应用反转录-聚合酶链反应检测动物组织中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了猪和牛的扁桃体、淋巴结、脊髓、肌肉和蹄冠皮肤中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。与接种乳鼠测毒法比较，该方法的灵敏度达０．１６ＬＤ５０～０．３２ＬＤ５０病毒量。检测人工感染后７～３５ｄ的猪组织样品７７份，２５份为阳性；接种乳鼠并盲传３代，乳鼠－间接血凝试验（ＩＨＡ）鉴定６份为阳性。检测人工感染后４～７ｄ的牛组织样品５２份，２０份为阳性；接种乳鼠－ＩＨＡ鉴定１２份为阳性。检测野外鲜肉样品４７份，１２份为阳性；任选其中８份样品接种细胞单层，盲传至第６～７代，先后有５份样品产生ＣＰＥ；其中６份样品同时接种乳鼠，盲传至第６～７代，３组乳鼠出现ＦＭＤＶ致病症状，ＩＨＡ鉴定为阳性。检测冻猪肉样品３７份，３份为阳性；冻牛肉样品９份、冻羊肉样品１０份，均为阴性     

牛白血病病毒的反转录酶

牛白血病病毒(BLV),分 类于反转录病毒科,C型颗粒, 直径80～120nm;核衣壳呈26 面体对称,外面有囊膜,膜上有门把状突起,直径约8nm;内部为拟核,两条线状单链35sRNA组成倒置二聚物,呈螺旋状蜷曲,没有感染性;主要结构蛋白有六种,两种外膜糖蛋白(gp51,gp30)和四种内部蛋白(P_(24),P_(15),P_(12),P_(10));BLV反转录酶分子量70kd,     

内源性绵羊肺腺瘤反转录病毒的研究进展

从内源性绵羊肺腺瘤反转录病毒(enJSRV)与外源性绵羊肺腺瘤反转录病毒(exJSRV)基因组结构的比较、enJSRV与绵羊肺腺瘤病(OPA)的关系、enJSRV在羊体内的表达及其系统发育分析等方面综述了enJSRV的研究进展,旨在为早期诊断及预防OPA提出新方法,为揭示该病的分子发病机理及探索其基因治疗提供新思路。     

动物衣原体疫苗

动物衣原体疫苗邱昌庆（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）鹦鹉热衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔａｃｉ）是一种多宿主性病原微生物，可感染包括人在内的灵长类动物、家养和野生哺乳动物、禽类及两栖动物。在临床上引起支气管肺炎、结膜炎、肺炎－肠炎等，...     

动物枝原体疫苗

(一)鸡败血枝原体疫苗 1957年Domermuth将在培养基上或用鸡胚培养的活菌,给雏鸡进行肌肉或皮下接种后,经过4～9周,在后胸气囊内重复感染时,抑制了病灶的形成,标志着已经建立了免疫。其保护率由于感染菌量不同而异,但平均在36.2％,据说增加了免疫次数也未能使保护率提高。McMartin等曾试验给4周龄的鸡鼻腔滴入活菌液,或于腹部气囊直接注射感染,尔后检查气囊的病变或分离枝原体。免疫菌数在10~3菌落形成单位或更多,     

兽医上的病毒疫苗

病毒疫苗或者含有活病毒(活苗),或者含有用各种方法灭能的病毒或病毒产品(灭能苗)。附表总括了用于预防动物病毒疾病的主要疫苗。本文只涉及在动物病毒疾病中以疫苗进行主动免疫的应用方面。关于其生物学原理和各别疫苗的论述,请参阅免疫学、病毒学和传染病学的专书。世界卫生组织第325号技术报告(1966)专门评述了用于人的病毒和立克     

动物病毒的消毒

病毒对各种消毒药的抵抗力差异很大,同属病毒之间的差异一般小于不同属病毒相互之间的差异。在兽医上有重要性的主要病毒属的毒株都被选来进行本试验。口蹄疫、猪水泡病和鸡新城疫的病毒未选用,因为它们已列入1974年颁布的(已证实有消毒药)的动物疾病条例汇编(The provisions of the Diseases of Animals(Approved Disinfectants)Order,1974 ]中,口蹄疫病毒和猪水泡病病毒对一系列消毒药具有敏感性最近已有报道(Sellers,     

应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究

依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。     

用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型标准毒株（ＡＴＣＣＶＲ－２３３２）的ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７的序列,设计合成了一对引物２６３７４ＰＳ／２６３７５ＰＲ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术对６株ＰＲＲＳＶ北京分离株进行了检测。结果该引物对６株病毒均能扩增出与预期大小相符的ＲＴＰＣＲ产物,并与ＡＴＣＣＶＲ２３３２株扩增产物的大小相当,而欧洲型标准毒株（ＬＶ株）未获扩增片段。进一步用限制性内切酶进行酶切分析,发现这６株病毒及ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的ＰＣＲ产物皆出现相同的限制性酶切图谱,证实６株病毒均为ＰＲＲＳＶ。     

犬瘟热病毒反转录环介导等温扩增诊断方法的建立

根据GenBank中犬瘟热病毒H基因保守序列设计合成了内(FIP,BIP)、外(F3,B3)2对引物,其中外引物扩增片段的大小为247 bp。通过对反应条件中内、外引物的比例、dNTP浓度、Mg2+浓度、反应温度和时间等条件逐一优化,成功建立了犬瘟热病毒的RT-LAMP检测方法。该方法在60℃下保温50 min即可完成,可检测至10-1TCID50的病毒,与常规RT-PCR检测方法相比灵敏度高100倍。对犬腺病毒、犬细小病毒、狂犬病病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒同时检测,结果显示,本方法具有高度的特异性。     

鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因的反转录－聚合酶链反应研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的一对引物，其跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，经反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后用琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，３个毒株均获取了与预期一致的ＰＣＲ产物。灵敏度测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板     

动物病毒的分子生物学研究进展

动物病毒学是发展极为迅速的学科之一,不仅在有关病毒的基本理论方面,而且在病毒研究的实际应用方面,都有了突飞猛进的发展。 (一)动物病毒基础理论和实验技术的研究 1935年Stanley获得了结晶的烟草花叶病毒,翌年Bawden发现这种病毒存在核糖核酸,这就奠定了病毒分子生物学研究的基础。此后五十多年来,分子病毒学已成为病毒学研究中最为活跃的领域之一,并且取得了巨大进展。     

动物病毒的蚀斑技术

由于动物病毒极小(直径在十几毫微米至几百毫微米之间),又不能像细菌那样在无活细胞的固体基质中生长,所以在五十年代以前,当谈及某一体积内病毒的多寡时,多是以“感染力”、“存活时间”这样一些统计单位为衡量尺度。总觉得无实体感。当讨论病毒的生物学特性时,总是以“一堆”病毒为对象,很难设想把这个复杂的群体中具不同生物学特性的颗粒分离开,进行分别地研究和使用。自1952年Dulbecco氏将噬菌体的蚀斑技术(1939)     

印度动物真菌病研究现状

印度位于亚洲南部,大部地区属亚热带气候,国内河流较多,３～５月为暑季,６～９月为雨季,１０月至翌年２月为凉季。年平均降水量西北部为５００～１５００ｍｍ,东北部在４００ｍｍ以上,西部沙漠地区较干旱,在１００ｍｍ以下。由于有利的气候条件,印度真菌病的发生...     

动物针灸免疫研究现状

近年来,免疫学已成为生物学和医学的最重要的基础学科之一。由于现代免疫学的飞速发展,新的免疫学分支不断涌现。针灸在免疫方面的研究,不仅在人体上,同时在动物机体上进行了大量的实验研究。实验证明,针灸对机体特异性和非特异性免疫均能产生影响。更令人感兴趣的是现代免疫学理论和祖国医学理论关于抗病机理方面,有不少一致的地方。这就是探讨兽医针灸治病机理,对于沟通中西兽医理论,开拓临床新领域,提供了理论根据。本文仅就国内多年来发表的有动物针灸免疫研究资料综述如后。     

痘苗病毒载体疫苗的新突破

利用痘苗病毒表达无感染性的抗原基因,为活疫苗的发展提供了一条新途径。由于痘苗病毒基因组很大,可以容纳很大的外源基因而不影响自身特性,因此可利用它制成联苗,同时它本身是活病毒,免疫效果也较好,因此受到人医和兽医的重视。尽管有证据表明,用遗传学方法修饰过的痘苗病毒的致病力已经减弱,但痘苗病毒作为疫苗应用的主要障碍是接种疫苗后可能产生严重的并发症,特别是对免疫不健全的     

用口蹄疫非结构蛋白鉴别康复动物与注射疫苗动物的研究及应用

1996年 ,Ｂｒｏｗｎ等从口蹄疫病毒 (ＦＭＤＶ)感染的组织液中发现了病毒感染相关 (ｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ,ＶＩＡ )抗原 ,即ＦＭＤＶ非结构蛋白 3Ｄ ,并建立了琼脂免疫扩散 (ＡＧＩＤ)试验 ,用于进出境动物检疫 ,以区分ＦＭＤＶ感染动物和注射疫苗动物。之后Ｐｉｎｔｏ等在用ＡＧＩＤ试验进一步研究注射灭活疫苗动物的ＶＩＡ抗体时发现 ,注射疫苗前和接种一次疫苗的动物血清ＶＩＡ抗体均为阴性 ,而重复接种福尔马林灭活疫苗或ＡＥＩ灭活疫苗的动物 ,其血清中都不同程度的含有ＶＩＡ抗体。这一结果对用ＡＧＩ…     

家兔出血症病毒病毒样颗粒疫苗的研制及评价

为研究重组杆状病毒RHDV-VP60株表达VP60蛋白及其效果的情况,将RHDV-VP60株接种Sf9细胞制备家兔出血症病毒样颗粒蛋白,与铝胶佐剂混合制成灭活疫苗,进行安全检验、最小免疫剂量测定及免疫持续期研究。结果显示,3批VP60蛋白病毒样颗粒抗原液的血凝效价为1∶2~(18)～1∶2~(19)。3批疫苗以超剂量(每只2.0 mL)免疫家兔未见任何不良反应;对兔的最小免疫剂量为每只0.5 mL;免疫后第14天,血清RHDV HI效价为1∶16～1∶64,攻毒后5/5健活;疫苗免疫持续期达210 d。上述研究结果表明,重组杆状病毒RHDV-VP60株可高效表达VP60蛋白并能形成病毒样颗粒,用其制备的疫苗安全性及免疫效果良好,解决了传统疫苗生产过程所存在的生物安全风险以及重组蛋白表达量低的问题。     

聚合酶链反应诊断动物病毒的研究进展

聚合酶链反应（Poly－marasechainreaction，PCR）又称DNA体外扩增技术。它是用两个寡核苷酸作引物，通过DVA聚合酶催化的一系列反应，使DNA分子在体外成倍的扩增。PCR技术已广泛应用于遗传疾病的诊断，临床样品中病原体核酸序列的检测，法医样品的遗传学鉴定以及活动性癌基突变体的分析。现将近年来PCR诊断动物病毒病的研究情况作以下介绍。（一）口蹄疫病毒（FMDV）Laor等（1992）利用所描述的PCR程序和选自聚合酶基因上的两个引物进行PCR能够检测从FMDV感染细胞中萃取的FMDVDNA片段，而对未感染BHK细胞的RNA产生阴性…     

动物病毒的形态结构和分类

病毒学是以研究疾病病理学开始的。当十九世纪末叶,许多传染病的微生物病原已经明确,但病理学者发现还有一些人和家畜常见传染病的病原体既不是细菌,也不是原生动物。直到1898年,莱夫勒和弗罗施证实口蹄疫的病理材料,通过能截留最小的细菌的滤过器后,仍能将该病传染给另一动物。从此以后,这类疾病就被假定为“超显微镜滤过性病毒”,后叫“滤过性病毒”,即现在所说的“病毒”引起。滤过性等,现已不再成为病毒的重要特点。