应用~(60)Co照射制备无病原体犊牛血清的试验

犊牛血清是细胞培养中最重要的培养基成分之一，但在犊牛血清中常含有某些微生物，包括支原体和病毒，其中大部分血清中存在牛腹泻病毒（B──VDV），而用常规过滤方法难以清除，影响细胞培养。因此，研究制备无病原体血清的简易方法，满足细胞培养的需要，特别是保存种子传代细胞不被污染具有重要意义。美国Hyclone试验有限公司用照射处理组织培养的动物血清灭活其中存在的病毒，但具体方法未见报道。我们利用(60)~Co源的γ──射线照射的方法制备无病原体犊牛血清,现将初步结果报道如下。（一）(60)~Co源及照射剂量利用华南农业大学广…     

应用单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养中的猪瘟兔化弱毒

应用2种针对不同抗原决定簇的抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体建立了检测细胞培养中猪瘟兔化弱毒的ELISA抑制试验。对20份不同批次的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物的测定结果表明,该法可较准确地反映病毒在细胞培养中的产量;将病毒培养物置4℃、25℃和37℃3天、超声裂解、冻融3次和6次等不同方法处理对试验结果无显著影响(P>0.05);通过与兔体接种试验比较,探讨分析了猪瘟兔化弱毒疫苗生产工艺中的问题。     

A群猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为建立一种快速、简便的猪轮状病毒检测方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上喷加纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白多克隆抗体和羊抗鼠IgG,制成检测猪轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条用于检测猪轮状病毒感染的MA104细胞培养物,在检测线处出现红色反应带,未感染病毒的细胞培养物在检测线处未出现反应条带,上述培养物在质控线处均出现红色反应条带;进一步试验表明,试纸条检出病毒培养液(TCID50是10-6.25/0.1 mL)的最低限为1∶32稀释;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与相关的腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒发生反应,所制备的试纸条具有一定的敏感性和特异性,重复性良好。     

关于牛精液中病毒的检查

牛精液中的病毒,可使母牛发病,影响精液的质量和公牛或母牛的繁殖能力以及胎儿的发育。从牛精液中分离的病毒,有口蹄疫、蓝舌病、牛白血病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻、流行热和多瘤皮肤病等的病毒。还分离出肠道病毒、副牛痘病毒(副痘苗病毒),以及若干个尚未确定的病毒。精液中这些病毒是依据各种动物接种试验和细胞培养法来确定的。保持病毒感染性的理想条件是冷冻精液,它的广泛应用成为将病毒传播给未感染牛群和地区的重要媒介物。这就使精液的国际交往受到限制。为了提高认识和研究观实的预防方法及改进精液中病毒的检查方法,就其有关问题介绍如下。     

猪传染性水泡病毒病产斑最适条件的探讨

病毒的蚀斑技术最先由Dulbecco氏(1952)从噬菌体的蚀斑法推演而来。当时研究此项技术的目的有三个:一是象细菌计数那样,用病毒的感染性颗粒这一具体概念,对病毒颗粒进行计数测量;二是使病毒滴定方法更加经济和准确,如欲得到同样的准确性,一个能形成69个蚀斑的培养器皿(如10毫升培养瓶)就相当于终点稀释法的100个细胞培养瓶(组织     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——带毒细胞传代及其适应能力的观察

前报试验结果表明:猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,能大量释放病毒,收液含毒滴度的高低与种毒的质量和用量有密切关系,接入大量良好的种毒,毒价可稳定地达到20000～50000倍合格的要求,降低种毒质量和用量,毒价随之下降,毒价的起伏,似乎又说明猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,并未完全适应。为了了解病毒在牛肾细胞上的适应情况,提高病毒的适应能力,我们试图通过带毒细胞传代进行观察,同时探索带毒细胞培养及产毒能力。鉴于8305批等几批细胞经过长期离体培养和多次接毒、收毒,仍能正常繁殖,所以选用8305批细胞(以下简8305)进行了上述试验观察,其结果报告如下。     

猪传染性胃肠炎病毒适应细胞试验

猪传染性胃肠炎已在国内流行多年,许多单位试图用细胞培养方法分离其病原,但截止目前很少获得成功。本试验为了使猪传染性胃肠炎病毒适应于细胞,参照有关文献将病毒及细胞分别用不同方法处理后进行适应细胞。现将试验情况及结果介绍如下。     

霉形体对新城疫、鸡传染性支气管炎病毒疫苗株体外增殖的影响

霉形体是组织细胞培养中常见的污染物,它可引起病毒增殖改变,即有的病毒增殖被抑制,有的增殖反而增强,但也有的无明显变化。据报道,国内实验室现行使用的细胞中霉形体污染情况严重;国内用鸡胚和鸡胚细胞培养制造的活疫苗也被霉形体污染,而且证明其污染来源为鸡胚。但实际中霉形体污染对疫苗株病毒增殖的作用尚不清楚。本试验在鸡胚培养中,研究了自疫苗中分离的鸡毒霉形体对新城疫病毒Ⅰ系、Ⅱ系、LaSota系和鸡传染性支气管炎病毒H_(120)株增殖的影响。     

制备IB-RS-2细胞的体会

细胞培养技术是现代病毒学研究中不可缺少的工具,细胞培养物则是研究病毒学及生产疫苗的理想材料。因此,目前细胞培养技术的应用范围已经越来越广泛。 传代细胞的培养是一项十分细致的工作,需要多项条件相互配合,才能得到理想的细胞培养物,稍有疏忽,就可能造成不可挽回的损失。但是,只要把工作做细,使细胞培养的每一个环节都符合要求,想得到理想的细胞培养物也并非十分困难。这里仅谈谈我们在细胞培养工作中的一些体会,供大家参考。     

动物细胞转瓶多层培养法

在动物疫苗生产中,需要大规模培养细胞以增殖病毒。目前,我国多采用10～15立升圆瓶旋转培养,不能满足日益增长的生产需要。影响转瓶细胞产量增加的主要原因是培养表面有限,一个10立升圆瓶培养表面约为2000平方厘米,15立升圆瓶培养表面约为3000平方厘米。增加细胞产量首先得增加培养表面。为此,我们设计并试验成功了以转瓶培养为基础,增加多层培养膜的转瓶多层培养法。     

口蹄疫血清中和试验和琼脂凝胶沉降反应试验术式——日本国农林省家畜卫生试验场采用的方法

一、血清中和试验 (一)项目和试验方法 1.试验用细胞株:采用BHK-21或IB-RS-2细胞。 2.细胞培养:将含细胞数 3×10~5cell/毫升的细胞悬浮液0.5毫升,置培养试管(13毫米φ×100毫米)中,静置培养2～3天,使其形成90～100％的细胞单层。 3.试验用病毒株:采用对上述细胞株已经充分适应驯化的O、A、亚洲Ⅰ型毒株。 4.病毒液的配制:用稀释液配制含毒量200TCID_(50)/0.1毫升的病毒液。 5.被检血清:置56℃30分钟加温灭活后,用稀释液等量混合。     

应用PCR检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒

设计合成了 1对引物 ,建立用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒的PCR方法。结果表明 ,PCR对羊接触传染性脓疱性皮炎病毒细胞培养毒的检测与细胞培养CPE、电镜检测的结果相一致。经对扩增产物进行序列分析 ,与已报道NZ 2株的核苷酸序列同源性高达 97%。用此PCR方法扩增羊痘病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒 ,结果均为阴性。此方法用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒是可行的、特异的     

应用微量间接血凝试验检测牛鼻气管炎病毒抗体

1955年,美国首次报道了牛鼻气管炎病,随后,澳大利亚、新西兰、日本等国家也报道了该病。我国用血清中和试验进行抗体普查,发现北京、上海、广东、广西、四川等地,都有阳性牛群。在本试验中,我们用微量间接血凝试验检出了牛鼻气管炎病毒抗体,并同细胞中和试验做了比较。 (一)材料和方法 1.病毒株和细胞培养:从匈牙利引进的Bartha—Nu/67牛鼻气管炎疫苗株,将其接种于犊牛肾原代或次代细胞单层上,37℃培养48小时左右,90％以上细胞出现病变时收获,测     

蓝舌病病毒灭活抗原的研究

蓝舌病是危害养羊业最严重的一种世界性传染病。其病原为蓝舌病病毒,属于呼肠弧病毒科环状病毒属。截止目前该病毒发现22个血清型。这种多型性对诊断和防制本病带来一定的困难。经过多年的研究,许多国家在本病的诊断方面取得了显著成绩。多种血清学诊断方法研制成功,群特异性(group-specificity) 方法(琼脂扩散试验、改良补体结合试验、免疫荧光方法、酶联免疫吸附方法)和型特异性(type—specificity)方法(中和试验、红血球凝集抑制试验等)在生产中得到推广应用。但上述方法中有时使用活的病毒,对无蓝舌病的国家是一种潜在性的危险。为此,开展了病毒免疫活性的灭活方法的研究。本文介绍了几种灭活方法对比实验内容,并研制成一种可供诊断用的灭活病毒,为制     

马传贫病毒与马疱疹病毒在同一份组培细胞中增殖的电镜观察

在应用马属动物白细胞培养物制备马传贫病毒抗原时,经常遇到白细胞培养物的对照管中也出现细胞病变(CPE),这种现象给马传贫病毒白细胞培养时的CPE观察带来了混淆和干扰。而在马属动物白细胞培养物的电镜观察中,也经常比较容易地观察到疱疹病毒。因此,我们对这种在白细胞培养物中出现的疤疹病毒与马传贫病毒在电镜下从形态上作了详细的对     

H5亚型禽流感病毒反应原性差异及ELISA检测方法的研究

在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,建立了H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法。通过分析不同单克隆抗体与不同禽流感毒株的反应性差异,筛选高特异性和高敏感性的H5亚型单克隆抗体。优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与斑点ELISA、H5N1多重RT-PCR或病毒分离鉴定的结果相比较,同时使用该方法对野外样品进行了检测。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒。     

犬呼肠孤病毒1型BJ-JB-3株的分离鉴定

从临床表现呼吸道症状的病犬血液中分离获得了1株病毒,采用细胞培养、血凝及血凝抑制试验、中和试验、免疫电镜观察、免疫荧光抗体试验进行了鉴定.结果显示,该病毒能使MDCK和Vero细胞产生明显的细胞病变(CPE),能凝集人O型红细胞和猪红细胞;能被呼肠孤病毒1型血清所中和,病毒粒子呈圆形,有实心和空心两种粒子,将感染细胞用抗呼肠孤病毒1型血清及荧光抗体染色后见明显的绿色荧光.表明,所分离的病毒为呼肠孤病毒1型.     

ICHV感染细胞的免疫胶体金扫描与透射电镜对比观察

本实验应用免疫胶体金扫描与透射电镜对犬传染性肝炎病毒(ICHV)感染的培养细胞进行对比观察,旨在为病毒—细胞间相互作用的研究提供一些形态学依据。 (一)材料与方法 1.病毒:系本所病毒室从犬传染性肝炎病犬的病料中分离并经鉴定的ICHV A-8301株的第5代细胞培养物。 2.细胞:为犬肾传代细胞,引自中国兽药监察所。 3.豚鼠抗ICHV lgG:自制,其血凝抑制试验滴度为1:64。 4.胶体金标记葡萄球菌A蛋白(SPA-G):购自军事医学科学院。透射电镜用金颗粒直径为10nm,扫描电镜用金颗粒直径为20nm。     

H5N1和H9N2亚型禽流感病毒型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的建立

采用禽流感病毒多克隆抗体及型特异性单克隆抗体,研究建立了型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5N1和H9N2亚型禽流感病毒。优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性进行了分析,并与病毒分离鉴定的结果进行了比较。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于临床样品及鸡胚、细胞培养物中禽流感病毒的检测。     

A_5型口蹄疫病毒培养试验

获得大量抗元是口蹄疫免疫问题之一。10至15年来,一些国家利用小牛肾及猪肾作单层细胞培养。由于这种方法比较麻烦,使得许多人寻找其它的抗原来源。1960年,帕蒂(Patty)等人首次在悬浮的小牛肾细胞中培养口蹄疫病毒获得成功。意大利也采用这种方法培养病毒,并有所改进。 保加利亚兽医免疫学研究所口蹄疫防治实验室用此种方法在实验室中进行了实验。情况如下。