大肠埃希氏菌性腹泻仔猪各组织的超微病理学观察

大肠埃希氏菌性腹泻仔猪的病理学变化表现为全身实质器官变性、坏死；脑膜血管充血，有微血栓形成。透射电镜观察发现回肠微绒毛表面附着杆状、有菌毛的大肠埃希氏菌；小肠绒毛排列紊乱、极性丧失；小肠粘膜、肝及淋巴结等组织细胞的膜结构受损，内质网扩张，线粒体肿胀，染色质边移等，随着日龄的增大细胞逐渐变性、坏死，并出现嗜酸性小体。     

大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位 (FedF/ab)的基因 (fedF/ab)序列 ,设计了 1对引物 ,利用PCR技术从大肠埃希氏菌F10 7/ 86、YCED1、YCED2、C、D和 12F株中分别扩增获得了一段序列 ,并克隆至 pGEM T载体 ,获得了重组质粒TF10 7F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析 ,6个重组质粒的大小均为 90 3bp ,与fedF/ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F10 7/ 86、YCED1、C和 12F株的fedF基因序列完全相同 ;只有YCED2株在第 181位碱基处存在 1个C→T的无义变异差异 ,D株在第 6 5 5位碱基处存在 1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现 1个S→P变异。结果表明 ,所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因     

大肠埃希氏菌F18菌毛FedF蛋白的表达与鉴定

根据已发表的F18菌毛F亚单位的基因序列(fedF)设计了1对引物,利用PCR技术分别扩增到F18ab和F18ac菌毛的fedF编码序列,并按预定的阅读框架分别插入表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedF/ab与pPFedF/ac,然后转化大肠埃希氏菌BL21获得重组菌PPFedF/ab与PPFedF/ac。测序结果表明,fedF编码序列大小均为837 bp,与GenBank中登录的FedF 结构编码序列(Z26520)大小一致。通过对菌体裂解物进行SDS PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠埃希氏菌PPFedF/ab与PPFedF/ac均可以表达融合蛋白形式的FedF(分别命名为GST FedF/ab与GST FedF/ac)。     

慧通仔痢王的研制及其对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻的防治效果

用研制成的慧通仔痢王对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻进行实验室和田间试验.在实验室试验中,慧通仔痢王对仔猪大肠埃希氏菌性腹泻治疗的有效率为96.55%(28/29).在田间试验中,慧通仔痢王的治愈率为88.89%(1392/1566),对照组用常规药物治疗,治愈率为59.20%(238/402);用慧通仔痢王对3日龄仔猪进行预防,其发病率为28.82%(1794/6224),对照组仔猪发病率为57.74%(455/788).用慧通仔猪王分别与其他5种药物联合应用时,其治疗效果均比单一种药物应用好.     

鸡源大肠埃希氏菌大质粒的探讨

用碱裂解法提取分离的10株鸡源大肠埃希氏菌的质粒.结果多数大肠埃希氏菌菌株含有大质粒,分子量为50～230kb.这些大质粒可能含有毒力相关基因,与细菌的耐药性、大肠埃希氏菌素的产生及质粒的传递功能等有关.     

应用质粒图谱分析大肠埃希氏菌毒力差异的研究

对1株无致病性鸡源大肠埃希氏菌(O21)和5株已知毒力强弱的大肠埃希氏菌(O2、O1、X2、148和O78)进行质粒图谱(PP)分析.结果表明这6个菌株属于不同的6种质粒谱型,其毒力的强弱与其所携带质粒的数量和大小有关,但不同毒力株间也有少数几条相同大小的谱带.试验结果表明PP图谱法可作为大肠埃希氏菌分型和鉴别其毒力的间接分子生物学方法.     

211菌对猪致病性大肠埃希氏菌的体外抑制作用

将产乳酸、能生成芽胞的211菌对猪的9株致病性大肠埃希氏菌进行抑制试验.结果表明,培养24～72 h,211菌对9株大肠埃希氏菌均能产生抑制作用,抑菌长度0～3.25 cm;最佳抑菌时间为24～48 h;72 h后抑菌区有不同程度的所缩小,O141和O9菌株抑菌区消失.     

大肠埃希氏菌血清型鉴定及黏着素抗原的测定

对 95株已鉴定的大肠埃希氏菌 ,采用玻板凝集法进行了O抗原血清型的鉴定 ,确定 46株为O抗原血清型。同时采用免疫荧光技术和D 甘露糖抵抗血凝反应 (MRHA)及其抑制试验测定 ,确定为O抗原血清型的大肠埃希氏菌的黏着素抗原 ,其中 2 3株具有K88、K99、987P 3种黏着素抗原。结果表明 ,同时采用上述 2种方法筛选大肠埃希氏菌的黏着素抗原 ,其准确性和灵敏性更高。     

用ELISA法对腹泻羔感染K_(99)定居因子阳性大肠埃希氏菌的调查

用ELISA方法对从新疆7个地区采集的270份腹泻羔粪样和肠内容物进行大肠埃希氏菌K_(99)菌毛抗原检测,其阳性率为7.8％。     

大肠埃希氏菌F18菌毛结构蛋白与黏附特性的关系

利用已表达的F18ab和F18ac菌毛各结构亚单位的融合蛋白(GST-FedA/ab、GST-Fe-dA/ac、GST-FedE、GST-FedF/ab、GST-FedF/ac)分组肌肉注射健康家兔,制备抗FedA/ab、Fe-dA/ac、FedE、FedF/ab、FedF/ac多价血清。结果表明,所制备的5种抗Fed多价血清均能凝集F18ab 大肠埃希氏菌107/86株和F18ac 大肠埃希氏菌8813株。利用抗大肠埃希氏菌F18菌毛主要结构亚单位FedA特异抗体和次要结构亚单位FedE、FedF特异抗体,研究了F18菌毛与小肠上皮细胞的黏附特性。结果发现,FedA抗体和FedE抗体单独和合并均不能抑制F18 菌与小肠上皮细胞的黏附,而单用抗FedF抗体即能明显抑制F18 大肠埃希氏菌与小肠上皮细胞的黏附,表明FedA和FedE与F18菌毛的黏附不具相关性,而FedF才是F18菌毛的黏附性结构亚单位。     

致猪水肿病大肠杆菌标准菌株F107/86 fedA基因的克隆与原核表达

以致猪水肿病大肠杆菌标准菌株F107/86的基因组DNA为模板,对去掉信号肽的456bp的fe-dA基因进行了PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHⅠ与EcoRⅠ位点之间,经酶切鉴定与测序,在大肠杆菌中以IPTG诱导表达,并对表达产物用SDS-PAGE和Western-blot分析进行验证。结果表明,筛选出的阳性质粒pGEX-fedA-2(pfedA)经测序并与GenBank中收录的M61713序列进行比较,证明插入序列及读码框正确;表达产物GST-FedA经SDS-PAGE分析大小约42.4ku,Western-blot分析证实其具有良好的反应原性。所构建的原核表达载体可大量表达抗原蛋白,为进一步研究猪水肿病亚单位疫苗奠定了基础。     

仔猪水肿病的诊断与防治

仔猪水肿病是由病原性大肠埃希氏菌引起的一种断奶后仔猪急性、高度致死性疾病。从 90年代以来 ,仔猪水肿病的发生日渐增多 ,现已成为早期断奶后仔猪死亡的主要原因 ,给养猪业造成了重大的经济损失。因此 ,及早确诊本病并采取针对性的有效防治措施 ,控制本病的发生和流行 ,对保证养猪业的发展具有重要意义。1　流行特点据我们对胶东地区 10 0多个养猪场的临床调查发现 ,仔猪水肿病虽可见于 10日龄至 4月龄的猪 ,但早期断奶 ( 2 5 45日龄断奶 )后 13周内的仔猪发病率最高。该病一旦在某个养猪场发生 ,则持续几年很难根除。发病规律是同窝仔猪…     

新城疫病毒F48 E9株M和NP基因的原核表达

根据新城疫病毒(NDV)F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因.经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a( )上,转化E.coli BL21(DE3),筛选表达NDV F48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDV M蛋白在E.coli BL21(DE3)内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达.用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDV M和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.     

一株猪源脑心肌炎病毒的分离与鉴定

将江苏省某规模化猪场疑似脑心肌炎仔猪病料接种BHK-21细胞,并采用间接免疫荧光试验(IFA)、基因序列测定和动物人工感染试验进行鉴定,结果显示,BHK-21细胞接种病料样品后盲传3代出现细胞病变,病毒TCID50为10-9.2/mL;用脑心肌炎病毒(EMCV)单克隆抗体-IFA检测,在感染细胞的胞浆中可见特异性荧光;分离物的PCR扩增产物的基因序列与GenBank中的EMCV VP1基因的同源性为85.7%~99.8%;BALB/c小鼠人工感染该分离株后出现明显的临床症状和EMCV的典型病理变化,免疫组织化学试验证明,试验鼠脑组织中含有EMCV抗原,商品仔猪人工感染后未出现明显的临床症状及病理变化,证明该分离病毒为EMCV(NJ08株),且对BALB/c小鼠具有较强的致病作用。     

小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达

提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价.结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性.     

鸡大肠埃希氏菌分离鉴定与大肠杆菌病灭活疫苗的制备

致病性大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｃｏｌｉ)可引起家禽的胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、卵黄性腹膜炎和全眼球炎等一系列疾病 ,对养禽业的健康发展造成了很大的威胁。目前对该病的预防多采用多价灭活疫苗或弱毒疫苗。由于致病性大肠埃希氏菌具有多种血清型 ,因此难以获得对各血清型都具保护力的疫苗。而应用相应血清型的菌株制备疫苗 ,可起到预防和控制本地区大肠杆菌病的作用。1　材料与方法1.1　培养基　伊红美蓝培养基、麦康凯培养基、三糖铁培养基、营养肉汤培养基、厌氧肉肝汤、改良沙氏培养基、马丁肉汤 ,均按常规方法配制…