微量体表脱落上皮细胞的DNA检验

目的　建立微量体表脱落上皮细胞的DNA检验方法。　方法　采用Chelex -10 0法提取DNA ,以Microcon -10 0纯化柱纯化浓缩DNA ,用ProfilerPlus试剂盒PCR扩增后用 3 10基因分析仪检测。　结果　 10种常见粘附有体表脱落上皮细胞的样本 10 0个 ,其中 7种 70个样本成功检测到 10个STR位点的分型 ,检出率为 10 0 % ,其余 3种样本检出率分别为 5 0 %、2 0 %、10 % ,将该方法应用于 2例实际检案 ,取得满意效果。　结论　所建立方法稳定可靠 ,易于操作 ,适用于多种检材 ,为微量体表脱落上皮细胞的DNA检验提供了确实可行的检验方法     

3种方法联合运用提取人体脱落上皮细胞DNA

目的寻求提高法医物证检验中附有人体脱落细胞载体检材的DNA检出率的方法。方法根据案件检材的具体条件．选择3种提取方法即Chelex-100法、Chelex-100联合有机法和Chelex-100联合磁珠法。结果采用了分步提取DNA法,可充分、有效地提取微量DNA,提高了人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。结论根据第一步提取方法的检测结果,来调整下一步的提取策略,如是否加以纯化浓缩,可增加人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。     

带血手套腕部微量上皮细胞DNA检验1例

PCR技术应用到生物物证的检验,尤其是应用荧光复合STR基因座进行分析,使微量生物检材的检测成为可能[1]。在刑事案件中,与人体表接触过的衣服、手套等常粘附有体表脱落上皮细胞,如能对此进行检验并成功获得DNA分型数据,将为案件的侦破提供重要的线索和证据。通常情况下,因脱落上皮细胞量非常少,在检验过程中又缺乏稳定的方法,常常导致检验结果不理想。本文作者通过对一例棉线手套腕部上的脱落上皮细胞成功进行STR分型,为极微量体表脱落上皮细胞的检验提供了一种切实可行的方法。1案例2005年12月,某商店内发生入室抢劫案,两名妇女被杀害…     

一种收集衣服上脱落细胞的新方法

目的建立一种生物脱落细胞的微量提取新方法。方法利用一套自制的“生物细胞提取仪”无损提取衣物等载体上的人体脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,用不同的试剂盒进行STR复合扩增检验。结果10例检材都得到16个基因座成功分型。结论用该方法提取微量细胞DNA,可获得满意的DNA分型。     

脱落上皮细胞类生物检材的自动化提取

目的建立一种自动化提取脱落上皮细胞类生物检材DNA的方法。方法附着于不同载体上的脱落上皮细胞类生物检材共278份,应用Eppendorf epMotion 5075LH工作站结合DNA IQTM系统提取模板DNA,并用Identifiler试剂盒进行STR检验。结果在278份被检的生物检材,其中126份检材获得13个基因座以上的STR分型,不同类型的检材其检出率不相同,最高达73.44%,最低为10.89%。结论脱落上皮细胞类检材应用自动化工作站提取DNA模板可在法医日常检案中广泛应用。     

自动化工作站与Chelex-100法对血样本检验效果比较

目的比较自动化工作站与Chelex-100法对不同浓度血液样本的检验效果。方法取新鲜血液,按倍量稀释法制成2~1 024倍10种不同浓度的血样本,分别采用自动化工作站和Chelex-100法提取模板DNA,应用Identifiler Plus试剂盒进行扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较。结果稀释2~32倍的血样本,采用两种方法的检验成功率均可达到100%;稀释64倍的样本,Chelex-100法成功率为41.3%、完整分型数为78.3%,自动化工作站成功率为13.0%、完整分型数为43.5%,两者比较,差异均有统计学意义(P0.01);稀释128倍的样本,成功率在Chelex-100法(8.7%)和自动化工作站(2.4%)之间比较,其差异无统计学意义(P0.05);稀释256倍以上,两种方法均无法获得分型结果。结论自动化工作站适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法的效果可能更优。     

两种DNA提取方法检测微量陈旧汗斑1例

与人体接触过的衣、物常常附有体表脱落的上皮细胞成分。有试验证明,人体只要接触物体5秒钟以上,即有可能细胞遗留在物体上,也就是说,有可能留下核DNA及线粒体DNA[1]。在刑事案件中,如能成功地对有关物品上粘附的脱落上皮细胞的DNA检验,便可为案件的侦查和审判提供重要的线索和证据[2]。作者在实际检案中遇到一例微量陈旧汗斑,通过联合应用两种DNA的提取方法并进行了对比,解决了该案的难题。报道如下:1简要案情2003年初,某女被杀害。现场提取男士夹克衫一件,领后部有可疑油渍样斑迹,考虑此处有穿衣者留下的汗斑。2检验2.1检验材料犯罪…     

PCR产物纯化增强STR分型强度的研究

目的研究PCR产物纯化对微量DNA的STR分型的影响。方法使用25pg/μL的9947标准基因组DNA为模板,标准程序扩增和STR分型检测。设立对照组A和实验组B、C、D。实验组分别使用分子筛(Qiagen DyeEX2.0spin kit)、超滤膜(Amicon Ultra-0.5,100KD)、亲和层析(Qiagen MinElute Column)3种DNA纯化方法,对照组不做任何处理。结果与对照组相比,3种方法均可显著提高STR分型强度(P峰高<0.001),平均峰高约为对照组的4倍,并且3种方法对提高STR分型强度无显著差异(P峰高=0.249)。结论 PCR产物纯化能显著提高微量DNA的STR分型强度,可用于骨骼、脱落细胞等微量DNA检材的检验。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。