=15,0.002     

3种提取高度腐败检材DNA的方法比较

本文对3种DNA提取方法在高度腐败检材DNA提取中的应用进行了比较,供法医学实践参考。1材料与方法1.1材料3份检材均为尸体肋软骨,其中1号为死后在水里浸泡18天解剖,酒精固定2年的检材,2号检材为死后15天解剖,酒精固定1年的检材,3号检材为死后10天解剖,后酒精固定1月的检材。1.2 DNA提取Chelex-100法[1]3份检材各500mg剪粹,分别加入200μl 5%Chelex-100,10μl PK(10mg/m l),10μlDTT(39mmol/m l二硫苏糖醇),37℃水浴过夜,100℃加热10m in,剧烈震荡,10 000 r/m in离心10m in,上清备用。有机法[2]3份检材各500mg剪粹,分别加入400μl TES…     

3种甲醛固定组织DNA提取方法的比较

目的对不同方法提取甲醛固定组织中DNA的效果进行比较,寻找一种操作简便、经济实用、质量较高的DNA提取方法。方法取甲醛固定的心肌组织14份,分别以改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法提取DNA,进行紫外分光光度计测定OD260/OD280值后,经PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析确定提取的DNA质量。结果改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法OD260/OD280比值分别为1.841 5±0.380 4、1.370 5±0.336 7、0.831 6±0.175 0。两两比较均有显著性差异(P<0.05)。3种不同方法提取DNA含量分别为0.943 8±0.530 1、0.707 5±0.423 6、0.342 8±0.182 5。PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳显示以改良酚-氯仿法所提DNA的谱带清晰度好于其它两种方法。结论改良酚-氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的甲醛固定组织DNA提取方法。