阿散酸在猪体内的药动学与生物利用度研究

选用体重25 kg左右的长×大二元杂健康猪8头,按双周期双交叉试验设计,进行静脉注射与内服阿散酸(10 mg/kg)的药动学研究。采用高效液相色谱法测定猪血浆中阿散酸的浓度,用统计矩原理处理血浆药物浓度-时间数据。结果显示:健康猪静脉注射阿散酸后的主要药动学参数为β=0.55 h-1±0.01h-1,t1/2β=1.26h±0.03 h,Vz=0.30L/kg±0.01 L/kg,Vdss=0.29 L/kg±0.01 L/kg,CL=0.17 L/(kg.h)±0.01 L/(kg.h),MRT=1.75 h±0.07 h,AUC=60.44μg/mL.h±0.01μg/mL.h;内服给药的主要药动学参数为β=0.39 h-1±0.02 h-1,t1/2β=1.79 h±0.09 h,tmax=1.81 h±0.09 h,Cmax=3.43μg/mL±0.53μg/mL,MRT=3.95 h±0.13 h,AUC=15.12μg/mL.h±0.01μg/mL.h,F=24.5%±3.4%。研究结果表明,阿散酸在健康猪体内的药动学特征为内服吸收迅速,血药浓度达峰时间短,但药物峰浓度低,绝对生物利用度低,消除快...     

猪体恩诺沙星内服和肌注途径给药排泄规律的比较

给10头猪分别按体重5 mg／kg单剂量内服和肌注恩诺沙星。采集自然排泄的猪粪、尿,用高效液相-荧光法测定恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星浓度,计算采样间隔内单位时间药物排泄量占给药量的比例,比较2种不同给药途径原形药物和环丙沙星的排泄规律。结果显示,2种给药途径对恩诺沙星和环丙沙星总排泄量的影响不显著,仅对药物排泄量与时间之间的关系产生影响; 2种给药途径的试验猪粪样中恩诺沙星的排泄量均高于尿样;内服与肌注给药后96 h内,粪和尿中检出的环丙沙星分别占给药量的3．93％和4．02％,累积排泄的恩诺沙星和环丙沙星之和分别占给药量的9．89％(内服)和9．57％(肌注)。     

地昔尼尔乳剂在猪体内的药动学研究

为建立高效液相色谱法(HPLC)测定猪血浆中地昔尼尔质量浓度的方法,探讨地昔尼尔乳剂在猪体内的药动学特征,将50g/kg地昔尼尔乳剂以45mg/kg的单剂量为6头健康猪给药(背正中线浇泼),血浆经乙腈提取,采用HPLC测定了血液中地昔尼尔浓度。本试验条件下,地昔尼尔在0.05～20μg/mL内线性良好,r2=0.999,最低检测限为0.01μg/mL;其药时数据符合一级吸收二室模型,主要药动学参数为:t1/2ka=9.836h±0.198h,t1/2α=13.649h±0.124h,t1/2β=20.745h±1.187h,tmax=17.576h±0.216h,Cmax=9.129μg/mL±0.313μg/mL,AUC=450.010μg/mL.h±2.993μg/mL.h。结果表明,该测定方法专属、准确、灵敏,适用于地昔尼尔的药动学研究;地昔尼尔乳剂经皮给药后,在猪体内的吸收、消除速率较慢,达峰浓度高。     

鸡猪排泄物中恩诺沙星和环丙沙星含量HPLC检测方法的建立

建立了测定鸡、猪排泄物中恩诺沙星及环丙沙星含量的高效液相-荧光检测方法。将猪粪和鸡粪尿混合物样品分别用甲醇氨水溶液和醋酸甲醇溶液浸提,猪尿用固相萃取小柱富集净化,流动相为乙腈-三乙胺磷酸溶液(0.02 mol/L),荧光激发波长280 nm,发射波长450 nm。检测结果表明,排泄物样品中恩诺沙星和环丙沙星含量的检测定量限,鸡粪尿混合物为0.010μg/g,猪尿0.005μg/mL,猪粪为0.020μg/g。外标法标准曲线的线性范围鸡粪尿混合物中恩诺沙星为0.010~100.000μg/g、环丙沙星为0.010~50.000μg/g,猪尿和猪粪中恩诺沙星和环丙沙星的线性范围分别为0.005~0.500μg/mL和0.020~1.000μg/g。恩诺沙星和环丙沙星的回收率分别大于75%和88%。HPLC方法的样品前处理和检测方法简便、快捷,准确性较微生物检测法高。     

盐酸沙拉沙星混悬乳剂的制备及在家兔体内药动学的研究

采用高压均质法制备盐酸沙拉沙星混悬乳剂,测定其沉降体积比、重分散特性和粒径;将家兔分别单剂量肌肉注射盐酸沙拉沙星注射液和盐酸沙拉沙星混悬乳剂,采用高效液相色谱法测定家兔血浆中药物浓度,用DAS2.0药动学程序计算药动学参数。结果显示,制备的盐酸沙拉沙星混悬乳剂的沉降体积比为100%,重分散特性好,平均粒径为8.61μm。盐酸沙拉沙星混悬乳剂和盐酸沙拉沙星注射液在家兔体内的消除半衰期分别为11.89h±3.08h和5.04h±1.19h,AUC分别为15.38(h·μg)/mL±1.99(h·μg)/mL和4.90(h·μg)/mL±1.35(h·μg)/mL。结果表明,高压均质法制备盐酸沙拉沙星混悬乳剂的工艺简单可行,盐酸沙拉沙星混悬乳剂在家兔体内吸收、消除速度缓慢,作用时间延长,具有良好的缓释性能。     

阿莫西林杀灭金黄色葡萄球菌的药代动力学和药效动力学关系

建立了体外药代动力学和药效动力学(PK-PD)模型,测定了阿莫西林杀灭金黄色葡萄球菌的药代动力学参数和药效动力学参数,并研究了它们之间的关系.结果表明,T＞最低抑菌浓度(MIC)是衡量阿莫西林药效的关键指标,当阿莫西林浓度超过MIC时,初始浓度0.4～3.2μg/mL对杀灭金黄色葡萄球菌的药效没有影响.在消除半衰期为2 h的模型内,T＞MIC在7.40 h以上时阿莫西林对金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果;在消除半衰期为5.5 h的模型内,T＞MIC在11.76 h以上时阿莫西林对金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果.     

伊维菌素聚乳酸微球的研制及其体外释药试验

以生物可降解材料聚乳酸（ＰＬＡ）为载体,用乳化溶剂挥发法制备含伊维菌素（ＩＶＭ）的聚乳酸微球,采用Ｌ１８（３７）正交设计,以微球粒径分布为主要优选指标,筛选出最佳制备条件。所得微球药物包封率高,粒径分布理想,大小适合注射给药;体外释药试验微球无明显突释现象,可缓慢地以接近恒速释药。     

不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较

从山东省9个地区、河北省青县和辽宁省本溪市肉鸡病料中分离鉴定出了264株大肠杆菌,并测定了它们对29种抗菌药的耐药性.结果显示,3个区域中以山东省鸡大肠杆菌的耐药种类最多,为29种,辽宁省最少,为23种;3个地区的致病菌株对土霉素、酒石酸泰乐茵素、磺胺-6-甲氧嘧啶、氨苄西林钠、阿莫西林5种药物的耐药率均达到了90.0%以上;另外,山东和辽宁两地分离茵株对硫酸链霉素和盐酸金霉素、山东和河北分离株对甲砜霉素、河北和辽宁分离株对恩诺沙星和磷霉素钠,辽宁分离株对甲磺酸达氟沙星和延胡索酸泰妙茵素的耐药率几乎均达到了80.0%以上.表明,3个区域的鸡大肠杆茵时大部分临床常用抗茵药产生了耐药性,但耐药种类和耐药程度有一定的差异.     

广东省发病猪禽大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分布

为了解广东省发病猪、禽大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛(HPI)的分布和HPI阳性菌的血清型,从广东省发病的猪、禽养殖场共分离鉴定了608株大肠杆菌,针对耶尔森菌强毒力岛的标志基因irp2基因设计1对引物,对这些大肠杆菌进行了irp2基因的PCR检测;并对HPI阳性菌进行O血清型鉴定。结果显示,有105株菌含有irp2基因,即HPI阳性率为17.27%(105/608)。猪源、鹅源、鸽源、鸡源、鸭源、鹧鸪源大肠杆菌的HPI检出率分别是16.51%、17.81%、21.05%、17.74%、19.01%及0;105株HPI阳性菌的血清型分布较为分散,没有明显规律;主要的血清型有O1、O26、O45、O114、O136、O18等。研究表明,广东省猪、禽养殖场大肠杆菌的HPI携带率较高,血清型复杂。     

喹烯酮在猪体内的药代动力学研究

按本实验室建立的方法,对喹烯酮在猪体内的代谢进行了观察.试验猪6头,按单剂量14C标记的喹烯酮0.4065 mg/kg体重(比活度24.6 μci/mg)静脉注射,30 d后按31.15 mg/kg体重(比活度5.187μci/mg)口服给药,用液体闪烁谱仪进行测定.结果喹烯酮以原药的形式代谢排泄,静脉注射给药符合二室开放模型,T1/2α=0.1899 h,T1/2β=4.5528 h,Kel=0.8654/h,AUC=0.00925 mg/L·h;口服给药符合一级吸收一室开放模型,T1/2Ka=0.4678 h,T1/2K=3.7445 h,Tp=1.3367 h,Cmax=0.000713 μg/mL,AUC=0.00303 mg/L·h.提示喹烯酮口服给药后,其吸收较快,消除相对也较快,生物利用度低.     

特异性IgY抗仔猪断奶腹泻机理的研究概况

针对仔猪断奶腹泻(Post-weaningEscherichia colidiarrhea,PWECD)这一仔猪断奶后的常见病和多发病的病原特异性,阐述了利用K88和F18等特异性菌毛作为抗原免疫产蛋母鸡制备的抗PWECD特异性卵黄抗体对大肠埃希氏菌引起的断奶仔猪腹泻的作用机理。认为,特异性IgY用于防治PWECD,具有安全、高效、成本低、产率高、稳定性好,无药物残留,不会产生耐药性,符合现代动物管理理念等诸多优点,是一种能有效防治PWECD的绿色生物制剂,应用前景广阔。     

产肠毒素性大肠埃希氏菌基因工程疫苗的研究进展

简述了产肠毒性大肠埃希氏菌(ETEC)K88-K99、K88ac-LTB、K99-F41和ST-LT双价基因工程疫苗的研制方法、生产工艺、免疫效果及生态效应及其研究进展,同时阐明了用这些疫苗免疫妊娠母畜,可使吸吮了母畜初乳的幼畜的腹泻发病率和死亡率显著下降,且不会带来生态环境污染。认为这些基因工程疫苗仍有不足之处,需要进一步加以改进。     

间接ELISA检测鸡大肠埃希氏菌菌毛抗体方法的建立

用大肠埃希氏菌O1、O2、O3、O78和O89株制备ELISA抗原,与抗鸡Ig单抗1B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法.经交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高;确立了将鸡血清100倍稀释检测ELISA效价(ET)的回归方法y=2.453+0.131x(P＞0.05),可用于定量测定.用IH与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比IH法敏感性高4-100倍.     

辽宁省禽大肠埃希氏菌血清型的调查及其致病性试验

通过病原菌分离、血清型鉴定及本动物致病性试验对辽宁省禽大肠埃希氏菌的主要血清型分布与致病性进行了研究。2001～2005年从该省14个市的病死禽和死胚中分离出大肠埃希氏菌226株,血清型鉴定105株,其中O_(78)型占29．52%(31/105),O_(109)型占10．48%(11/105)。结果,O_(78)、O_(109)血清型是流行于该省致病性禽大肠埃希氏菌的优势血清型。随机选取49株分离菌,以每株1×10~7CFU的量于气管内给6只1日龄SPF鸡接种,根据接种后7 d内死亡和病变的情况,确定高致病株、中度致病株和低致病株,它们分别占75．5%、18．4%和6．1%。结果表明,所有分离菌株均有致病性,并在国内首次分离出禽O_(109)型大肠埃希氏菌。     

禽致病性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分子流行病学调查

为了解耶尔森菌强毒力岛(HPI)在禽致病性大肠杆菌(APEC)中的流行情况,根据HPI结构基因irp2和fyuA参考序列设计了引物,用PCR方法和斑点杂交法对从江苏等地分离的APEC基因组进行了扩增和检测,并对E.coliNTJC040406菌株相关基因进行了克隆和序列分析。结果表明,216株APEC中有44.9%的菌株携带有HPI,序列分析表明相关基因与GenBank中参考序列的同源性高达98%以上。提示HPI在APEC中广泛存在,经进一步分析,发现分离菌株是否携带HPI与O78等特定血清型有一定的相关性。     

堆型艾美球虫表面抗原基因cSZ1在大肠埃希氏菌中的表达

根据已克隆的堆型艾美球虫 (Eimeriaacervulina)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计了特异性引物 ,用PCR方法扩增cSZ1的开放阅读框架 (ORF)后克隆至表达载体pET 32a( ) ,构建了重组表达质粒 pET 32a( ) cSZ1,并将其转化至大肠埃希氏菌BL2 1(DE3)。经IPTG诱导 ,获得了cSZ1重组抗原在大肠埃希氏菌中的高效表达 ,表达产物量可达菌体总蛋白的 9.3% ,融合蛋白的分子质量约为 4 0ku。重组菌诱导表达的产物经SDS PAGE后 ,用堆形艾美球虫感染鸡的超免疫血清进行免疫印迹分析 ,结果为阴性 ,提示cSZ1所编码的抗原可能主要是T细胞抗原表位     

临床分离动物源性大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平的测定

为研究大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平与不同动物源性大肠杆菌多重耐药水平之间的关系,将获得的重组阳性质粒pET28a(+)-acrA转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经IPTG诱导表达,得到约42ku的目的蛋白。AcrA蛋白表达产物经侧带法纯化后免疫獭兔,制备抗AcrA的多克隆抗体,采用间接ELISA法检测临床分离的31株不同动物源性大肠杆菌中acrA基因的表达水平。结果显示,随着多数被检大肠杆菌多重耐药水平的提高,AcrA蛋白的表达量有上调的趋势。表明,动物源性大肠杆菌的多重耐药水平与AcrA蛋白的表达水平可能存在相关性。     

检测987p+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88 ( 为菌毛阳性 )、K 99 、F 41 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该方法的敏感度可达 10 2 CFU ,对 2 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,有 1株为阳性 ,与血清学检测的结果一致。结果表明 ,此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床 987p肠毒素性大肠埃希氏菌病的快速诊断和流行病学调查     

大肠杆菌多重耐药调控基因rob的原核表达及其表达蛋白多克隆抗体的制备

提取阳性克隆质粒pMD18-T-rob,经SacⅠ+XhoⅠ双酶切,回收目的片段,定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体中,提取阳性质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,获得阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,收集表达产物,SDS-PAGE分析证实pET-28a-rob可成功地在大肠杆菌中表达出Rob蛋白。Western-blot分析证明,Rob蛋白具有良好的反应原性。表达出的Rob蛋白经侧带法纯化后免疫獭兔3次,制备抗Rob蛋白的多克隆抗体。通过间接ELISA方法检测抗体效价,结果表明抗体血清1∶40稀释时抗体效价较高。     

耐氟喹诺酮类药物大肠埃希氏菌基因突变的MAMA-PCR检测

采用MAMA-PCR法对72株已知突变菌株的突变情况进行了检测。结果,有2种gyrA 83位突变:TCG→TTG和TCG缺失;4种gyrA 87位突变:GAC→AAC、GAC→GGC、GAC→TAC和GAC→CAC;1种parC 80位突变:AGC→ATC以及4种parC 84位突变:GAA→AAA、GAA→GCA、GAA→GGA和GAA→GTA。采用同样的方法,对38株未知突变菌株的检测结果显示,gyrA 83、gyrA 87、parC 80和parC 84位的突变检出的正确率分别为97．4％、94．7％、81．6%和94．7％。结果表明,MAMA-PCR有望成为监测耐氟喹诺酮类药物大肠埃希氏菌的分子生物学常规方法。