抗弓形虫独特型抗体的研究——抗弓形虫独特型抗体免疫效果的观察

用抗弓形虫McAb(3C_1)经纯化处理,免疫兔,制备多克隆抗-Id抗体(Ab_2)。用M-206佐剂制得抗-Id疫苗,免疫猪和小白鼠;Ab_2免疫剂量:猪31.75mg/头,鼠2.5mg/只。免疫后7天测抗体效价1:4、28天1:64(IHA)。28天用弓形虫强毒(GJS)按10~7/头(猪),10~3/只(鼠)活虫攻毒,结果免疫猪无明显临床症状,体温呈—过性反应(41.2～40.2℃,3天或不明显低烧);对照猪(未免疫)持续7天高温(41.8～40.4℃),表现废食,静卧无神。攻毒30天后剖杀,分离病原,分虫率2/5(免疫猪)、1/1(对照猪)。免疫小鼠攻毒后存活率40％(4/10),检虫率100％; 对照鼠全部死亡(5/5)。证明抗-Id抗体作为无弓形虫病原替代物,具有一定的免疫原性和免疫保护力,可保护猪、鼠经受强毒攻击的免疫效果。     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗弓形虫独特型抗体对小白鼠免疫保护试验

应用抗弓形虫McAb(Ab_1)免疫家兔制备poly抗Id(Ab_2)抗体免疫健康BALB/c小鼠,用弓形虫强毒(GJS)10~4攻击,进行免疫保护力效检。结果末经免疫的对照鼠5天内全部死亡,免疫鼠可存活11天陆继死亡。虫检率为100％,初步证明抗Id抗体做为弓形虫无病原抗原替代物,可诱导鼠体免疫应答,产生一定的免疫保护力、可延迟小鼠的死亡时间。提示抗弓形虫Id有进一步深入研究的价值。     

猪水泡病病毒抗独特型抗体的研究──Ab_2的免疫原性及在诊断中的应用试验

用猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）抗独特型抗体（Ａｂ_２）２Ｂ_６─Ａｂ_２和４Ｈ_９─Ａｂ_２分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备ＳＶＤＶ抗─Ａｂ_２（Ａｂ_３），通过ＥＬＩＳＡ、正向间接血凝试验（ＰＨＡ）、反向被动血凝抑制试验（ＲＰＨＩ）和细胞中和试验结果表明，Ａｂ_３为特异性的抗ＳＶＤＶ中和抗体。提示ＳＶＤＶＡｂ_２能模拟ＳＶＤＶ抗原的中和表位，在实验动物中具有类似ＳＶＤＶ的免疫原性。ＳＶＤＶＡｂ_２抑制ＥＬＩＳＡ结果表明，ＳＶＤＶＡｂ_２可作为一种生物探针，检测猪血清中抗ＳＶＤＶ抗体。     

猪水泡病病毒抗独特型抗体的研究─—Ab_2的制备与鉴定

用猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）中和单抗（Ａｂ_１）２Ｂ_６和４Ｈ_９免疫家兔，制备出ＳＶＤＶ兔抗独特型抗体（Ａｂ_２），经亲和层析纯化，用ＥＬＩＳＡ鉴定性质。结果表明，所制各的Ａｂ_２能竞争抑制Ａｂ_１与ＳＶＤＶ抗原结合，同时，Ａｂ_２与Ａｂ_１的结合可被病毒抗原阻断，表明所制备的Ａｂ_２具有ＳＶＤＶ抗原内影像关系。     

兔源抗IBDV独特型抗体疫苗的制备

用纯化的抗鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体免疫家兔，将所获效价较高（１∶１６）的兔源抗ＩＢＤＶ独特型抗体分别与福氏完全和福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗。用该疫苗免疫迪卡公雏鸡和ＳＰＦ鸡，经用ＩＢＤＶ强毒株以点眼和滴鼻方式攻击，试验组的保护率分别为９８／９８，１００／１００，４９／４９，大群免疫接种的应答率为１００％。     

用醛化红细胞分离抗禽流感病毒独特型多克隆抗体

用纯化的鸡抗禽流感病毒(AIV)抗体免疫家兔,制备抗独特型多克隆抗体;用戊二醛醛化的红细胞固定非特异性鸡抗体,再吸附兔抗鸡抗体,获得了纯的抗独特型抗体。经鉴定,该抗体既有弱的血凝性又有弱的血凝抑制性,并能与原病毒竞争性地和鸡抗AIV抗体结合。     

布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株的建立及免疫特性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的细胞株A_7免疫BALB/C鼠,进行细胞融合。用竟争抑制ELISA筛选出5个阳性孔。克隆化后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株。其中F9株经传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生生高效价的抗独特型抗体。其Ig类型鉴定为IgG_(2a),并证实具有抗原“内影象”。以鼠RBC为载体将其吸附于RBC上进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫动物产生相当效价的抗布氏杆菌抗体(Ab_3)。     

牛种布氏杆菌抗独特型抗体苗的研究

在筛选出能产生效价高、特异性强的抗牛种布氏杆菌单克隆抗体细胞株A_7及其对患病奶牛有一定疗效的基础上,将提纯的该单克隆抗体免疫家兔,使产生高效价的抗独特型抗体,后者经提纯和加以适当佐剂免疫豚鼠和牛。检测结果表明:免疫豚鼠和牛产生了布氏杆菌凝集抗体;免疫豚鼠强毒菌株攻击后有较好的免疫保护力,证明该抗独特型抗体具有抗原“内影像”和布病疫苗的作用。     

华南地区军警犬弓形虫旋毛虫血清抗体调查

采用酶联免疫吸附试验对广西、广东军警犬进行了弓形虫和旋毛虫血清抗体调查。采样１０１份，其中广西３０份，广东７１份。检出弓形虫抗体阳性５份，阳性率４．９５％；旋毛虫抗体阳性１份，阳性率０．９９％；广西的弓形虫、旋毛虫阳性率均为３．３３％；广东弓形虫阳性率为５．６３％，旋毛虫未检出。     

抗弓形虫SAG2蛋白单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

为制备抗弓形虫SAG2蛋白的单克隆抗体(McAb),用纯化的rSAG2蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选稳定分泌高效价McAb的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单抗。用ELISA方法测定其效价;单克隆抗体类型鉴定试纸条鉴定其类型;Western-blot和IFA试验进行特异性鉴定。结果显示,筛选出2株能稳定分泌抗SAG2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为5E2、2A8。间接ELISA测定其效价分别为1∶256 000、1∶128 000;2株单克隆抗体亚型均为IgG1型,轻链均为κ链;Western-blot与IFA试验表明,这2株McAb均能够特异性识别天然构象的SAG2蛋白,并且进一步说明此蛋白是位于弓形虫膜表面的蛋白。成功获得了具有较高特异性及敏感性的抗SAG2蛋白的单克隆抗体,并能特异性识别天然构象的SAG2蛋白,为弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测,并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测,与弓形虫IHA检测结果的符合率为82.5%,金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2 d检测到抗体。结果表明,检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂(金标试纸条)的敏感度高于IHA。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒株F蛋白前体(F0)F2片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白(BSA)化学偶联制备成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清.经ELISA检测,该抗体与NDV弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒(FPV)、鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)、NDV强毒F48E8株和四平株呈阴性反应.试验结果证明该抗体可以用于鉴别NDV弱毒株.     

云南省家畜弓形虫病的调查

应用间接血凝试验(IHA)对云南省大理、丽江、红河、玉溪、昆明等地区的主要家畜进行了弓形虫抗体检测,共抽查家畜血清1076头份,发现阳性125份,阳性率为11.62％。其中包括,猪血清525份,阳性率为20.19％;马132份,阳性率为1.51％;牛205份,阳性率为1.44％;羊202份,阳性率为6.93％。检测抗体滴度均达到或超过1:64。猪的阳性检出率最高,很可能是云南地区人畜自然感染弓形虫的重要感染源。     

牛支原体MBOVPG45＿0212的原核表达及其免疫原性分析

为探究牛支原体MBOVPG45＿0212蛋白的免疫学功能,以牛支原体基因组DNA为模板,PCR扩增MBOVPG45＿0212基因并测序分析;经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用Ni-NTA纯化目的蛋白,Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况;将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体,Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示,MBOVPG45＿0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白;纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应,免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上,显示重组MBOVPG45＿0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45＿0212蛋白,并制备其高效价的多克隆抗体,为其后续生物学功能研究奠定了基础。     

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究

利用真核细胞表达系统制备了猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白,旨在探索病毒样颗粒(VLPs)的形成及其免疫原性.以pCAGGS为表达载体构建了重组质粒pCAGGS-Cap-Flag,瞬时转染293T细胞,利用Flag标签对表达的Cap蛋白进行纯化.通过电镜观察重组Cap蛋白形成的VLPs形态表明,纯化的重组Cap...     

人参皂甙Rg1对弓形虫P30融合蛋白免疫效果的影响

将120只ICR小鼠随机平均分为6组,除生理盐水对照组、P30融合蛋白免疫对照组和P30融合蛋白+弗氏佐剂免疫对照组外,其余3组分别在P30融合蛋白中按10、50、100μg/kg加入人参皂甙Rg1。将ICR小鼠皮下多点注射融合蛋白及融合蛋白与不同免疫佐剂的混合液,健康对照组用PBS代替;2周后以相同剂量和途径加强免疫一次。结果表明,人参皂甙各剂量组均能显著提高淋巴细胞的增殖水平和机体对融合蛋白的免疫应答水平;P30融合蛋白+弗氏佐剂免疫组的免疫保护效果最好;3个不同剂量人参皂甙组中以P30融合蛋白+50μg/kgRg1免疫组的保护效果最好。     

弓形虫单克隆抗体试剂的研究——应用RIHA及IHA法对弓形虫感染兔、羊循环抗原和抗体的检测

应用抗弓形虫单克隆体(McAb)致敏绵羊红细胞建立的反向间接血凝诊断法(RIHA)和间接血凝诊断方法(IHA),对人工感染弓形虫的兔、羊血清进行了循环抗原(CAg)和抗体(Ab)检测。结果表明,弓形虫弱毒(QHO)株和强毒(RH)株感染的兔和羊血清,用RIHA检出CAg的时间在感染后1～2天,平均4天;IHA检出Ab的时间在感染后8～16天,平均12天。用毒力不同的弓形虫感染后,CAg检出时间有一定差异:QHO株感染的兔平均5.3天,羊平均6.25天;RH株感染的兔平均2.3天,羊为1天。兔、羊CAg的阳性检出率均为100％。兔、羊血清CAg于感染后23～66天先后消失,而Ab滴度长期维持在一定高度(1:64～1:4096)。证明RIHA方法对不同毒力弓形虫感染的动物血清CAg可以达到早期诊断的目的。为弓形虫病急性期和早期现症感染提供了可靠的诊断方法和手段。     

抗独特型抗体及其在疫病防治上的研究进展

自从1974年N.K.Jerne提出免疫网络学说以来,对于抗独特型抗体的研究日益增多,尤其是在感染性疾病的研究中,已显示出诱人的发展前景。Jerne认为,机体免疫系统内的各个细胞克隆,通过自我识别,相互刺激,或相互制约,构成一个动态平衡的网络结构。构成网络结构的物质基础,就是位于抗体分子上的独特型和抗独特型。Jerne因此在1984年获诺贝尔奖。 (一)抗独特型抗体的生物学基础 抗体是一类在抗原物质对机体刺激后所形成的、具有与该抗原发生特异结合反应的球蛋白。目前常把具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白,通称为免疫球蛋白(Ig)。Ig分子上有两种性质截然相反的部位,其     

抗弓形虫MIC3单抗的制备及其在速殖子免疫荧光观察中的应用

为开展弓形虫速殖子阶段蛋白表达和定位的相关研究,利用弓形虫重组微线体蛋白3(MIC3)抗原研制单克隆抗体,筛选出适合在虫体内用免疫荧光观察该蛋白的单抗分泌株,建立了弓形虫间接免疫荧光观察方法。结果显示,经4轮亚克隆后得到3株稳定分泌抗MIC3单抗的分泌株:4G1、1G12和5D7;经测定,3株MIC3单抗4G1、1G12和5D7的亚型分别为IgG1、IgG2b、IgG2b,效价分别为1∶3 200、1∶12 800、1∶1 600。筛选得到的2株MIC3单抗(4G1和1G12)可用于间接免疫荧光检测MIC3蛋白在虫体中的分布。通过弓形虫阳性感染猪血液样品推片的免疫荧光试验,验证了这3株单抗具有特异性。结果表明,研制的MIC3单抗和虫体荧光观察体系可用于速殖子MIC3蛋白在虫体表达定位和其他研究,也可作为其他速殖子抗原荧光观察的比较对象。