曲马多中毒死亡后GABAA受体α1和GABAB受体1亚型在延髓孤束核和疑核中的表达

目的 观察曲马多中毒死亡后人脑延髓孤束核和疑核中γ-氨基丁酸(gamma-amino butyric acid,GABA)A受体α1亚型(GABAAα1)和B受体1亚型(GABAB1)的表达变化,探讨曲马多中毒死亡的机制.方法 应用免疫组织化学方法,观察比较曲马多中毒死亡人脑与非中毒原因死亡人脑延髓孤束核和疑核的GABAAα1和GABAB1的变化,并用图像分析系统进行分析. 结果 非中毒原因死亡人脑延髓孤束核和疑核有低水平的GABAAα1和GABAB1表达,曲马多中毒死亡人脑延髓孤束核和疑核的GABAAα1和GABAB1表达明显增加.结论 曲马多中毒死亡的机制可能是由于人脑延髓孤束核和疑核GABAAα1和GABAB1表达增加所致的呼吸抑制.     

鼠窒息后缺氧诱导因子1-α在心、肺中的表达

目的研究大鼠机械性窒息死亡后缺氧诱导因子1-α(HIF1-α)在心、肺中的表达变化,探讨其作为窒息死亡诊断指标的可行性。方法制作大鼠缢死模型,分别于窒息死后及正常断颈处死后0、2、6、24h时间段取材,用免疫组织化学、RT-PCR方法测定缢死后HIF1-α在心肌和肺组织中的分布和表达变化。结果HIF1-α在窒息组的心肌和肺组织中表达,窒息组和对照组在各时间段表现出明显差异,对照组仅在死后2、6、24h阳性表达。窒息死亡组可见核阳性表达,而对照组未见核阳性表达。半定量RT-PCR结果显示HIF1-α在0h时各组未见升高,但在2、6、24h窒息组则较对照组升高。结论心和肺组织HIF1-α表达核阳性细胞的出现,可以作为窒息死亡的特征性表现。     

毒鼠强中毒大鼠脑神经元GABA_A α1受体的检测

目的探讨GABAAα1受体在毒鼠强中毒大鼠脑组织中的变化及其机制。方法选择健康Sprague-Daw-ley大白鼠30只,分成5组,每组6只;分别以2.0 LD50、1.0 LD50、1/2 LD50、1/10 LD50毒鼠强量,采用灌胃染毒方法制作毒鼠强中毒模型,并以健康大鼠灌服生理盐水为对照;断颈处死大鼠,提取脑皮质、海马及脑干脑桥等脑组织进行免疫组织化学染色,观察GABAAα1受体阳性染色神经元的变化。结果不同LD50量染毒大鼠的皮层、海马及脑干,其GABAAα1受体免疫组化阳性染色神经元较对照组组减少,其中以1.0 LD50、1/2LD50组减少最为显著;相同染毒剂量,以脑干组织减少最多。结论GABAAα1受体表达下降与毒鼠强中毒机制相关。     

急性乙醇中毒和外伤在蛛网膜下腔出血致死机制中的作用

目的研究人脑在急性乙醇中毒状态下tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平与乙醇浓度的关系,分析乙醇与外伤在蛛网膜下腔出血死亡机制中的作用。方法选取15例实际案例,提取脑组织进行组织病理学检查、心血进行乙醇浓度检测,用免疫组织化学法观察人脑干、大脑、小脑tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平。结果急性乙醇中毒外伤组和急性乙醇中毒组的脑组织肿胀。除小脑tPA外,tPA、MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平在饮酒者较未饮酒者在脑干、大脑、小脑均有升高(P0.05),MMP-2、MMP-9和AEG-1表达水平与心血乙醇浓度存在正相关(P0.05,r0.6)。结论急性乙醇中毒状态下人脑tPA、MMP-2、MMP-9、AEG-1表达较未饮酒者均显著增强,MMP-2、MMP-9及AEG-1表达水平与乙醇浓度存在相关性,乙醇对脑细胞有毒性作用。     

毒鼠强中毒大鼠脑GABA及GABAAR-α1的表达

目的探讨毒鼠强中毒大鼠脑GABA及GABAAR-α1表达的变化及可能机制。方法健康Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,随机分为正常对照组、空白对照组、高剂量中毒组和低剂量中毒组,每组5只。高剂量中毒组每只以1.0mg/kg的剂量用毒鼠强悬浊液灌胃,低剂量中毒组每只以0.1mg/kg的剂量用毒鼠强溶液灌胃制作中毒模型。应用免疫组化技术和图像分析仪对GABA及GABAAR-α1的表达情况和变化规律进行研究。结果(1)正常大鼠脑组织内GABA及GABAAR-α1表达较为广泛,维持在中等水平;(2)高剂量中毒组脑内GABA及GABAAR-α1表达均下降;(3)低剂量中毒组脑内GABA表达先下降,于中毒后6h降至最低,后表达开始增加,3d时接近对照组水平,5～7d达高峰,10d时仍高于对照组;(4)低剂量中毒组脑内GABAAR-α1表达先下降,于中毒后6～12h降至最低,后表达开始增加,7～10d时接近对照组水平。结论(1)高剂量毒鼠强中毒情况下,GABA及GABAAR-α1表达均下降;(2)大鼠脑GABA及GABAAR-α1表达改变与毒鼠强中毒的发生机制密切相关。     

曲马多在家兔体内的死后分布研究

目的研究曲马多在中毒家兔体内死后分布规律,为曲马多中毒检材采取提供实验依据。方法家兔经口给予10倍LD50曲马多,待家兔死亡后迅速解剖取样,气相色谱／质谱联用和气相色谱-FTD法测定其体液、脏器、大脑及右上肢和右下肢肌肉中曲马多的含量,比较其变化规律。结果血液和肝脏中曲马多的最低检出限分别为0．05μg/mL和0．05μg/g,提取回收率为97．60％±0．65％～103．10％±1．24％。曲马多在家兔体内的死后分布为：肾〉胃〉肝〉脾〉肺〉脑〉心〉上肢肌肉〉下肢肌肉〉〉体液（尿〉胆汁、心血〉玻璃体液）。结论大剂量曲马多中毒致死后在体内分布不均匀,组织中曲马多含量明显高于心血、胆汁等体液。     

曲马多中毒及其毒理作用

曲马多为中枢非麻醉镇痛药,通过作用于μ阿片受体、抑制去甲肾上腺素与5-羟色胺再摄取等双重作用机制的协同作用。镇痛效果较好。在世界范围内被广泛应用于中、重度急、慢性疼痛的治疗。但目前有关曲马多不良反应与曲马多滥用中毒的案例报道正日益增多。本文从曲马多的镇痛机制、不良反应以及依赖滥用等方面,综述了导致曲马多中毒的可能因素,以期唤起人们对曲马多安全性的注意。     

两种窒息死亡方式下大鼠体内缺氧诱导因子1-α的变化规律

目的探讨氮气处理窒息死及缢死后大鼠心、肝、肺、肾中缺氧诱导因子1-α(HIF1-)α的表达变化规律及法医学意义。方法制作大鼠氮气处理窒息死及缢死两种窒息模型,记录其特征表现;应用免疫组织化学方法及图像分析技术测定大鼠窒息死后不同时间段HIF1-α在心肌、肺、肝、肾中的分布变化;结果HIF1-α表达于两种窒息模型的心肌细胞、肝细胞、肾小管细胞以及肺部各种细胞,各时间段的窒息组和对照组HIF1-α的表达有明显区别;氮气处理窒息死组四种组织在死亡后0、6和24h表达有减弱趋势,0h有核阳性表达,呼吸及心跳停止时间比缢死组短,各组织表达阳性率比缢死组稍弱;缢死组在除心肌表达逐渐增强外其他组织表达在6h出现一个表达高峰(此时核阳性表达最多),后表达逐渐减弱;对照组表达平稳,均未见到核阳性。结论在死亡后24h内检测组织中HIF1-α的表达可以作为推断窒息死的一个生物学指标。     

等电聚焦同步检测血浆类粘蛋白ORM_1和α1-抗胰蛋白酶M亚型

作者应用等电聚焦技术,建立了同步检测血浆类粘蛋白ORM_1亚型和α1-抗胰蛋白酶M亚型的方法。本法累计个人识别机率为0.8464,累计非父排除率为0.3739,是同步电泳分型方法中鉴别效率较高的一种。此法为法医学亲子鉴定提供了一种新手段。     

急性乙醇中毒大鼠脑皮质α-syn表达与神经细胞凋亡的关系

目的观察急性乙醇中毒大鼠脑皮质α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达及神经细胞凋亡的变化,探讨乙醇对神经细胞损害的机制。方法用50%乙醇溶液灌胃方法制作大鼠急性乙醇中毒模型。采用免疫组织化学染色技术和图像分析方法观察大鼠急性乙醇中毒后1 h、3 h、6 h、12 h脑皮质内α-syn和caspase-3的表达。测定阳性细胞数和平均光密度值,分析其变化趋势,并进行方差分析和t检验。结果急性乙醇中毒组大鼠脑皮质α-syn染色阳性细胞数和平均光密度值均呈上升趋势,6 h达到峰值,12 h略有下降,但仍高于1 h、3 h组。中毒后12 h以内,大鼠脑皮质的caspase-3阳性细胞数和平均光密度值均呈逐渐上升趋势。结论急性乙醇中毒后脑水肿、缺氧引起α-syn异常聚集可能参与乙醇中毒后早期神经细胞凋亡过程。     

Study of the brainstem, particularly the arcuate nucleus, in sudden infant death syndrome (SIDS) and sudden intrauterine unexplained death (SIUD)

Complete examination of the brainstem involves transverse serial 5-microm sections made throughout the entire brainstem. The number of serial sections varies from 360 in sudden intrauterine unexplained death (SIUD) to 600 in term fetuses to over 1400 sections in sudden infant death syndrome (SIDS) victims. The procedure is not applicable in all histopathological laboratories, owing to the need for additional technical personnel. The simplified procedure allows a remarkable reduction of the number of sections. The brainstem is divided into 3 blocks. The first, cranial block, extends from the border between the medulla oblongata and pons up to the upper pole of the olivary nucleus. The second, intermediate block, corresponding to the submedian area of the inferior olivary nucleus, has as reference point the obex and extends 2 to 3 mm above and below the obex itself. The third, caudal block, includes the lower pole of the inferior olivary nucleus and the lower adjacent area of the medulla oblongata. Examinations of the brainstems from 106 SIDS victims, 30 controls, and 51 stillborns underlined a remarkable variability, particularly of the arcuate nucleus. The simplified examination of the brainstem makes it possible to evaluate the structures, examining 3 specific levels, defined by morphologic reference points.     

单核细胞趋化蛋白1及其受体在冠心病猝死中的表达

目的：探讨单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）及其受体CC类趋化蛋白受体2（CC chemokine receptor-2,CCR-2）在冠心病猝死（sudden coronary death,SCD）和非SCD冠状动脉粥样硬化斑块中的差异表达。方法应用免疫组织化学方法检测MCP-1和CCR-2在SCD组、动脉粥样硬化组（冠状动脉粥样硬化但非SCD）、对照组（冠状动脉正常）的差异表达。结果 MCP-1在三组间的阳性细胞表达率分别是78%、47%、0%,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;CCR-2在三组间的阳性细胞表达率分别是72%、47%、0%,在SCD组和动脉粥样硬化组、SCD组与对照组表达差异均有统计学意义（P〉0.05）,而在对照组和动脉粥样硬化组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论冠状动脉粥样硬化斑块中的MCP-1及其受体CCR-2的表达增加与SCD密切相关。     

原发性脑干损伤后延髓网状结构bFGF改变的研究

目的研究原发性脑干损伤对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在延髓网状结构内表达的影响。方法采用撞击法造成实验大鼠脑干损伤死亡,用免疫组化SABC法检测延髓网状结构中bFGF的改变。结果生前损伤组延髓网状结构内bFGF阳性细胞数和阳性强度与正常组及死后损伤组比较显著升高,后两者无显著差异。结论原发性脑干损伤导致延髓网状结构内神经细胞bFGF表达增高。     

Expressions of GABA and GABA(A)R-alpha1 in the brain of rats poisoned by tetramine

OBJECTIVE: Expressions of GABA and GABA(A)R-alpha1 in the brain of rats poisoned by Tetramine were analyzed to explore the intoxication mechanism. Methods Sixty rats were randomly divided into control, sham poisoned, high-dose poisoned (1.0 mg/kg tetramine) and low-dose poisoned (0.1 mg/kg) groups. The expressions of GABA and GABA(A)R-alpha1 in the brain of the poisoned rats were detected and analyzed by immunohistochemistry and imaging analyzer. Results The expressions of both GABA and GABA(A)R-alpha1 were diffusely seen in the brains of the control and shame poisoned rat groups with a moderate expression level, whereas the expressions of both GABA and GABA(A)R-alpha1 were decreased in the brains of the high-dose poisoned group. In the low-dose poisoned rat group, the expression of GABA initially decreased and reached its lowest level 6 hours after poisoning, and then started to show an increase and reached the level of control groups at day 3. The expressions level reached its peak at days 5-7 after poisoning and remained above the level of control groups till 10 days after poisoning. Similarly, the expression of GABA(A)R-alpha1 in the brains of the low-dose poisoned group initially decreased and reached its lowest level 6-12 hrs after poisoning, and then started to increase and reached the level of control groups at days 7-10 after poisoning, respectively. Conclusion The expression of both GABA and GABA(A)R-alpha1 decreased in the brains of the high-dose poisoned rat group and these changes of GABA and GABA(A)R-alpha1 expressions may be associated with underlying mechanism of tetramine poisoning.     

大鼠脑震荡后大脑多巴胺D_1受体的动态表达观察

目的探讨大鼠脑震荡后不同时间大脑多巴胺D1受体在不同部位的表达变化。方法用金属单摆打击装置复制大鼠脑震荡模型,将56只大鼠随机分为脑震荡后1、2、4、8、16和24d 6个损伤组和1个正常对照组,每组8只。于大鼠脑震荡后不同时间取内侧隔核(MSN)、左右Broca斜角带垂直支(VDB)、丘脑网状带(RT)脑组织,用免疫组化染色(SP法)观察脑组织不同区域多巴胺受体(D1)表达情况,用图像分析系统进行定量分析。结果各组大鼠脑组织D1受体免疫组化阳性表达变化情况:在MNS区,脑震荡后1d细胞阳性表达开始减弱,到16d细胞阳性表达最弱,16～24d细胞阳性表达开始增强,但在24d仍比对照组的表达弱。在VDB区,脑震荡后1d细胞阳性表达开始减弱,2d细胞阳性表达最弱,脑震荡后2～24d细胞阳性表达开始增强,但在24d仍比对照组的表达弱。在RT区,脑震荡后1d细胞阳性表达开始减弱,4d细胞阳性表达最弱,4～24d细胞阳性表达开始增强,到24d与对照组表达接近。结论大鼠脑震荡后不同时间,脑组织多巴胺D1受体在MSN、VDB、RT不同区域的表达轻微下调,但下调差异无显著性意义。     

大鼠机械性脑干损伤早期延脑网状结构的超微病理研究

目的　探讨脑干损伤早期延脑网状结构的超微病理变化。方法　将实验大鼠分为创伤组和对照组,透射电镜观察大鼠机械性脑干损伤早期（１０ｍｉｎ,０ ．５ｈ,１ｈ ,３ｈ） 延脑网状结构的超微病理变化。结果　脑干损伤１０ｍｉｎ 即可见神经微丝（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ, ＮＦ） 排列紊乱、疏密不均,ＮＦ 臂的缺失,髓鞘层面分离,轴膜内皱,与髓鞘间形成空隙,微血管周围基质密度降低以及线粒体肿胀等超微病变。脑干伤后存活时间延长,上述病变更为显著。本文就上述超微病变的形成机制及病理学意义进行了探讨。结论　脑干机械性损伤能够明显引起延脑网状结构的超微病理学变化,并增加个体快速死亡和免疫组化染色的易感性     

脑干星形细胞胶质原纤维酸性蛋白免疫组化染色的图像分析

目的探讨脑干星形细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色及其图像分析在原发性脑干损伤鉴定中的应用价值。方法26例原发性脑干损伤致死者的脑干样本,分别在其中脑、脑桥及延脑相同部位取组织作GFAP免疫组化染色(LSAB法),并对GFAP阳性物最密集视野做图像分析。21例非颅脑损伤或脑部病变死亡者的脑干作对照样本,所得图像参数测量值进行统计学分析。结果(1)对照组星形细胞的GFAP阳性染色在中脑、脑桥及延脑三个部位分布不等(P<0.05),延脑>中脑>脑桥;损伤组则三个部位无显著性差异(P>0.05);(2)对照组与损伤组相比,GFAP阳性染色细胞的数量在中脑、脑桥及延脑等三个部位中差异均有显著性(P<0.01);(3)死后96h后解剖者,损伤组与对照组有显著差异;(4)伤后30min内死亡者,损伤组与对照组也有显著差异。结论人脑干星形细胞GFAP免疫组化染色的图像分析,对法医学鉴定原发性脑干损伤具有重要参考价值。     

MOR1 receptor mRNA expression in human brains of drug-related fatalities-a real-time PCR quantification

The expression of the human micro-opiate receptor (MOR1) in post mortem human brain tissue was examined using real-time PCR technology. Tissue samples from 11 fatalities due to opiate overdose and five normal subjects with different causes of death were analysed in order to elucidate whether chronic opiate abuse is followed by a regulation of MOR1 expression. In each case nine selected brain regions (thalamus, caudate nucleus, hypothalamus, ventral tegmentum, hippocampus, amygdala, frontal cortex, nucleus accumbens, putamen) were evaluated. The MOR1-mRNA level was determined relative to the housekeeping gene beta2-microglobulin. While in most regions the MOR mRNA levels in the brain of addicts were not different from the control group-with varying levels between 0 and 15% of housekeeping gene level-in the brains of three drug-related fatalities an enormous increase was encountered in the thalamus where the MOR-mRNA level amounted for up to 10,000% of the measured housekeeping gene level. The results obtained by toxicological hair analysis in the group of drug-related fatalities indicate that the enormous thalamic MOR1-expression is primarily found in individuals who died from acute heroin overdose but did not show signs of a substantial chronic administration of the drug. Further studies have to be performed to evaluate if the observed MOR1-mRNA up-regulation in the thalamus in a subpopulation of acute lethal intoxications mirrors a state of functional hypersensitivity associated with the occurrence of death.     

慢性乙醇中毒小鼠脑神经细胞IP3R1表达的变化

目的研究慢性乙醇中毒引起小鼠脑神经细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3R1）表达的变化。方法 40只小鼠随机分为90d、180d组,各组再分为正常对照组、10%、20%、30%乙醇组,每组5只,乙醇组给予相应浓度乙醇饮用至相应时间;取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组化和Western blot方法检测脑皮质神经细胞IP3R1表达的变化;SPSS 13.0软件对实验数据进行单因素方差分析。结果正常IP3R1免疫组化染色物分布于神经细胞胞浆内。90d组随乙醇浓度的增加,IP3R1免疫组化阳性细胞数和阳性细胞率逐步增加,组间比较,差异显著（P〈0.05）;180d组中10%、20%乙醇组阳性细胞数和阳性细胞率逐步增加,组间比较,差异显著（P〈0.05）,而30%乙醇组阳性细胞数和阳性细胞率反而减少,且低于90d组的相同浓度组（P〈0.05）。Western blot与免疫组化检测结果基本一致。结论慢性乙醇中毒可引起小鼠大脑皮质神经细胞IP3R1表达增加,而高浓度（30%）、长时间（180d）乙醇使IP3R1表达降低,可能与神经细胞变性、坏死、数目减少有关。     

PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因在溺死鉴定中的应用

目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死（水中溺毙）、死后入水（空气栓塞致死后入水）、对照组（空气栓塞致死后不做处理）;溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩增硅藻特异的核糖体小亚基（SSU）片段,用琼脂糖凝胶电泳检测、DHPLC检测分析。结果 6份硝酸消化法检测阴性的溺死人体器官组织检材经PCR及琼脂糖凝胶电泳检出5例阳性。生前溺死组肺、肝、肾硅藻检出率分别为100%、90%、85%,死后入水组仅肺检出硅藻（15%）,对照组各组织均为阴性;生前溺死组检出率明显高于死后入水组（P〈0.05）。10份溺死人体器官组织检材采用DHPLC法检出硅藻种类明显多于微波消解-扫描电镜法（P〈0.05）。脏器检出硅藻种类与溺死点水样一致。结论采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,有助于溺死鉴定和溺死地点的推断,具有法医学应用价值。