口腔拭子DNA检验的实时定量研究

目的寻求提高口腔拭子的DNA检验效率的方法。方法对来源于不同个体或同一个体不同擦拭次数的口腔拭子用Chelex-100或磁珠法提取的DNA用实时定量PCR技术进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果在建立的Identifiler系统8μl扩增体系中,3个月内的口腔拭子用Chelex-100法提取的DNA模板1μl量较3μl量扩增效果好,磁珠法提取的DNA模板用量大小对复合扩增检测影响较小。结论用棉签擦拭颊粘膜5次制备口腔拭子,取其头部的约1/4用200μlChelex-100法提取DNA,然后用1μl模板进行复合扩增,是提高口腔拭子的DNA检验效率的简便可行的方法,但陈旧口腔拭子用磁珠法提取更能保证复合扩增分型成功。     

X-STR分型在特殊二联体亲子鉴定中的应用1例

1 案例 1.1简要案情 两名男子委托本鉴定所对他们与1名女孩是否存在亲生血缘关系进行鉴定. 1.2检验过程 本鉴定所采集3人指血,Chelex-100法提取DNA,采用PowerPlex(R) 21系统(美国Promega公司)检测20个常染色体STR基因座以及1个性别基因座,采用Investigator Argus X-12试剂盒(德国QIAGEN公司)检测12个X-STR基因座,以上扩增均在9700型基因扩增仪(美国AB公司)上完成,扩增体系和条件均按照使用说明书操作,扩增产物在3130遗传分析仪(美国AB公司)上进行毛细管电泳,用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型.     

三等位基因的遗传关系分析1例

1案例资料 魏某（疑父）、妻子卢某（母）和儿子（子）因出国公证要求进行亲子鉴定,确定父子亲子关系。1.1 DNA分型检验采用Chelex-100法分别提取上述3人新鲜血液、疑父与子的头发和口腔拭子的DNA,采用Identifiler复合扩增试剂盒（ABI公司,美国）、PowerplexTM16system（Promega公司,美国）荧光标记复合扩增试剂盒和STR-Typer 10G（科登公司,珠海）荧光复合扩增试剂盒进行检测。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较

目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。     

PowerPlex16HS试剂盒在陈旧血样DNA检验中的应用

PowerPlex16HS系统是对16个STR基因座进行联合扩增试剂盒,对PCR抑制物的耐受性较强,适于直接扩增^[1-2]。本文作者在公安部的打拐专项行动中,采用该试剂盒,对保存近10年的300份陈旧血样进行DNA检验,取得了较好的效果。     

两种DNA提取法对签字笔上脱落细胞STR分型比较

目的比较Chelex-100法和硅珠法两种DNA提取法,在签字笔上附着微量脱落上皮细胞分型中的应用效果。方法 17名志愿者每人使用14支签字笔,每支笔每天使用20min,为期1个月,平均分为两组,分别保存1、3、5、7、14、21和28d,同时运用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取签字笔上遗留微量脱落细胞中的DNA,用Identifiler复合扩增系统在AB I 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型,同时采集上述17名志愿者口腔拭子作为对照。结果以基因座检出个数为指标,使用后签字笔保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均有统计学意义(P0.01);口腔拭子保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论对于微量检材,应用硅珠法提取的DNA分型效果明显优于Chelex-100法,具有较高的应用价值,而在检材量比较多时区别不明显。     

大规模汉族个体15个STR基因座遗传多态性调查

本文利用苏州市公安系统DNA数据库资源,进行大规模汉族人群的15个基因座的遗传多态性分析。采用Amp FISTR Identifiler试剂盒、Amp FISTR Identifiler Plus试剂盒、AGCU 17+1试剂盒进行扩增,经测序后获得510 000名汉族个体15个STR基因座的DNA分型,应用Excel软件计算等位基因的分布频率等群体遗传学数据。在15个STR基因座共检出等位基因344个、基因型1890个。所调查的汉族人群15个基因座具有较好的识别力。     

盐城地区汉族人群15个STR基因座的遗传多态性

本文利用复合STR技术,应用PowerPlex(16System试剂盒对213名盐城地区汉族无关个体进行15个基因座的遗传多态性调查。现报道如下:1材料与方法213名盐城地区汉族无关个体血样,全部为本实验室办案积累。chelex法[1]或硅珠法[2]提取血样DNA,应用PowerPlex(16System试剂盒复合扩增,扩增体系10μl,热循环参数和电泳体系各组份配比按试剂盒所附操作手册设置。主要仪器:ABI9700扩增仪、ABI3100-Avant基因分析仪。对基因型数据作χ2检验。利用PowerStats分析软件对群体数据进行处理,得到15个STR基因座的杂合度(H)、个体识别能力(DP值)、偶…     

湖南沅陵土家族20个STR基因座遗传多态性

本文对中国湖南沅陵地区土家族510名健康无关个体20个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查。采用Chelex-100法提取样本DNA,用PowerPlex 21试剂盒进行PCR复合扩增,3130x1型DNA测序仪进行检测。结果20个基因座分别检出6~22个等位基因,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的湖南沅陵地区土家族人群20个STR基因座除TPOX、TH01、D7S820等3个多态性稍差外,其余均具有较好识别能力。     

PowerPlex(R)16HS试剂盒在陈旧血样DNA检验中的应用

PowerPlex 16 HS系统是对16个STR基因座进行联合扩增试剂盒,对PCR抑制物的耐受性较强,适于直接扩增。本文作者在公安部的打拐专项行动中,采用该试剂盒,对保存近10年的300份陈旧血样进行DNA检验,取得了较好的效果。1材料与方法1.1主要仪器与试剂PowerPlex(16 HS试剂盒(Promega公司,美国),BSD 600半自动取样机(BSD公司,澳大利亚),9700扩增仪、3130XL遗传分析仪(ABI公司,美国)。     

两个X-STR基因座变异亲子鉴定1例

1案例资料 1.1 简要案情及DNA分型检验 因申报户口,需要鉴定某男与1名女孩是否存在亲生血缘关系.采集某男、女孩以及其生母的末梢血液.用Chelex-100法提取DNA,采用Identifiler试剂盒(AB公司)进行15个常染色体STR基因座检测,并使用Investigator Argus X-12试剂盒(QIAGEN公司)进行12个X-STR基因座检测.实验操作按照使用说明书进行,在ABI 9700型基因扩增仪进行复合扩增,产物在ABI 3130基因分析仪上进行毛细管电泳,分别采用LIZ 500及BT0 550分子量标准为内标,用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型.     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

男性Y染色体Amelogenin Y片段及4个基因座同时缺失1例

1材料和方法1.1简要案情在某破坏公共财物案件中,因性别位点不符,3名“叶”姓男性犯罪嫌疑人的STR分型无法录入DNA数据库。经调查了解,该3名男性个体户籍地相同,年龄在30~50岁之间,发育状况良好,具备正常的男性特征。1.2DNA提取犯罪嫌疑人血样的基因组DNA采用Chelex-100法提取。1.3STR扩增分别采用Identifiler Plus扩增试剂盒、PowerPlex Y23 System试剂盒对3份样本血样DNA进行STR、Y-STR扩增,反应总体积25μL,扩增仪采用Applied Biosystems 9700 PCR仪,热循环条件按试剂盒推荐设定参数。     

DNA检验结合临床检查确定男性假两性畸形1例

1案例资料1.1简要案情2012年12月11日,林某（女,42岁）因涉嫌拐卖儿童罪被刑拘,采集血样（编号：3507021202093）作为前科人员建库样本送DNA实验室检验。1.2 DNA分型检验样本采用Identifiler Direct和PowerPlex 21试剂盒进行检验,扩增产物用ABI 3130XL型DNA序列分析仪电泳,GeneMapperID v3.2软件进行结果分析。     

Amelogenin基因座X片断变异1例

1案例资料 检验样本为本市一起伤害致死案件中的一名男性犯罪嫌疑人滤纸血样。1.1荧光法检测用chelex-100法提取滤纸血样DNA,分别用Identifiler试剂盒、Sinofile试剂盒、DNATyper15试剂盒和Y-filer试剂盒进行PCR扩增,扩增产物在3100遗传分析仪上电泳检测,Gene Mapper3.2软件分析结果。     

改良直接扩增法应用于生物检材DNA检验

Identifiler（R） Plus试剂盒性能卓越,PCR反应液经过优化,抗抑制剂能力强,适用于案件生物检材DNA检验[1].本文利用纳米银溶液和生物物证提取棉签、植绒拭子对案件常见的血痕类、唾液斑和肋软骨等进行检材转移,采用Identifiler（R）Plus扩增系统配以Prep-n-Go Buffer进行直接扩增检验,以探讨直接扩增技术对此类检材的有效性和可靠性.     

江苏地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

<正>本文采用Identifiler荧光标记复合扩增系统,对江苏地区583名汉族无关个体15个STR基因座遗传多态性进行调查,为相关人群法医学个人识别和亲权鉴定提供基础数据。1材料与方法1.1样本583份无血缘关系汉族个体口腔FTA卡样本(男495份,女88份),均为本实验室DNA数据库和日常检案积累。1.2 DNA分型检验采用Chelex法[1]提取样本模板DNA;采用     

从蚊子血中检测人DNA

目的　从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的DNA分型。　方法　Chelex10 0法提取叮咬人后的蚊子血DNA ,PowerPlex 16试剂盒和Identifiler试剂盒扩增DNA。　结果蚊子血中可成功检测出被叮咬人的DNA基因型。　结论　可从蚊子血中检测到被叮咬人的DNA数据 ,结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用 ,可大大提高检测的准确率和可靠性 ,对实际检案具有很大帮助。     

从蚊子血中检测人DNA

目的 从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者的DNA分型。方法 Chelex100法提取叮咬人后的蚊子血DNA，PowerPlex16试剂盒和Identifiler试剂盒扩增DNA。结果 蚊子血中可成功检测出被叮咬人的DNA基因型。结论 可从蚊子血中检测到被叮咬人的DNA数据，结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测的准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。