绵羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定

本研究对疑似患有溶血性曼氏杆菌的病羊肺组织进行病原分离,并对分离菌株进行生化反应、动物致病性试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表示,分离菌株为革兰阴性短杆菌且具有较强的致病性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌,该分离菌株对大部分抗菌药物敏感,对红霉素和庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药。本研究为溶血性曼氏杆菌病选择合理、正确的抗菌药物提供了一定的科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。     

山羊溶血性曼氏杆菌2型的分离鉴定

为了确定某养殖场奶山羊细菌性感染导致死亡的具体病原种类,从送检的肺和肝组织病料中分离纯化细菌。通过生化培养特性观察、16S rRNA和毒力基因的PCR扩增、血清型鉴定、药敏试验和致病性试验来鉴定病原种类。结果显示,从送检的组织中分离出2株革兰阴性球杆菌;16S rRNA和毒力基因LKT测序结果表明,所分离的病原菌为溶血性曼氏杆菌,血清型鉴定均为溶血性曼氏杆菌A2型,故可确定分离株为具有致病性的溶血性曼氏杆菌2型。药敏试验结果显示,分离株对羧苄西林、庆大霉素敏感,对氨苄西林、卡那霉素等中度敏感,而对复方新诺明具有耐药性。小鼠致病性试验表明,接种分离株后小鼠于24 h内陆续死亡,并从剖检小鼠肺中也检测到溶血性曼氏杆菌,表明该菌有一定的致病力。结果表明,造成山羊死亡的主要病原是溶血性曼氏杆菌,这为溶血性曼氏杆菌病的临床用药提供了参考。     

基于gcp基因的溶血性曼氏杆菌LAMP检测方法的建立

为建立一种快速、准确并可定量检测溶血性曼氏杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究针对溶血性曼氏杆菌gcp基因设计5条特异性引物,在链置换DNA聚合酶的作用下,优化反应条件,并进行特异性和敏感性试验。特异性检测结果表明,建立的LAMP扩增方法可以在65 min内完成,并具有良好的特异性,检测化脓隐秘杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、牛支原体、鼠伤寒沙门菌、溶血性巴氏杆菌等其他6种常见牛呼吸道综合征致病菌和空白对照(水)时结果均为阴性;灵敏性检测结果表明,建立的LAMP方法检测溶血性曼氏杆菌质粒标准品的最低检出浓度为0.855×10^-4ng/μL;在对临床样品的检测中,本研究建立的LAMP方法对溶血性曼氏杆菌的检出率为52.63%(10/19)大于PCR方法的检出率47.36%(9/19)。以上结果表明,本研究建立的基于gcp基因的溶血性曼氏杆菌LAMP检测方法为溶血性曼氏杆菌的快速检测提供了一种新的技术手段,该方法特异性强、灵敏度高、快速简便,可将该方法推广至基层和流行病调查一线,应用于该病原的快速检测。     

牛源支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

从2008年黑龙江省某奶牛场犊牛中暴发的一种以呼吸道病变为主疾病的患病牛中分离出3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化特性等将分离菌鉴定为支气管败血波氏杆菌.对分离菌进行药敏试验、皮肤坏死试验及16 S rRNA基因的克隆和序列分析.结果显示,该菌对氟哌酸、丁胺卡那霉素、庆大霉素、氯霉素敏感,可导致豚鼠皮肤坏死;其16 S rRNA基因序列与GenBank中收录的标准菌株Bb RB50株(BX640449)同源性为100%.证实,引起该病的病原是支气管败血波氏杆菌.     

溶血性曼氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、准确检测猪溶血性曼氏杆菌TaqMan荧光定量PCR方法,根据溶血性曼氏杆菌16S rRNA基因保守序列设计种特异性引物及探针,优化反应条件,建立了检测溶血性曼氏杆菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,以重组质粒pMD-MH-16S为标准品建立的标准曲线在3.06×10~8~3.06×10~1copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到3.06×101 copies/L的标准品阳性质粒。该方法与其他24种常见细菌均无交叉反应,批内和批间变异系数均小于3%。应用建立的方法和普通PCR方法对65份临床样品进行检测,阳性率分别为56.92%和21.54%,阳性符合率为100%。本研究结果表明,所建立的方法可用于牛、羊溶血性曼氏杆菌感染的高通量快速诊断以及溶血性曼氏杆菌的快速鉴定及定量分析。     

病鸡眼中禽波氏杆菌的分离与鉴定

病鸡眼中禽波氏杆菌的分离与鉴定朱瑞良，牛钟相，张绍学，唐珂心（山东农业大学动物科技学院泰安２７１０１８）１９９３年，山东三个地市的父母代蛋鸡场及商品蛋鸡场普遍发生一种以鸡眼睛失明、消瘦、死亡率高为主的传染病，从不同品种、不同日龄的病鸡限部分离细菌，皆...     

云南支气管败血波氏杆菌的分离、鉴定与猪波氏杆菌病的诊断研究

猪波氏杆菌病(Bordetellosis)又称猪传染性萎缩性鼻炎(Infectious Atrophic Rhi-nitis of swine),是一种以鼻甲萎缩为特征的慢性呼吸道传染病。临床主要表现喷嚏、擦鼻、鼻血和颜面畸形,少数仔猪还可引起支气管肺炎,气管炎及发育迟滞等综合症。早在1830年德国文Franquc首先载述于《喷嚏性疾病》一书中,尔后陆续见有此病的报导和研     

化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)和溶血性曼氏杆菌(M.haemolytica)快速核酸检测方法,本研究根据化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌16S rRNA保守序列设计2对特异性引物及2条TaqMan探针.经对反应体系和反应条件进行优化,建立了化脓隐秘杆菌和溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方-法.特...     

致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

为建立一种快速鉴别检测致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,根据溶血性曼氏杆菌16S rRNA和白细胞毒素(lktA)基因保守序列设计特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了鉴别致病性与非致病性溶血性曼氏杆菌的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法与其他24种常见牛羊细菌均无交叉反应,具有较好的特异性;其检测lktA基因阳性和阴性溶血性曼氏杆菌的最低检出限度均为40 copies,具有较好的敏感性。应用建立的双重荧光定量PCR方法和普通PCR方法对48份临床样品进行检测,这2种方法检出的溶血性曼氏杆菌阳性率分别为27.1%和18.8%,检出lktA基因阳性溶血性曼氏杆菌的阳性率分别为20.8%和12.5%,阳性符合率为100%。本研究中建立的双重荧光定量PCR方法为牛羊溶血性曼氏杆菌致病性与非致病性菌株感染的高通量快速鉴别诊断提供了可行手段。     

猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌二重TaqMan荧光定量PCR方法,本研究根据猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌16S rRNA基因保守序列设计种特异性引物及探针,并优化反应条件,建立了检测猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的二重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建方法特异性良好,与其他25种常见细菌均无交叉反应。猪丹毒杆菌检测在2.07×108~2.07×103copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到2.07×102copies/L的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3%;溶血性曼氏杆菌检测在1.07×108~1.07×103copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可以检测到1.07×102copies/L的标准品阳性质粒,批内和批间变异系数均小于3%。应用建立的二重荧光定量方法和普通荧光定量方法对47份临床样品进行检测,符合率为100%。本研究结果表明,所建立的方法可用于猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌感染的高通量快速诊断以及猪丹毒杆菌和溶血性曼氏杆菌的快速鉴定及定量分析。     

貉源细小病毒的分离鉴定

从大庆某貉养殖场采集病貉的病理病料,处理后接种于犬肾细胞(MDCK),分离到8株病毒.对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定试验,应用PCR方法扩增分离毒株VP2部分基因并进行序列分析.结果显示,病料接种MDCK细胞72 h后产生了明显的细胞病变(CPE);分离毒株可以被犬细小病毒阳性血清中和,中和效价为1:106～1:107;分离毒株对氯仿、乙醚不敏感,耐酸耐热,可以凝集猪红细胞,其凝集作用可被犬细小病毒阳性血清抑制;用PCR检测病毒的细胞培养液,可扩增出长531 bp的片段,该片段的核苷酸序列与吉林分离的犬细小病毒株(EU310373)的同源性为99.6%.表明,分离的这8株病毒均为貉源细小病毒.     

甲鱼嗜水气单胞菌的分离与鉴定

20 0 1年 3月 18日 ,凭祥出入境检验检疫局和有关部门截获从凭祥市浦寨边贸点偷运入境的东南亚某国甲鱼 6ｔ ,对其中的 5箱甲鱼进行检查 ,发现有 6只甲鱼甲部有溃烂硬疖 ,疖面边缘整齐 ,形成火山口状的脓疱 ,中间呈豆腐渣样 ,挑出粉渣物呈现一圆形空洞 ,并有血液渗出 ,周边有炎症 ,病灶直径约 5ｍｍ。抽样取有病变的甲鱼送实验室做细菌学检验 ,分离出 1株细菌 ,经生化鉴定、动物致病性试验 ,鉴定为嗜水气单胞菌。1　材料去氧胆酸盐Ｈ2 Ｓ乳糖琼脂 (ＤＨＬ)、营养肉汤、细菌生化微量鉴定管 :均购自浙江省杭州天和微生物试剂有限公司 ;小白鼠 …     

牛产气荚膜梭菌的分离与鉴定

针对海南牛猝死的现象 ,采集 2 3头病牛的病料进行细菌分离培养。从菌落、菌体的形态、细菌生化特征、动物试验、细菌动力学试验等方面对病原菌进行了鉴定。结果表明 ,病原菌为革兰氏阳性粗短杆菌 ,严格厌氧 ,β 溶血 ,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和含铁牛乳 ;厌气肉肝汤培养物滤液 0 .1～ 0 .2mL皮下注射可致死小白鼠。根据试验结果鉴定其为产气荚膜梭菌     

狐狸奇异变形杆菌的分离与鉴定

无菌采取病死狐狸内脏,用LB液体培养基和麦康凯琼脂平板培养,分离到1株细菌,通过对该菌的形态特征、培养特性、生化特性进行分析,初步鉴定为变形杆菌。用PCR方法扩增该分离菌株的16 SrRNA基因,结果获得大小为1 539 bp的DNA片段(已登录GenBank,登录号EU643833)。经BLAST分析,结果表明,该分离株的16 S rRNA基因核苷酸序列与GenBank上登录的奇异变形杆菌分离株(AY820623、EF091150)的同源性为99.7%,证实该分离菌株为狐狸奇异变形杆菌,并命名为HU/08。致病性试验证明,该分离菌株对小白鼠有高致病性;毒素测定试验证明,该分离菌培养液的无菌滤液对小白鼠无毒性作用。     

黄喉拟水龟腹泻病的病原分离与鉴定

黄喉拟水龟属龟科、拟水龟属 ,俗称黄喉水龟、石金钱、香乌龟等。龟肉味道鲜美可口 ,具有滋补功效 ,龟板可入药 ,且繁殖率较高 ,易养殖 ,生长快 ,人工养殖黄喉拟水龟具有较广阔的前景。凭祥市李某于 2 0 0 1年开始养殖黄喉拟水龟 ,到 2 0 0 2年 7月份 ,共有亲龟 2 0只 ,1～ 2岁龄幼龟 5 6只 ,主要饲喂黄粉虫、鱼类、肉类、青菜和水果。龟池每 2周用万福金胺消毒 1次 ,未发生过疾病 ,也无死亡。 2 0 0 2年 7月 2 4日 ,几乎所有龟都不同程度地表现行动迟缓 ,采食缓慢或不食 ,拉墨绿色稀便。 2 6日死亡 3只幼龟 ,2 7日又死亡 3只幼龟 ,死亡率 7…     

猪源新城疫病毒的分离鉴定

从发生呼吸道症状的病猪鼻腔中分离到 1株病毒 ,经电镜观察、血凝和血凝抑制试验 ,确定为新城疫病毒。经对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、对鸭胚和鸡、鸭的致死性测定及荧光PCR检测 ,证明分离毒为温和型毒株。     

猴源环孢子虫的分离与分子鉴定

采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子化试验首次从广东某猴场的猴粪中分离到疑似环孢子虫卵囊。为了对其进行分子鉴定,采用巢式PCR和普通PCR方法,针对环孢子虫属18SrDNA和ITS基因设计了3对引物,扩增其目的片段,并进行了序列分析。结果显示,卵囊大小为7.5～10μm,经改良抗酸染色的卵囊染色程度不一,孢子化卵囊内含2个孢子囊,每个孢子囊内含有2个子孢子。通过PCR扩增,获得的18SrDNA目的片段长712bp,测序结果表明该猴源环孢子虫18SrDNA基因与Cyclosporacolobi、狒狒环孢子虫、人环孢子虫的相似率较高,在进化树上位于同一分支。获得的ITS-1+片段长760bp,其中ITS-1序列高度特异,在GenBank中未见同源性序列。结果表明,从猴粪中分离的疑似环孢子虫卵囊应属于环孢子虫。     

猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

将猫的心、脑、舌用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种小白鼠,经连续传代分离弓形虫虫株,用特异PCR方法对所分离的虫株进行了鉴定。分别从24只猫的样品中分离出8株弓形虫虫株,用弓形虫种特异的PCR方法对8个虫株进行鉴定,均得到弓形虫的特异条带;测序证明所扩增出的DNA片段确为弓形虫的核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS-1)部分序列。研究结果表明,将动物组织用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种小白鼠是一种分离弓形虫虫株较为理想的方法,特异PCR方法能准确、快速地鉴定弓形虫虫株。     

藏獒源犬细小病毒的分离鉴定

为弄清犬细小病毒(CPV)在藏獒中的流行情况,将临床上经胶体金试纸检测为阳性的藏獒直肠棉拭子8份处理后接种猫肾传代细胞(F81细胞),分离到6株病毒,对其进行了血凝试验(HA)、半数组织培养物感染剂量(TCID50)的测定,理化性质鉴定,提取分离株DNA并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其一特异性片段和VP2全序列,并与GenBank上登录的CPV毒株进行比对。结果表明,接毒后第6～13天在F81细胞上出现了明显的细胞病变(CPE),表现为细胞融合、变圆或拉长;所得分离株能使猪红细胞发生凝集反应,血凝效价为27～211;能抗酸(pH3)、热(60℃)、200mL/L乙醚、480mL/L氯仿;从细胞培养物中分别扩增出与特异性片段825bp一致以及与VP2全基因1 755bp一致的条带。将扩增的VP2序列与GenBank上登录的HQ883267.1、FJ222823.1、FJ005214.1等10个国内外CPV分离株的VP2序列进行比对;结果显示,与北京地区一分离株(HQ883267.1)的同源性最高,为99.0%～99.6%。所得分离株为不同毒株,但均为CPV-2a型。