单克隆抗体斑点ELISA快速检测血痕ABO血型

本文利用酶标记单克隆抗A、抗B抗体进行直接斑点ELISA检测血痕ABO血型。此法可检测出含量相当于0.005μl的全血,整个实验过程仅需1.5小时。对48份血痕标本均能正确鉴定。与常规方法相比,具有快速、简便、灵敏等特点,有一定的实用价值。     

数字编码小卫星可变重复序列法对中国汉人分型

介绍用辣根过氧化物酶标记的寡核苷酸探针检测的数字编码小卫星MS32可变重复序列方法。经用此法研究发现，中国汉人可得到50个编码以上，无关个体前50个编码中至少有20个编码不同，未发现两个无关个体的编码相同，50个编码全部相同的概率为4．09×10-16。三种重单位，即a-型、t-型和o-型出现比例分别为61．5％、32％和6．5％。MVR－PCR得到的数字编码具有高度的变异性，识别率高，为法医物证检验提供一个新的个人识别方法。     

海南黎族群体14个STR基因座遗传多态性

STR基因座是建立DNA数据库首选遗传标记,建库需要针对目标人群做了大量的基因频率调查,本文作者应用公安部物证鉴定中心研发的DNATyperTM15试剂盒,对345个海南黎族无关个体14个基因座进行了调查。1材料与方法样本345份无关个体血样取自看守所内在押海南黎族人,采指尖末梢静脉血滴于滤纸上,阴干保存。DNA提取全部345份检材均选用Chelex-100法提取DNA[1]。复合扩增应用公安部物证鉴定中心研发的DNATyperTM15试剂盒,对14基因座进行复合PCR扩增。扩增体系为B ffer 2.0μl,10×primer 1.0μl,Taq酶0.2μl,灭菌水5.8μl,模板DNA 1.0…     

中国汉族人群2个高变MVR基因座遗传多态性

常染色体小卫星基因座D16S309(MS205)位于16p13.3(AE006466)[1],核心序列为45~54bp,重复次数8~87次[2]。D2S44(YNH24)基因座位于2q21.3-q22(AJ001534)[3],核心序列为31bp。本文采用MVR-PCR技术,选择重复单位3′侧翼区引物(公共引物)和MVR特异性引物匹配进行PCR扩增,对中国河北汉族人群2个基因座遗传多态性进行了调查。1材料与方法1.1样本及DNA提取116份枸橼酸钠抗凝血样由河北省血液中心提供,采自无血缘关系汉族健康个体。常规饱和酚-氯仿法提取DNA。1.2MVR-PCRD16S309引物序列参见文献[2,4]。反应体系为25μl,分别加入5μl…     

不同方式标记非放射性探针原位杂交效果评价

目的比较不同方式标记非放射性探针的原位杂交效果。方法通过两种方法标记地高辛随机引物DNA探针和反意RNA探针,在大鼠损伤模型的皮肤组织上进行原位杂交。结果两种探针均可满足要求,以反意RNA探针在阳性染色深度和背景方面效果更佳。结论RNA探针在杂交效果方面优于DNA探针。     

浙江汉族人群15个STR基因座遗传多态性

本文应用PowerPlex 16荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族510名无关个体15个STR基因座进行遗传学调查,现报道如下:1材料与方法1.1样本510名浙江汉族无关个体的血样来自浙江全省各地,系本实验室日常检案积累。1.2实验方法所有血样均采用硅珠法提取DNA[1]。参照文献[2]采用10μl扩增反应体系,其中包括:Gold STR 10×Buffer 1μl,Taq Gold DNA聚合酶0.3μl,10×Primer PairM ix 1μl,模板DNA 1μl(DNA量控制在0.5~1ng),用无菌去离子水补足体系,混匀,稍加离心后置AB I 9700型扩增仪中进行扩增。热循环参数为:95℃11m in,96℃1m in,然…     

安徽地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

应用荧光标记引物复合扩增技术,对安徽地区263名汉族无关个体的D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta E、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、vWA、D8S1179、TPOX、FGA等15个STR基因座的多态性调查,现报道如下。1材料与方法1.1样本及DNA提取263例汉族无关个体血样由本实验室日常检案积累,采用常规Chelex法提取样本DNA[1]。1.2复合扩增及分型按PowerPlexTM(Promega公司)16 System试剂盒说明书进行复合扩增及分型。PCR反应总体系10μl,其中Buffer 1μl,primer 1μl,Taq Gold酶0.3μl,DNA模板适量,…     

HRP标记α-珠蛋白-3′HVR探针进行DNA指纹分析的法医学应用研究

用ＩＩＲＰ标记α－珠蛋白－３′ＨＶＲＤＮＡ探针，化学光增强法检测，获得清晰易读的ＤＮＡ指纹图、分析引名广东地区无关个体的ＤＮＡ指纹图、平均每个个体有１９７条谱带，灵敏度接近同位素３２Ｐ标记探针的水平．两个无关个体间出现同一谱带的相关率为０．２１９。将此方法用于亲子鉴定，取得了令人满意的结果。     

武汉汉族人群MICA基因第5外显子STR遗传多态性

本文对武汉汉族群体M ICA-STR基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品武汉地区235例汉族无关健康个体EDTA抗凝血由武汉同济医院血库提供。所有样品采用Chelex-100法提取DNA[1]。1.2引物M ICA-STR分型采用M izuki等[2]报道的引物,其中上游引物5′端用6-FAM荧光染料标记,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.3 PCR扩增及产物检测M ICA-STR扩增反应总体积为10μl,内含200μmol/L dNTPs,50mmol/L KC l,10mmol/L Tris-HC l(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,5~10ng模板DNA,0.2μmol/L每条引物,0.5U Ampl…     

抗体芯片竞争抑制法检测尿液中吗啡含量

目的建立抗体芯片竞争抑制法检测尿液中吗啡含量的方法。方法将吗啡单克隆抗体固定在用琼脂糖包被的芯片上,与含有吗啡的尿液检材和Cy3荧光标记-吗啡-BSA复合物进行竞争抑制反应,共聚焦扫描仪采集反应图像并进行分析。结果吗啡单克隆抗体及Cy3-吗啡-BSA的最佳浓度是31.25μg/m l、12.50μg/m l,检测线性范围0.01~10ng/m。回收率在91.2%~109.2%之间,尿液检测限为0.02ng/m l。甲基苯丙胺、安非他明与吗啡抗体之间无交叉反应,与可待因有一定的交叉反应。结论抗体芯片竞争抑制法检测尿液中的吗啡含量具有灵敏度高,特异性好、操作简单、高通量等优点,可用于法医毒物检测、戒毒效果监测。     

直接扩增法在血痕、肋软骨和唾液检材中的应用

目的采用Identifiler Direct PCR试剂盒直接扩增法进行棉签擦拭血痕、肋软骨和烟蒂唾液斑DNA分型检验,并评价其应用价值。方法收集棉签擦拭血痕、烟蒂各20份,肋软骨10份,采用Identifiler Direct PCR试剂盒进行直接扩增及分型检验,以相同检材采用磁珠法/Chelex-100法提取模板DNA后扩增检验结果作为对照,对两组所得结果进行比较分析。结果棉签擦拭血痕和肋软骨一次检测完整分型率均为100%,分型结果与对照组一致;烟蒂上唾液斑有2份检材第一次未能完整分型,调整方法再次检验后获分型成功。结论实际检案中的棉签血痕、肋软骨和烟上唾液斑,采用直接扩增法检测,方法简单、快速、稳定、检材用量小,可在实际检案中选择使用。     

A 1-year time course study of human RNA degradation in body fluids under dry and humid environmental conditions

Blood, saliva and semen are some of the forensically most relevant biological stains found at crime scenes. mRNA profiling is a reliable approach for the identification of the origin of an evidentiary trace. A stable set of markers and the knowledge about the effects of RNA degradation under different environmental conditions is necessary for the determination of an unknown biological stain. The aim of this work was to compare RNA degradation for human blood, semen and saliva at three different concentrations during a 1-year time period and exposed to dry and humid conditions. Also, this study addressed the question whether there are relevant differences in the efficiency of two RNA extraction methods.     

D20S161和D8S384两个基因座在法医学中的应用

评估D2 0S16 1和D8S384两个基因座在法医学中的应用价值。用自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒 ,对人血、人精液、人唾液、动物血、人血与动物血的混合检材和人血痕、人精液斑、人唾液斑、动物血痕、人血与动物血的混合斑痕检材 ,以及陈旧血痕检材进行检测分型 ,并用这两个基因座PCR引物序列与DNA数据库进行联网对比分析。自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血、人精液、人唾液、人血与动物血的混合检材分型 ,而动物血没有PCR产物 ;自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血痕、人精斑、人唾液斑和人血与动物血的混合斑痕检材正确分型 ,而动物血痕没有PCR产物 ;斑痕检材分型结果与对应体液检材分型结果无差异 ;5 0份陈旧血痕检材全部获得阳性分型结果。DNA数据库联网比较提示 ,D2 0S16 1和D8S384基因座引物除了能与各自的模板序列发生特异性扩增外 ,理论上不能与DNA数据库中 6 0 6 36 4种已知序列产生PCR产物。D2 0S16 1和D8S384两个基因座具有高度的种属特异性 ,抗污染能力强 ,不易受降解的影响 ,是解决法医现场生物检材个人识别和亲子鉴定的理想手段     

扩增X—Y同源Amelogenin基因内含子在性别鉴定中的应用研究

本文用一对针对X－Y同源的Amelogenin基因第一内含子的引物，于同一试管中分别扩增出针对于x和Y染色体的特异性DNA片段：106bp及112bp的PCR产物，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染法观察扩增结果，取得了满意的效果．对50pgDNA模板室温放置16年的血痕及单根毛发、烟头等检材均可得到明确的性别鉴定结果．本实验证明该方法简便、灵敏、可靠、特别适用于腐败降解检材的法医学性别鉴定．     

PCR-based detection of salivary bacteria as a marker of expirated blood

Distinguishing between bloodstains caused by a spatter pattern or by expirated blood may be crucial to a forensic investigation. Expirated blood is likely to be contaminated with saliva but current techniques have limited sensitivity, especially with small bloodstains. We report that a PCR assay, designed to detect salivary bacteria, can amplify streptococcal DNA from saliva stains applied to fabrics for at least 62 days after seeding. Bacterial DNA was detected when 0.01 µl of saliva was present in the stain and the amplification was not affected by contamination with blood. These findings indicate that PCR amplification of salivary microbial DNA may have application in the identification of expirated bloodstains in forensic case-work.     

Development and validation of molecular methodologies for identification of biological traces from crime scenes

This study aimed to develop a methodology to identify biological fluids in sexual assault cases through mRNA markers. Biological fluid samples such as blood, saliva, and semen were collected from volunteers and submitted to RT-qPCR reactions with specific primers for the biomarkers HTN3 (saliva), ALAS (blood) andTGM4 (semen). The Melting (Tm) of each biological fluid was analyzed and the result inferred a high specificity capable of differentiating such traces. Biplex systems were generated to improve trace analysis in a single qPCR reaction.     

ELISA检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

<正> 1978年美国Sensabaugh分离出精浆特异蛋白P30,并成功的制备出相应的抗P30血清。1987年我国也研制出抗人精浆特异蛋白P30血清,并应用该种抗血清建立了几种琼脂扩散和电泳方法鉴定人精斑。由于人精液中P30含量不高,平均为1.52±0.676mg/ml,鉴定微量精斑存在困难。为了更有效的提高方法的灵敏度。我们建立了鉴定微量人精斑的ELISA固相P30抗体法,现报告如下。