ABO基因荧光标记复合AS-PCR分型的法医学应用研究

1990～1993年,Yamamoto等[1～3]通过对ABO基因的系列分析研究,发现了各等位基因核苷酸序列差异,为从分子水平进行ABO基因分型打下了基础.以后,国内外学者先后建立了PCR-RFLP、AS-PCR、直接测序等多种ABO基因分型方法.本文根据G.Watanabe等人报道[4],通过AS-PCR方法荧光标记复合扩增ABO基因型,并对其在法医学中的应用加以研究.现报道如下:     

PCR-RFLP用于 ABO分型遇到的问题及解决方法

用 PCR-RFLP技术进行 ABO基因分型,是从基因水平进行 ABO血型判定,具有操作简单、结果准确等优点,特别是能够解决 " 非分泌 " 型斑迹的血型鉴定问题,在法医学中具有重要的应用价值。近年来这种技术已广泛地被国内外众多法医界学者采用,取得了较好的效果 [1-3]。我们实验室应用 PCR-RFLP方法 [4 ]在对刑事案件中 100 多份血斑、混合斑生物物证进行 ABO基因型检测的过程中,对绝大多数生物物证的血型都能做出明确的判定。但曾遇到过两份生物物证,一份是手帕上微量的血迹 ,另一份是阴道擦拭棉签,在结果判定上遇到了问题,不能明确判定血型。原因是,人 ABO基因 233～ 433区域扩增产物经电泳分离后产生的本该为 200bp一条区带,而这两份样品 233～ 433区域扩增产物经电泳分离后除产生 200bp区带外,在 178 bp 位置另显现一条清晰的区带,从而干扰了 KpnI酶切结果的判读,导致不能确定两份样品的基因型。为解决这类样品的 ABO基因分型问题,我们取该手帕血 DNA,对 ABO基因的 233～ 433 与 660～ 788两个区域进行序列分析,报告如下。     

ABO基因分型及其在法医学中的应用

为建立一种ABO血型系统基因分型方法，采用PCR-RFLP技术，成功地将ABO系统区分为AA，AO，AB，OO，BB，BO六种基因型。对240名中国汉族无关个体血样的ABO（基因型频率调查结果表明，6种基因型的频率分布为0．0125～0．3834，符合Hardy－Weinbeng遗传平衡法则（P＞0．1），其DP值为0．8161。家系分析表明，亲代a、b、o基因传递遵守孟德尔遗传规律。对法医学中常见的血痕、混合斑、骨组织及毛发根部等生物样品进行检测，均能准确判定ABO基因型，并可在实际案件鉴定中应用。     

50例强奸案混合斑中精子ABO基因分型

自 1990年Yamamoto[1] 报道了ABO基因的核苷酸序列以来 ,国内外学者们致力于建立ABO基因型的测定方法 ,如PCR RFLP法[2 ] 、PCR 直接测序[3] 、PCR SSCP法[4 ] 等。但由于ABO基因分型操作烦琐 ,个体识别率低 ,很少被应用于法庭科学实践。本研究对HerrinG[5] 方法进行改良 ,运用PCR RFLP技术 ,检测 5 0例经STR认定的强奸案混合斑中的精子ABO基因型和犯罪嫌疑人血痕的ABO基因型 ,并探讨ABO基因分型在实际检案中的可信性及应用价值。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样本　 5 0例强奸案中的混合斑检材和案犯血痕 (北京市公安…     

运用二重PCR和DNA芯片技术检测ABO基因型

目的以玻片为载体,用寡核苷酸探针杂交技术检测ABO基因型。方法根据ABO基因座外显子6和外显子7的3个SNP点的序列分布特征设计4条寡核苷酸探针,制成分型芯片。将待测样品DNA用末端标记了Cy5的引物进行二重PCR扩增,产物与芯片上的探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号确定样品的ABO基因型。结果利用ABO芯片,可对血斑、毛发等微量检材进行ABO基因型检测。对115名汉族无关个体的调查表明,ABO基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡,等位基因杂合度观察值和期望值分别为0.591、0.616,多态信息含量为0.544,二联体和三联体非父排除率分别为0.188、0.334,个体识别能力为0.777。结论通过DNA芯片检测ABO基因型的技术适用于法医学样本,可满足高通量的检测需求。     

PCR-RFLP法检验混合斑中精斑ABO血型及基因型

运用PCR-RFLP检验方法,对21份精斑样品、5份混合斑检材进行了检验,结果表明该方法能够很好地检测混合斑中精斑的ABO血型及基因型,有效地解决了非分泌型精斑的ABO血型及基因型,拓宽了混合斑中精斑的检验范围.     

应用PCR-SSP方法进行ABO基因分型的研究

<正> ABO基因座位于第9号染色体上。它由7个外显子组成,第7外显子的两处碱基置换形成等位基因A和B,第6外显子的单碱基缺失形成等位基因O。90年代初,Yamamoto报道了ABO基因的核苷酸顺     

单管实时PCR快速检验ABO基因型

目的建立快捷特异的ABO基因分型检测方法。方法根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比。结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成。110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致。结论实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务。     

DNA芯片技术检测HLA-DRB1和ABO基因型

用DNA芯片技术检测HLA-DRB1-ABO基因型。根据HLA和ABO不同基因亚型的独特序列设计探针,制成分型芯片;待检测样品经PCR反应标记上荧光之后,与探针在芯片上进行杂交,通过对杂交产生的荧光信号值进行分析,确定样品DRB1位点和ABO位点的基因亚型。将这一方法应用于111份样本的HLA-DRB1-ABO基因分型并将部分样品进行基因测序。检测结果证明本实验研制的HLA-DR-ABO基因分型芯片可准确分辨出DRB1位点30个等位基因、ABO位点6种基因型。该方法分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便,对比常规的PCR-SSP方法,HLA-DR-ABO基因芯片方法更为直观,并具有集成化优势,可以在一张芯片上同时检测HLA和ABO位点,并实现一张芯片多人份,不仅适用于法医学亲子鉴定和个体识别,亦可应用于移植配型、HLA相关疾病及人类遗传学研究。     

ABO基因分型与多重STR联合检测在法医学中的应用

目的建立ABO基因型和Goldeneye16A试剂盒联合检测的方法,并评价其在法医学实践中的应用价值。方法将6种ABO基因型(A/A,A/O,B/B,B/O,A/B,O/O)的序列特异性引物(PCR-SSP)检测方法与Goldeneye16A试剂盒相整合进行同步分型。通过对460份男性个体血痕样本、9947A DNA及90份案件样本进行检测,考察方法的一致性、灵敏度及对法庭科学检材的适用性。结果应用本文方法可同时检出6种ABO基因型和15个常染色体STR基因座及性别决定基因座,检测灵敏度为125pg,其中ABO基因检测灵敏度达63pg。460份男性血痕和90份案件检材证实该联合分型方法用于各类检材结果准确、稳定。结论本文ABO基因分型与多重STR联合检测方法,适用于各类含有核细胞的生物检材,在法庭科学DNA鉴定中有较好的应用前景。     

违反ABO血型遗传规律认定亲权关系的案例

ABO血型是人类重要的遗传性状之一,它遵循孟德尔遗传学定律,在一个家庭中,孩子的血型基因必定来自父母,并且具有极高的稳定性,血型的检测方法成熟,因此ABO血型系统是亲权鉴定中使用得最早、最多的多态性遗传标记之一。本文报道了一例ABO血清学分型结果与孟德尔遗传规律矛盾，但DNA分析结果却认定亲权关系的亲子鉴定案例。     

ABO基因分型的等位基因特异性引物消耗法

目的建立一种新的ABO基因型分型的等位基因特异性引物消耗法(CASPA)。方法根据ABO基因碱基序列中的第261、297、803nt3处多态性位点设计6条特异性引物及1条公用引物,采用CASPA法鉴定146名中国汉族无关个体血液斑样品的ABO基因型。结果146名中国汉族无关个体血液斑样品中检出AAb、AB、AO1、BOv、O1Ov、AA、BB、O1O1、BO1等9种基因型,结果明确,其基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论ABO基因型CASPA分型方法为ABO血型的鉴定提供了一个新的检测方法。     

SNaPshot技术应用于云南省部分人群ABO血型基因分型

目的应用SNa Pshot技术对ABO血型进行基因型检测。方法采集107份已知血型(由血清学获得)的云南无关个体静脉血提取DNA,运用SNa Pshot Multiplex试剂盒对ABO血型基因的第261、297、681、703、802和803核苷酸位置的6个SNP位点进行复合扩增检测,计算相关遗传学参数。结果 107份血样中A、B、O~A、O~G 4个等位基因的频率分别为0.355 1、0.168 2、0.230 0、0.247 6,其中A~G和顺式AB未检出,ABO基因分型结果与血清学检验的结果一致。结论 SNaPshot技术适用于ABO血型基因的分型。     

PCR-RFLP法分析北方汉族人群HLA-B基因多态性

目的建立以PCR-RFLP法分析HLA-B基因多态性的方法,并对105名北方汉族人群酶切片段类型、频率进行调查,为其法医学应用奠定基础。方法酚/氯仿抽提法抽提样本DNA;PCR扩增HLA-B基因的外显子2,3;NlaIII酶切PCR产物;聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术检测酶切结果;DNA测序确认酶切位点。结果HLA-B特异性扩增片段长度为943bp,以NlaIII酶进行酶切时在北方汉族人群中获得了14条片段,20种谱带类型,观察到了6个酶切位点。结论仅应用一种内切酶对HLA-B基因进行PCR-RFLP分析即可获得多条片段,多态信息含量大大提高,该法可以应用于法医学亲子鉴定和个人识别等。     

法医SNP复合检测体系的构建及应用

目的构建48-SNP位点复合检测体系,用于个体识别、性别鉴定、ABO基因分型。方法采集225份无关个体样本(血斑及口腔拭子),18份案例样本(不同组织及体液斑),选择43个常染色体位点、4个ABO基因位点和1个性别鉴定位点,根据单碱基延伸技术通过GenomeLabTMSNPstream基因分型系统进行SNP分型;并检测体系灵敏度、同一个体不同组织同一性及模拟腐败检材。结果 48-SNP体系分型结果与测序结果的一致性为100%,最小DNA检出量为0.25ng,不同组织来源样本检测同一性很好;利用该体系检测225名无关汉族个体,所有位点均符合Hardy-Weinberg平衡,整个系统的随机匹配概率为9.4×10-18,累积非父排除率(CEP)为0.999 788,累积个体识别率大于0.999 999 999 999 999 99。结论本文48-SNP体系能同时进行个体识别、ABO基因分型和性别鉴定,可以作为现有STR检验体系的补充。     

长沙地区人群Hp型的分布调查

<正> 我们采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法检测长沙地区285名献血员的血清Hp表型及基因频率(表1),并用x~2检验Hp型与ABO血型的关系(表2).结果表明,Hp各型的基因频率分布在国内南方地区极相近,与国外比较有一定种族差异;且Hp遗传与ABO遗传之间无相关性.     

用心脏组织检测死者ABO血型一例报告

<正> 利用人体组织检测人体的ABO 血型在法医学实践中具有十分重要的意义,本文作者已报道用红细胞粘连试验研究ABH 物质在人体组织中的分布,已证实心脏内膜组织亦含有与红细胞一致的ABH 物质。现报道一例利用福尔马林固定的心脏组织,成功测定出死者ABO 血型的实际应用案例。     

从烧焦尸体的残留组织检测死者ABO血型1例

从人体组织检测ABO血型在法医学实践中具有重要意义。我室先后采用不同方法测定人体组织的ABO血型。作者在探索理化因素对人体组织细胞ABH物质的影响时,发现水煮100℃40分钟的皮肤及舌组织仍能正确判定ABO血型。从烧焦尸体的残留组织测定ABO血型,国内外尚未见报道,本文报道1例。     

ABO位点限制性扩增片段长度多态性的研究

建立了PCR扩增、限制性酶切、8％（T）、5％（C）聚丙烯酸胺凝胶垂直电泳和银染检测ABO位点的限制性片段长度多态性的方法体系。应用Amp-RFLP技术对185名中国人（哈尔滨）ABO位点的基因频率和基因型分布进行了调查和统计分析。ABO位点特异片段长度为140～200bp，基因频率为0．2000～0．5568。6种基因型频率为0．973～0．3135，杂合度0．5838，Dp值0．7146。经H－W平衡吻合度检测，完全符合群体遗传多态分布。通过对11个家庭33名相关个体的分析，证明完全符合孟德尔遗传定律。ABO基因型检验适用于法庭科学的个体识别和亲权鉴定。     

胃组织血型测定证明输血错误一例报告

<正> 本文作者已报道用特异性红细胞粘附试验研究ABH物质在正常人体组织中的分布,已证实胃组织的粘膜上皮及胃腺中含有丰富的ABH物质,可用于检测ABO血型。现报告一例利用手术切除的正常胃组织检测其ABO血型,证实在医疗过程中因输血错误而导致死亡的病例。