猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的研究--菌种选择、疫苗制备及安全性试验

以国内多发的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 (APP) 1、3、7血清型强毒株作为制苗菌株 ,制成油佐剂三价灭活苗。经效力试验 ,对上述 3种血清型强毒攻击的保护率分别为 88.8%、88.8%和 10 0 % ;试验动物安全性检验及田间安全检验 ,除个别猪出现轻微体温反应及暂时减食外 ,无其他异常反应。表明该苗对猪的保护性及安全性良好     

口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫效力和最小免疫剂量的研究

为确定口蹄疫O-A-AsiaⅠ型三价灭活疫苗的安全性和免疫效果,按OIE口蹄疫疫苗效检标准和我国口蹄疫灭活疫苗质量标准,对实验室条件下制备的4批疫苗进行了安全性试验、免疫效力试验、免疫持续期试验、疫苗保存期试验和最小免疫剂量试验。结果显示,4批疫苗均对靶动物和实验动物安全,无任何毒副反应;对O、A、AsiaⅠ型口蹄疫的平均免疫效力分别为4.73、6.84和8.10 PD50/头份;一次接种的有效免疫期达6个月;2~8℃下的疫苗保存期为12个月;适宜的免疫剂量为,6月龄以上牛每头3.0 mL,6月龄以下牛每头1.5 mL。该疫苗对接种动物安全,免疫效果良好,一次接种可同时预防O、A、AsiaⅠ型3个血清型的口蹄疫。     

牛口蹄疫Asia Ⅰ型灭活疫苗研究--疫苗效力、免疫持续期及安全性等检验

用选出的制苗用种毒AsiaⅠ L/96的不同代次BHK-21细胞传代毒试制疫苗3批,共13.1 L,在室内用健康牛进行了效力试验,保护率均达100%(5/5、5/5、5/5),对照牛全部发病(3/3、3/3、3/3);免疫持续期测定2批次,免疫后6个月的牛血清中和抗体效价为120-1120,8个月为18-160,经强毒攻击保护率达65%;保存期效力试验2批次,在2-8℃保存1 a,对该疫苗的效力无影响;最小免疫剂量为每头3 mL,注射免疫牛2322头,安全性良好,无不良反应.     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

猪链球菌病三价灭活疫苗的研究--安全性与免疫效力试验

在对长春地区临床分离的 2 0株猪源致病性链球菌基因分型的基础上 ,挑选出分属 3个血清型的 4株毒力强、免疫原性好且遗传距离较远的猪链球菌作为疫苗株 ,研制猪链球菌病氢氧化铝胶三价灭活疫苗。该疫苗对小鼠、断奶仔猪、育肥猪和妊娠母猪安全性好 ,无不良反应 ,对母猪繁殖性能无影响。小鼠效力试验证实 ,该疫苗的保护率为 10 0 % ,优于单价灭活疫苗和猪链球菌病活疫苗 ;田间效力试验证实 ,2种三价灭活疫苗 (菌液浓度分别为 2× 10 9CFU/mL和 4× 10 9CFU/mL)对猪的保护率分别为 83.3%和 10 0 % ;经田间试用免疫效果较好 ,试验组猪发病率和死亡率分别为 4 .2 %和 1.8% ,对照组猪发病率和死亡率分别为 2 6 .8%和 13.4 % ,经卡方检验 ,试验组与对照组相比差异极显著。表明该疫苗的安全性好 ,免疫效力高 ,完全适用于本地区猪链球菌病的免疫防制     

猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测

应用间接血凝试验对来自甘肃、陕西、宁夏、河南、湖北、湖南和海南7个省(区)的1470份猪血清进行猪传染性胸膜肺炎血清抗体检测和分型鉴定.结果猪传染性胸膜肺炎平均抗体阳性率为20%,其范围为0-60%;分型鉴定表明,各省(区)的血清型不尽相同,主要为1、3、7型.     

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果的评价及其免疫机制的研究

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ rApxⅡ rApxⅢ rOMP)的APXⅠ抗体水平、细胞免疫水平及对APP1和APP7型菌的保护效果均显著高于其他各试验组及对照组;试验Ⅰ组(灭活疫苗)、Ⅲ组(rApxⅠ rApxⅡ rApxⅢ rApxⅣ)、Ⅳ组(rApxⅠ rApxⅡ rApxⅢ rApfa)与对照组差异显著,但均显著低于试验Ⅱ组;APXⅠ抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率呈正相关。证实rApxⅠ rApxⅡ rApxⅢ rOMP组免疫效果最好,可对2个血清型APP的攻击提供有效保护。     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——免疫试验

本研究在确证了华池“类山羊传染性胸膜肺炎”是由绵羊肺炎支原体(M.Ovipneu-monia)所致的基础上,又以地方分离株试制浓缩灭活苗3批。通过豚鼠、家兔和山羊、绵羊检验均安全,并免疫山羊12只,攻毒结果,免疫组11/12保护(保护率为91.7％)对照组9/9发病;又以8911批苗免疫绵羊4只,攻毒结果,免疫组4/4保护(保护率为100％),对照组3/3发病。田间小区免疫试验;共免疫绵羊、山羊3672只,另设对照羊1451只,经半年免疫试验观察和抽样攻毒效检,免疫羊保护率为93.9％,其发病率和死亡率比对照群分别降低74.9％和72.6％,以上结果证明了试制三批苗对山羊和绵羊均具有良好的免疫效力。免疫持续期试验,以8810批苗在现地免疫羊865只,对照羊651只,经6、12及18个月的攻毒试验,结果免疫群的保护率分别为96.5％,97.5％,92.8％,免疫群比对照群发病率/死亡率分别降低78.3％/83.0％,86.7％/89.0％,7.06/72.2％,结果证明疫苗的有效免疫持续期为18个月以上。同时以本苗与“古典山传苗”作了6、12个月对比免疫试验,结果“古典山传苗”免疫群比8810批苗免疫群的发病率/死亡率分别高83.4％/93.4％和90.0％/91.1％。并证实两种疫苗间缺乏交叉免疫力。将3批苗保存在4～6℃条件下12个月,在室温(25±5℃)中6个月,其免疫效力不减低。     

牛O-A型口蹄疫双价灭活苗研究——效力试验和最小免疫剂量试验

用制备的６ 批牛 Ｏ Ａ 型口蹄疫（ Ｆ Ｍ Ｄ） 双价灭活疫苗对黄牛进行了安全性试验、效力试验和最小免疫剂量试验。结果表明：免疫牛对 Ｏ 型和 Ａ 型同源强毒（１００ ０００ Ｉ Ｄ５ ０） 攻击的近期免疫保护率分别为９１ ．３ ％ 和１００ ％ ;免疫后１８０ ｄ时,保护率分别为１００ ％ 和９３ ．３ ％ ;免疫后２４０ ｄ 时,保护率分别为６０ ．０ ％ 和５０ ．０ ％ 。疫苗经２ ～８ ℃保存３６５ 和５４７ ｄ 后,接种牛对 Ｏ 型同源强毒攻击的保护率分别为１００ ％ 和８５ ．７ ％ ;对 Ａ 型同源强毒攻击的保护率分别为９１ ．７ ％ 和１００ ％ 。免疫剂量为２ 和３ ｍ Ｌ 时,对 Ｏ 型同源强毒攻击的保护率分别为７５ ．０ ％ 和１００ ％ ,对 Ａ 型的保护率均为１００ ％ 。     

重组ApxⅡA对胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果的影响

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体 pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测 rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25-4株)和异型菌株(APP1型 4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。     

猪伪狂犬病油乳剂灭活疫苗免疫效力和保存期试验

用华中农业大学畜牧兽医学院病毒研究室研制的猪伪狂犬病(PR)油乳剂灭活疫苗中试产品(9701、9702、9703、9704批)免疫1月龄断奶仔猪,免疫后42 d中和抗体指数到达高峰,180 d后中和抗体效价仍为阳性;于第1次免疫后56 d加强免疫,出现较高的中和抗体并持续至270 d.疫苗置20～25℃3个月、4～8℃18个月,物理性状保持不变,效力试验仍能获得较高抗体水平,对伪狂犬病病毒(PRV)鄂A株强毒的保护率为100%.     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——病原诊断

于1987年从甘肃省陇东类山羊传染性胸膜肺炎流行区采取临床可疑的山羊、绵羊病料,进行了一系列病原诊断研究,结果:排除了相关致病因素,如梅迪,维士那,山羊关节炎脑炎(CAE),衣原体及相关致病菌感染和寄生虫侵袭;最终从21例山羊6/6例绵羊病变肺组织中培养分离出支原体13株/4株,分菌率均在60％以上,分离株经初步鉴定后,经英国国际支原体鉴定中心(NCTC)最终鉴定均为绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia);以分离株人工感染健康山羊7只,绵羊3只,结果6/7的山羊,2/3的绵羊于接种后第14天始形成与自然病例相似的病变,并以7/7山羊,2/3绵羊病变肺组织中收回原接种物;以琼脂双扩散,试管凝集反应及间接血球凝集试验进行抗原性研究结果证明,分离株与绵羊肺炎支原体标准株(y—98)具有共同抗原性。从而不仅首次确证了该地本病是由绵羊肺炎支原体所致,且对山羊和绵羊都具有很高的感染率和较强的致病性。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因的克隆和表达

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型25-4株基因组DNA为模板,用PCR扩增外膜蛋白(OMP)基因特异片段,并克隆于pMD 18-T中,经酶切及核苷酸序列分析鉴定后,亚克隆于原核表达载体pGEX-6P-1,成功构建了重组表达载体pGEX-omp;以此转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),经SDS-PAGE鉴定,表达的可溶性融合蛋白分子质量约为61 ku,命名为GST-OMP。以GST亲和层析柱纯化并利用Xa因子酶解,获得切掉标签的OMP。经ELISA检测,该OMP蛋白能够与兔抗APP的阳性血清反应,具有很好的免疫活性。GST-OMP蛋白的成功表达为APPOMP相关分子生物学功能的研制奠定了基础。     

新城疫V_4株弱毒疫苗的研究─—口服免疫剂量免疫期及保存期试验

本实验结果表明：新城疫Ｖ_４株弱毒苗的最小口服免疫剂量小于１０￣（－５）×０．５ｍｌ，Ｖ_４株弱毒冻干苗在室温（１８～３０℃）避光可保存１９个月以上；Ｖ_４株弱毒湿苗在室温（１８～３０℃）避光可保存５１天对鸡胚感染性不变；Ｖ_４株弱毒苗１次口服免疫的免疫期可达７个月以上。     

鸡减蛋综合症灭活疫苗的研究──疫苗制造及免疫效力试验

用鸡减蛋综合症（EDS-76）BC127毒株接种9日龄鸭胚尿囊腔制备抗原，加福尔马林灭活后与油佐剂乳化成油佐剂甲醛灭活苗。三批疫苗实验室检验各项指标均合格，用其免疫105～140日龄未开产鸡，15～21天即可产生免疫抗体；用1／4剂量免疫21天后也能产生较强的免疫力。     

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因核酸疫苗的构建及其免疫效力

利用DNA重组技术,将编码猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH-98株的全长S基因和主要抗原位点的Sa片段分别插入真核表达载体pCI的多克隆位点中。应用酶切、PCR方法鉴定阳性重组子pCI-Sa和pCI-S。将昆明鼠随机分成A、B、C 3组(A组为pCI-Sa免疫组、B组为pCI-S免疫组、C组为pCI载体对照组),每组35只,每只鼠肌肉注射100μg,免疫3次,每次间隔2周。于初次免疫后第0、14、21、28、354、2 d采血,用ELISA检测血清抗体动态变化,流式细胞仪检测外周血CD4 和CD8 T细胞数量变化。结果表明,重组真核表达载体均能诱导免疫鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,而且pCI-Sa的免疫效果优于pCI-S。     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究──蛋鸡耐受试验及免疫持续期和疫苗保存期试验

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究──蛋鸡耐受试验及免疫持续期和疫苗保存期试验柳纪省，方玉萍，王超英（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）我们用自己分离的鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）强毒株Ｌｚ株和Ｔｓ株制备的ＩＢＤ蜂胶灭活苗对鸡进行了安全性及免疫效...     

猪丹毒豚鼠系弱毒菌株对猪口服免疫的研究——G370菌株对猪口服安全性和稳定性试验

经试验猪大剂量(2400亿至4200亿个菌)口服猪丹毒豚鼠系弱毒菌株(G370)是安全的,血、粪、尿检查无菌,不引起同居感染;而强毒菌经口服可使猪发病死亡。口服G370菌10天内迫杀猪在淋巴结检菌阳性,10天后则为阴性,证明口服本菌后不能长期带菌。G370菌株通过猪体10代和G450菌株通过猪体5代后均未见毒力增强。