斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（ＤｏｔＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１∶４００,ＳＰＡ胶体金探针的工作浓度为１∶８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点。用ＤｏｔＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（ＤｏｔＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管、肺、肾病料,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％;对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,ＩＢＶ阳性检出率分别为３４．５％和３１．０％,阳性符合率为９３．３％（Ｐ＞０．０５）。     

鸡大肝和大脾病的流行病学初步调查

对两个鸡场发病鸡群的病理剖检发现，病鸡和死亡鸡肝、脾异常肿大，为正常体积的３～４倍，肝重为体重的１３．８３％、脾重为体重的１．８７％。病鸡临床上无特异症状。用鸡大肝和大脾病（ＢＬＳ）标准抗原和阳性血清通过琼脂扩散试验对早期发病鸡群进行调查，鸡场Ⅰ血清抗体阳性检出率为３／１０，抗原阳性检出率为６／３９；鸡场Ⅱ未查出抗原。证实我国已存在ＢＬＳ病。     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

猪瘟荧光抗体的制备及应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟血清中提取免疫球蛋白 ,应用搅拌法标记荧光素 ,硫酸铵盐析、SephadexG 2 5层析和肝粉吸收三法结合去除标记物之游离荧光素 ,制备猪瘟荧光抗体。经测定 ,标记的荧光抗体工作稀释度为 1∶16～ 1∶32。用标记的荧光抗体诊断猪瘟 ,从 39份可疑病料中检出阳性病例 12份。     

奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA检测方法的建立

以奶牛流产衣原体外膜蛋白A(OmpA)作为抗原,筛选最佳反应条件,建立了奶牛衣原体病间接ELISA检测方法。结果显示,OmpA的最佳包被浓度为1∶320;血清最佳稀释度为1∶40;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;抗原的最适包被条件为37℃1h加4℃过夜;ELISA的阴性、阳性临界值为0.391。用本方法和衣原体间接血凝试验检测奶牛血清田间样品206份,两者的符合率为95.3%。本试验建立的OmpA-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,可为牛衣原体病的诊断及流行病学调查提供有效工具。     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１２００，以ＯＤ４９０＞０．３，Ｐ／Ｎ＞２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。     

湖北等六省(区)规模化猪场猪衣原体病的监测

用衣原体间接血凝试验（ＩＨＡ）对采自六省（区）部分大、中型猪场的１１０２份猪血清检测结果，猪群衣原体抗体阳性检出率河北省为５２．７１％，陕西省为４０．９１％，甘肃省为１６．５０％，宁夏回族自治区为２７．４４％，河南省为２８．００％，湖北省为３１．８８％；另外，对湖北省某地３个万头猪场中不同年龄猪群检测猪衣原体抗体，仔猪的平均检出率为９．２６％（６．６７％～１０．５３％），生长肥育猪为４５．２８％（３５．００％～６４．７１％），母猪为６４．９１％（４７．３７％～８５．７１％）；从母猪流产胎儿病料和哺乳期肺炎死亡仔猪肺中分离出３株鹦鹉热衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔａｃｉ），其中２株流产株（ＨＢ１和ＨＢ２）的ＥＬＤ５０均为１×１０－１３，肺炎株（ＨＢ３）为１×１０－１２。     

我国部分地区猪传染性萎缩性鼻炎病原的调查

从我国部分地区２１个养猪场１０８１头份猪鼻腔分泌物和病死猪肺脏材料分离猪支气管败血波氏杆菌（Ｂｂ）６６１株，平均阳性检出率为６１．１％，个别猪场最高检出率为９３．３％。分离产毒素多杀性巴氏杆菌（Ｐｍ）９９株（Ｄ型９５株，Ａ型４株），总平均阳性检出率为９．２％。９９株是在３省１０个养猪场２６４头份病料中分离到的，阳性率为３７．５％。调查结果表明，Ｂｂ污染甚广，本菌感染的猪场多为非临床型猪场。产毒素Ｐｍ虽然仅在３省、市１０个猪场分离到，但其中有９个猪场是猪萎缩性鼻炎临床型猪场。说明临床型猪萎缩性鼻炎与产毒素Ｐｍ混合感染有关。Ｂｂ感染和不良的饲养管理、地理环境都有助于产毒素Ｐｍ在猪鼻腔中定居繁殖及传播，从而使病情发展加速。     

银加强胶体金技术检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

建立了胶体金标记羊抗兔ＩｇＧ检测牛副结核病ＩｇＧ１抗体的银加强胶体金技术（ＳＥＣＧＡ）,其抗原包被浓度为２０μｇ／ｍＬ,被检血清稀释度为１∶１６０,被检血清、兔抗牛ＩｇＧ１、金标羊抗兔ＩｇＧ的作用时间分别为１０,２０和６０ｍｉｎ;封闭液的浓度、作用时间和作用温度分别为含２０ｇ／Ｌ明胶ｐＨ７．４的０．０１ｍｏｌ／ＬＴＢＳ,３０ｍｉｎ和３７℃;被检血清、兔抗牛ＩｇＧ１和金标羊抗兔作用之后用洗涤液洗涤时间和次数分别为每次５ｍｉｎ３次,每次５ｍｉｎ２次,每次５ｍｉｎ１次;显影时间为１５ｍｉｎ,定影时间为２ｍｉｎ;凡着色很深、呈均匀一致的灰黑色斑点,且与背景反差强者为强阳性;着色淡,与背景反差小者为弱阳性;不着色者为阴性。用本法检测３９６份疫区牛血清中抗副结核分枝杆菌ＰＰ抗原ＩｇＧ１抗体,其结果对粪便培养阳性牛的检出率为９２．３％;对粪便培养阴性牛的检出率为４．０％;经可靠的检验方法验证,本法的可信度至少达９６．０％（４４／４６）。     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。