猪圆环病毒1型抗体IPMA检测方法的建立及应用

建立了一种用于检测猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法.对该方法的反应条件、特异性、敏感性及重复性等进行了系统试验,并与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测结果进行了比较.结果显示,用IPMA法对已知PCV1和猪圆环病毒2型(PCV2)参考阳性血清进行检测,血清稀释度≥1:100即可消除2种病毒间的低水平交叉反应,与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应;与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测符合率为88.9%.用该方法对黑龙江省、吉林省、河北省、上海市、辽宁省等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%和80.5%,PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在.建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,不失为PCV1流行病学调查及血清抗体检测的有效技术手段.     

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体。结果显示,所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在,161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86.95%。从上述样品中随机抽取28份样品,用PCR方法检测了PCV2 ORF1基因;结果,从13份血清中扩增到了特异性PCV2 ORF1基因,阳性率为46.42%。证实,西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。     

基于猪圆环病毒2型病毒样颗粒的间接ELISA抗体检测方法的建立

为了建立一种更加安全、可靠的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测方法,以实验室前期通过大肠杆菌表达系统获取的PCV2病毒样颗粒(VLPs)为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法.用建立的间接ELISA方法检测272份来自不同猪场的血清,并与不同间接ELISA试剂盒的检测结果进行比较.结果 表明,基于PCV2 VLPs的...     

猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法.用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验.用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%.另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%.表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重.     

PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段.通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法.敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 Pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 Pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性.119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性.表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断.     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析方法的建立

为建立一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测方法,以胶体金标记PCV2dcap蛋白(PCV2dcap蛋白为cap蛋白去除N端信号肽的截短蛋白)包被检测线、PCV2dcap蛋白的单克隆抗体包被质控线。用制备的试纸条分别检测了PCV2、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、甲型流感病毒(H3N2)的标准阳性血清以及浙江省不同猪场的479份临床血清,并同瑞普(保定)生物药业有限公司生产的ELISA试剂盒的检测结果进行了比较;制备了5个不同批次试纸条,通过批内和批间差异试验数据来衡量试纸条的稳定性。结果显示,该试纸条仅同PCV2的阳性血清有反应性,同上述常见猪病病毒的阳性血清没有交叉反应性;该方法同ELISA的阳性符合率为99.57%,阴性符合率为100%,总符合率为99.58%;试纸条的批内变异系数小于2.50%,批间变异系数小于7.60%。结果表明,该方法可用于PCV2相关疾病的快速诊断、流行病学调查以及疫苗免疫效果的评估,对PCV2相关疾病的监测和预防具有重要意义。     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I-ELISA检测方法的研究

用重组杆状病毒表达的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白作为抗原,建立了诊断猪生殖和呼吸综合征(PRRS)的I-ELISA,与IDEXX公司试剂盒检测结果的符合率为97.3%,与间接荧光抗体试验(IFA)的符合率为100%.用该方法检测国内猪血清85份,阳性率为18.8%;能检出PRRS疫苗免疫猪6 d的血清抗体;与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应.     

猪萨佩罗病毒VP1蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

为建立猪萨佩罗病毒(PSV)的快速检测方法,本试验以重组VP1蛋白为包被抗原建立了检测PSV Ig G的间接ELISA方法。RT-PCR从PSV分离株SHCM2019中扩增VP1基因,将其克隆到原核表达载体p ET28a,对重组质粒pET28a-VP1进行原核表达,经Western-blotting检测后,利用VP1重组蛋白建立检测猪血清中PSV Ig G抗体的间接ELISA方法。结果显示,表达的VP1蛋白分子质量约为40 ku,与预期大小相符,Western-blotting表明,重组蛋白与PSV抗体阳性血清具有良好反应原性。以VP1蛋白为抗原建立的ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清均无交叉反应,特异性好;批内和批间的变异系数均小于10%,重复性好。利用建立的间接ELISA方法对95份猪临床血清样本进行检测,阳性率为44.21%。本研究建立的检测方法为PSV的血清学诊断提供了可靠手段。     

杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查

从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV 2在杭州地区猪场的感染较普遍     

猪圆环病毒2型和猪生殖与呼吸综合征病毒混合感染的检测

对采自甘肃省天水市某猪场的24份病猪组织器官样品(肺、脾、肾和淋巴结)进行了病毒分离,同时设计特异性引物,建立了分别检测猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的PCR和RT-PCR方法,应用ELISA方法检测了血清中PCV-2及PRRSV抗体,以调查该猪场PCV-2和PRRSV混合感染的情况.结果显示,有14份样品均扩增出了PCV一2和PRRSV的目的基因片段,且PCV-2及PRRSV抗体均呈阳性.证实,该猪场出现了PCV-2和PRRSV的混合感染,阳性率为58.33%.     

犬细小病毒血凝抑制抗体和中和抗体的关系

对8份犬细小病毒免疫的犬血清同时进行中和(SN)抗体和血凝抑制(HI)抗体检测.结果,SN抗体和HI抗体具有正比线性关系,SN抗体近似于6倍HI抗体.其中HI抗体检测可在3 h内获得结果,操作简便,通过测定HI抗体效价即可推算出SN抗体的效价.     

动物源食品中残留克伦特罗检测抗体的制备与应用

采用重氮化法将盐酸克伦特罗 (CL)与牛血清白蛋白 (BSA)交联 ,用紫外扫描和凝胶电泳对交联物鉴定后免疫新西兰纯毛白兔 ,制备抗血清。经鉴定 ,抗血清中含有针对CL的抗体 ,效价为 3.2× 10 5;以此抗体为基础 ,设计了间接酶联免疫法 ,该法的检出限为 0 .0 96ng/mL ,对加于尿液、血液和组织中CL的回收率为 80 %～ 12 0 % ;通过重复性、灵敏度、准确性等指标对该法进行了评估 ,并与高效液相层析 (HPLC)及国外进口试剂盒进行了比较 ,表明该法的各项参数均能满足实际检测的需要。     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎 (ILT)的荧光抗体检测技术 ,用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体 ,对 15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和 10份健康鸡的气管分泌物进行了检测 ,并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示 ,人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达10 0 % ,ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为 0 ;该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高     

免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响

对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅,用H5亚型禽流感疫苗免疫后,其HI抗体消长情况进行了比较和观察,结果,初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗(H5亚型)产生良好的免疫应答;雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退;母源抗体对H5禽流感疫苗免疫后的HI抗体水平存在一定的干扰作用;加强免疫鸭和鹅所产生的H5HI抗体水平及其维持时间与仅免疫一次的鸭和鹅所产生的抗体水平之间存在显著差异;鸭和鹅免疫H5禽流感疫苗后第25~30dH5HI抗体水平达到高峰。     

鸡六联超免疫卵黄抗体液的制备及应用

鸡新城疫、鸡传染性腔上囊炎、鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒和鸡大肠杆菌病是危害养鸡业最严重的传染病 ,常造成巨大的经济损失。笔者与甘肃省白银市、兰州市等地的一些鸡场密切配合 ,利用当地分离鉴定获得的毒株 ,试验制备了防治上述 6种疫病的超免疫卵黄抗体液 ,用于一些鸡场和专业户对这几种传染病的防治 ,显著降低了这些疫病的发病率和鸡群的死亡率。1　材料1.1　供蛋鸡　选刚开产、产蛋率高的母鸡 10 0只 ,经检测无可经卵传递的病原体 ,隔离饲养。1.2　抗原　免疫鸡所用抗原包括用白银、兰州等地分离获得的传染性腔上囊炎病毒制备的组织灭…     

应用自制荧光抗体检测仔猪副伤寒

用兔抗猪伤寒沙门菌抗体自制荧光抗体对仔猪副伤寒进行了实验室诊断。结果表明 ,用自制荧光抗体在 2～ 3h内即可对仔猪副伤寒做出诊断 ,比直接镜检的特异性和敏感性均强。     

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体,对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究,从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应,与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染,表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体,对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF,培养上清液和腹水的抗体效价分别为1∶80和1∶10 000。抗体蛋白属IgG类,亚类为IgG2/κ。     

孔雀石绿单克隆抗体的制备及其鉴定

用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定,该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6,间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105,该细胞连续培养10代以上,生物学性状稳定,间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示,无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5μg/L,除孔雀石绿外,与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应,表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的制备

用1∶10稀释的兔出血症病毒(RHDV)加等量佐剂乳化后接种BALB/C小鼠3次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过用间接ELISA试验筛选、克隆出分泌抗RHDV单克隆抗体的杂交瘤细胞林E_3E_6。     

氯霉素全抗原合成及多克隆抗体的制备

用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白 (BSA)和卵清蛋白 (OVA)偶联 ,制备免疫抗原和包被抗原 ,用ELISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白兔 ,制备多克隆抗体 ,并用硫酸铵沉淀法初步纯化 ,用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于氯霉素检测 ,最低检查限为 0 .3ng/mL。