牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

从牛隐孢子虫病的病原分类、内生发育史、体液免疫和细胞免疫、流行病学特点、诊断、防治等几方面阐述了牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究现状,总结了前人对牛隐孢子虫3个有效种的生物学特性研究的结果,为进一步了解牛隐孢子虫病的流行病学及有效防制该病提供了参考。     

牛隐孢子虫病人工病例与自然病例的比较试验

对来自西安地区不同奶牛场的９头腹泻病牛经临床观察、病理剖检，并从肠道粪便中分离到隐孢子虫。用分离到的虫株接种新生健康犊牛２头。人工感染犊牛均发病并表现出比较典型的隐孢子虫病症状；对人工感染病犊做粪便卵囊再分离和病理学检查，不但重新分离到隐孢子虫，而且可见小肠粘膜上皮细胞坏死脱落，固有层裸露，毛细血管扩张、充血、出血，肠隐窝处含有隐孢子虫，粘膜下层炎性细胞浸润；肠粘膜压片染色镜检亦看到隐孢子虫。试验结果发现人工病例与自然病例所测指标相似，进一步证明西安地区犊牛腹泻是以牛隐孢子虫为主要病原的疫病     

湖南省牛的隐孢子虫病调查及小鼠感染试验

对湖南省８个县（市）的２９６头奶牛、１７７头水牛及１２头黄牛进行了隐孢子虫病的调查。发现６个县（市）的牛有隐孢子虫的感染。奶牛感染率为５．３％～２８．８％，其中某牧场１岁以下犊牛的感染率（４６．７％）高于１岁以上午（２３．９％），３、４月龄犊牛的感染率（分别为１００％和６０％）高于４月龄以上的犊牛；水牛感染率为６．６％～４０％；黄牛中未发现隐孢子虫感染。以牛粪中分离出的隐孢子虫卵囊人工感染小鼠成功，从而证实牛的隐孢子虫在同一宿主纲内不具有宿主特异性。     

隐孢子虫病的诊断研究——隐孢子虫卵囊染色标本光镜检查

用5种不同染色方法对病牛粪便涂片染色,藉助卵囊和标本背景染成不同的颜色进行形态观察与鉴别诊断。试验结果,抗酸和Giemsa染色方法较好;负染法可作为大量粪样检查时初筛标本使用。     

用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高,回收率达92.0%,适合于国内普通实验室使用.     

禽腺病毒T型琼脂扩散抗原的研制及应用

研制了禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原,检测了该抗原的效价和特异性,并用该抗原对人工感染鸡沉淀抗体的变化以及现地血清样本进行了检测.结果显示,该抗原不与其他主要禽类病原体阳性血清反应,可与1:8稀释的禽腺病毒工型阳性血清反应.对3月龄SPF鸡进行人工感染后,第7 d可检测到沉淀抗体,血清中的沉淀抗体可持续3个月以上.抗原在-20℃条件下可保存2年.经对现地38个鸡场进行检测,其中阳性场14个,阳性率为36.84%,表明我国的禽腺病毒感染率很高.结果证实,研制的禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原敏感、特异,可用于禽腺病毒感染的血清学检测.     

宁夏鸡隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９４年８月至１９９６年１０月，对宁夏回族自治区银南、银北、固原３地区１２县（市）５４个鸡场共计４５９０４只鸡进行了隐孢子虫感染情况抽样调查。结果，隐孢子虫阳性率达３６．８１％（２１２／５７６），其中蛋用鸡阳性率为３７．５３％（１４０／３７３），肉用鸡阳性率为３６．２３％（５０／１３８），差异不显著（Ｐ＞０．０５）；银南、银北、固原三地区阳性率分别为５４．５５％（６／１１），４１．９４％（１９５／４６５）和１１．００％（１１／１００），银南地区感染率显著高于固原地区（Ｐ＜０．０１）。用从自然感染鸡中收集的隐孢子虫卵囊人工感染雏鸡９批次，感染鸡排卵潜伏期３～１３ｄ，平均７ｄ；排卵持续期１４～３４ｄ，平均２４ｄ；其症状与自然病例相似。通过卵囊形态学鉴定，认为宁夏鸡感染的隐孢子虫属贝氏隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｏｐｏｒｉｄｉｕｍｂａｉｌｅｙｉ）。     

应用琼脂免疫扩散试验检测番鸭细小病毒抗体

将分离的番鸭细小病毒通过正常发育的番鸭胚传代,分别取不同代次的病毒尿囊液经氯仿、聚乙二醇浓缩处理后制成不同代次的抗原.该抗原与抗番鸭细小病毒抗血清在含有20 g/L PEG 6000的琼脂平板上作用,可见有明显的沉淀线.     

牛隐孢子虫病的研究——病原学鉴定

本文对西安地区流行的奶牛腹泻,进行了病原学调查。从死牛和病牛肠内容物分离卵囊,作光镜、电镜及不同染色标本镜检。用牛体分离的虫株接种雏鸡、雏鸽、小鼠、犊牛等实验动物进行生物学传递试验。对自然死亡牛和实验动物进行病理学观察。结果:在病牛粪便中查到大量圆形和椭圆形隐孢子虫,大小为2.5～6.0μm或3.5～6.0×2.5～4.5μm,其感染率:犊牛为75.40％,青年牛为6.25％,成年牛为29.36％;发病率分别为50.80％、0％和27.52％。球虫(E.bovis、E.brasiliensis、E.cylindrica)感染率:犊牛为7.34％、青年牛0％、成年牛2.13％。参与生物学试验的动物均发生感染,雏鸡和犊牛出现明显的临床症状,小鼠和雏鸽呈隐性感染。病理学变化、实验动物与自然病例一致,均以肠道为主,其他脏器无异常。     

四川麻鸭隐孢子虫病的调查

笔者在四川省永川县、泸县、荣昌县的6群2月龄左右的鸭群中发现有4群感染隐孢子虫。用所收集的鸭隐孢子虫卵囊进行人工经口感染7只1月龄雏鸭,感染后第8～9天开始从粪便中排出大量卵囊,持续排卵囊期约为12天。感染后13天开始,分期扑杀动物,取其气管、各段肠道、法氏囊进行组织学检查,发现法氏囊有大量隐孢子虫寄生。引起法氏囊粘膜不同程度的变性、坏死、萎缩及上皮细胞脱落;电镜扫描观察发现法氏囊粘膜上皮细胞膜下有大量不同发育阶段的虫体,形成大小不同的颗粒状突起,引起上皮细胞的损伤,从而初步证明鸭隐孢子虫对麻鸭有一定的致病性。     

河南省绵羊隐孢子虫病的流行病学调查

为获得河南省绵羊隐孢子虫的流行病学资料,应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省4个地区的5个羊场共1701份绵羊粪样进行了检测,并对绵羊隐孢子虫感染的风险因素进行了评估.结果表明,查出隐孢子虫阳性样品80份,总阳性率为4.70%,3周龄羔羊和产后3周母羊的感染率最高,分别为41.18%和6.29%.根据隐孢子虫卵囊的形态学数值分析结果,将发现于绵羊的隐孢子虫卵囊初步鉴定为微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫.同时发现绵羊隐孢子虫感染存在年龄差异,但未见明显的季节性变化.     

上海地区鸡鸭隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９２～１９９４年对上海地区５个鸡场、２个鸭场分别检查粪样７００份和４５０份，隐孢子虫阳性率鸡为２７％，鸭为５８％；不同日龄和不同季节其感染率存在着明显差异。经观察和测定，隐孢子虫卵囊多呈椭圆形或圆形，囊壁光滑，无微孔和极粒；内有４个月牙形子孢子，呈纵向排列；残体呈圆形且大小不等；其卵囊大小鸡的为５．４８μｍ×４．３４μｍ，鸭的为５．４７μｍ×４．５０μｍ。人工感染试验中，鸡在感染后第３ｄ排出卵囊，第６～１３ｄ达到高峰，第４０ｄ排出停止；鸭在感染后第２ｄ排出卵囊，第８～１２ｄ达到高峰，第２０ｄ排出停止，经鉴定该虫体为贝氏隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｂａｉ－ｌｅｙｉ）。     

三种不同寄生部位隐孢子虫卵囊体外脱囊条件的比较

为研究不同寄生宿主及不同寄生部位隐孢子虫的生物学特性,以安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫和人隐孢子虫为研究对象,分别选择在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中水浴脱囊的方法比较上述4种隐孢子虫卵囊脱囊率,并进一步比较贝氏隐孢子虫卵囊在不同温度及脱囊液中的脱囊率。结果显示,胃腺寄生类群安氏隐孢子虫在37℃PBS中即有较高脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中相比差异不显著(P0.05)。肠道寄生类群微小隐孢子虫和人隐孢子虫在37℃PBS中脱囊率极低,而在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率显著升高(P0.01)。贝氏隐孢子虫在37℃PBS中有一定脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中的脱囊率接近(P0.05),提高脱囊温度至40℃,则脱囊率显著升高,并且在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率差异显著(P0.05),但增加胆酸盐浓度不能提高其脱囊率(P0.05)。结果表明,胃腺寄生类群在合适温度即有较高脱囊率,而肠道寄生类群则不仅需要合适的温度还需要合适的脱囊液。贝氏隐孢子虫卵囊对脱囊条件要求更接近于胃腺寄生类群,这对进一步了解隐孢子虫生物学特性及体外培养研究有借鉴意义。     

郑州地区犬隐孢子虫病流行病学调查及动物感染试验

用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对采自犬养殖场、郑州郊区宠物市场、实验动物房、宠物医院以及郑州郊县农村的309份犬粪便样品进行了隐孢子虫感染情况调查,同时用幼犬和SCID小鼠进行了人工感染试验。结果显示,隐孢子虫平均感染率为2.59%(8/309);犬养殖场、郑州郊县农村和实验动物房犬的隐孢子虫感染率分别为0.56%(1/179)、10.53%(2/19)、16.67%(5/30),而宠物市场、宠物医院的被调查犬未发现隐孢子虫感染。所查到的8份隐孢子虫阳性样品有6份来自1~3月龄的幼犬,表明幼犬更容易感染隐孢子虫。动物感染试验表明,犬源隐孢子虫不感染SCID小鼠和2月龄非免疫抑制幼犬,但能感染免疫抑制幼犬。组织切片用HE染色观察的结果显示,犬源隐孢子虫主要寄生在幼犬的十二指肠和空肠。根据卵囊形态大小和动物感染试验结果,将从犬分离的隐孢子虫初步鉴定为犬隐孢子虫。     

免疫鸡群发生马立克病的诊断与病理学研究

采用琼脂扩散试验、PCR和病理组织学观察分别对疑似马立克病(MD)病鸡进行确诊和病理学研究。结果显示,琼脂扩散试验中马立克病病毒(MDV1)抗原呈阳性;PCR扩增出567bp的MDV1特异性片段。病理学观察显示,肝、脾、肾和心程度不等肿大,色泽变淡,形成有大小不等和数量不一的灰白色结节。部分病鸡坐骨神经呈单侧性不规则肿粗,弹性降低或丧失。病鸡实质器官及坐骨神经组织中均出现大量多形态的类似淋巴细胞、成淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞及网状细胞的肿瘤细胞聚集和散在,并可见典型的MD细胞,尤其在血管周围和淋巴管周围。各型肿瘤细胞和MD细胞异型性明显,肿瘤细胞周围实质程度不等的变性、坏死,间质水肿。核仁区嗜银蛋白染色结果显示,肿瘤细胞增生活跃,恶性程度较高。     

新疆部分地区牛新孢子虫病的血清学调查

应用间接免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验、斑点酶联免疫吸附试验3种检测方法,对新疆地区部分牛和牦牛的血清样品进行新孢子虫病抗体检测.结果显示,298头份牛血清全部为阴性,4份牦牛血清1份为阳性.     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。     

广西奶牛隐孢子虫病的流行病学调查

为了调查广西奶牛隐孢子虫病的流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对广西9个奶牛场和4个奶牛个体养殖户的1 612头份粪样进行隐孢子虫卵囊的检测,并以基于18SrRNA基因的PCR-RFLP技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定。结果显示,7个奶牛场发现存在隐孢子虫感染,隐孢子虫阳性粪样为189头份,总感染率为11.72%(189/1 612)。在感染的年龄段上,1～6月龄犊牛的隐孢子虫感染率为21.3%,显著高于7～12月龄的青年牛(9.6%)和大于1岁龄的成年牛(3.8%)(P<0.01)。感染季节以冬季感染较高,但与夏季感染结果相比差异不显著(P>0.05)。PCR-RFLP分析显示,分离的7个隐孢子虫株均为安氏隐孢子虫。调查表明,广西奶牛隐孢子虫虫株以安氏隐孢子虫为主,感染率与河南、江苏、安徽、吉林等省份相似。     

住肉孢子虫病免疫学诊断方法的研究

本文以间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体试验(IFA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)等4种免疫方法诊断水牛、黄牛和猪的住肉孢子虫病,检出率分别为77.6％(其中水牛为93.4％,黄牛为65.9％),96.1％(其中猪为59.2％,小牛及青年牛为71.4％,成年牛为97.5％),97.5％和97.8％。其中应用IFA、Dot-ELISA诊断家畜住肉孢子虫病,在国内尚未见有报道。试验表明,免疫学诊断技术是当前对家畜住肉孢子虫病进行生前诊断的主要方法。     

河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行状况,于2006年9月至2007年8月对河南省鹌鹑养殖量较大的5个地市47个鹌鹑养殖场(户)进行了调查.共采集1 818份粪样,经饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检查,隐孢子虫感染率为13.15%(239/1 818).根据形态学特征,将分离到的2种隐孢子虫鉴定为贝氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫.调查结果表明,河南省不同品种鹌鹑之间隐孢子虫的感染率差异不显著,但鹌鹑隐孢子虫的感染率具有一定的地区、季节及年龄差异.