差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。     

基于过滤技术的强奸案精阴混合斑快速检验初探

<正>目前,强奸案中精阴混合斑的分离检验,基本采用差异裂解法,为确保最终获得精子来源的单一STR分型,则阴道上皮细胞需充分消化裂解(通常56℃不少于6h,而37℃不少于12h),且两种细胞的先后裂解,使得整个检验过程需耗费1-2天[1],不利于快速提供指向犯罪嫌疑人的DNA信息。迄今为止,针对精阴混合斑快速检验的研究,多为差     

DNA检案中混合拭子提取方法的优化

正在强奸案中,阴道拭子作为犯罪证据,其重要性不可替代。通常精斑预实验阳性的阴道拭子检材即为混合斑的拭子,分离检验方法是采用差异裂解法(两步法)先除去精子外的其他细胞DNA,保留精子DNA[1],再通过DNA IQTMSystem提取精子DNA,获得纯精子的DNA图谱。但在实际操作中,混合斑中的阴道上皮细胞和精子DNA未作定量检测,使用该方法提取精子DNA时,往往会出现女性DNA去除不干     

应用免疫磁珠分离混合斑中精子

目的探讨应用免疫磁珠法分离精子-上皮细胞混合液中精子的可行性。方法制备不同比例的精子-上皮细胞混合液各15例,分别应用免疫磁珠法及差异裂解法提取精子,经PCR扩增进行DNA-STR分型,比较两者的差异。结果免疫磁珠可以特异性捕获精子,对精子个数为500～2 000/mL的混合斑STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU200)为93.33%,差异裂解法为46.67%,两种方法存在明显差异(P0.05)。结论免疫磁珠可有效分离精子和混合斑中其他成分,在精子个数低于2 000个/mL检材中优于差异裂解法。     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

免疫磁珠技术和精子抗原研究进展与法医学应用

免疫磁珠技术在生物学领域应用广泛,通过制备精子特异性抗体,并与磁性微球偶联,可达到对精阴混合斑中精子和女性阴道上皮细胞分离。本文简述了免疫磁珠技术的研究进展及磁珠主要制备方法,同时结合精子表面抗原的研究进展,提出磁珠抗体法提取精子DNA的可能性,并展望了磁珠抗体结合技术在法医学应用前景。     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。     

Differex~(TM)系统在混合斑精子DNA分离提取中的应用

叶某,女,7岁。某日放学途中被诱骗奸杀,3日后发现其尸体,且已高度腐败。提取阴道内容物送检。阴道拭子浸出液沉淀经涂片,检见少量精子和阴道上皮细胞。用传统差异裂解法[1]分离提取混合斑精子DNA,扩增分型效果不佳(照片1)。本文作者应用D ifferexTM系统分离提取混合斑精子DNA,取得扩增分型的满意结果。现报道如下。1 D ifferexTM系统分离提取精子DNA1.1主要仪器与试剂D ifferexTM试剂盒(含消化缓冲液、分离液、无核酸酶水)、DNA IQTM纯化系统、PowerPlexTM16试剂盒为美国Promega公司产品;金牌酶、AB I3100遗传分析仪、9700PC…     

尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较

目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。     

强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的比较研究

目的探讨强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的优缺点，为法医工作者选择硅藻检验方案提供理论依据。方法用24只健康清洁级家兔，雌雄不限，制作溺死动物模型。室温放置72h后，分别取其肝、肾、肺3种组织各5g，用强酸消化法和胰蛋白酶消化法进行消化，分别比较两种消化方法的消化时间、消化能力和硅藻检出率。结果强酸消化法的消化时间显著短于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），强酸消化的消化能力强于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），而强酸消化法的硅藻检出率低于胰蛋白酶消化法（P〈0．05）。结论为加快办案效率，可以选择强酸消化法；对于水样硅藻含量低，则选择硅藻检出率相对较高的胰蛋白酶消化法。     

Correlates of deterrence: Problems of theory and method

A central methodological problem in ascertaining the correlates of deterrence is that there is no unambiguous method by which deterred persons can be identified. Assuming that the identification of a legal threat by persons who indicated that they have not committed a crime (the use of marijuana) is evidence of deterrence, this study differentiates deterred from undeterred persons based on a number of demographic variables. The results show that persons who were deterred from marijuana use by legal threats were indistinguishable on the basis of age, sex, race, marital status, and occupation from those who refrained from using marijuana for other reasons.     

地芬诺酯中毒及检验方法研究进展

地芬诺酯为临床常见的止泻药,近年来常因药物用量不当而发生中毒,尤其是在10岁以下儿童人群中中毒发生频率极高。除此之外,地芬诺酯常被吸毒人员作为海洛因的替代品大量使用而引起滥用中毒。本文对地芬诺酯的药理、中毒机制、临床表现和检验方法进展进行了综述,旨在为地芬诺酯中毒患者的快速诊断和抢救提供科学依据。     

视野有效值法和视野评分法评定视野损害的比较和评价

视野有效值法和视野评分法分别是当前国内、外用于评定视野损害的主要方法,本文对这两种方法的主要内容、计算过程进行分析和比较。视野有效值法较便捷,可操作性强,当视野缺损位于周边视野时,视野有效值法适用性较好,但视野缺损累及中心10°视野时,存在较大误差,使用时应结合视力受损程度、其他检查等综合分析。视野评分法有诸多特殊规定,操作较繁琐,但更具科学性、准确性,在法医学鉴定中的应用前景值得期待,其依据的科学理念也值得在制修订相关标准时予以关注和借鉴。     

Internal and external method in the study of law

Legal theory and scholarship are currently characterized by a division between traditional, doctrinal methods and approaches derived from extra-legal disciplines. This paper proposes a different though related distinction between two methods of understanding law and interpreting authoritative legal texts.Internal method reflects the viewpoint of the participant in a legal system and traditional doctrinal study; it is practical and decision-oriented. Limitations on the range of arguments and interpretations employed are accepted in order to render its results serviceable for practical tasks.The purposes of external method are cognitive and theoretical; it is oriented toward a comprehensive philosophical and scientific rationality. Its premises and results are therefore not restricted by received professional opinion or social or institutional restraints, and may reflect the conceptual resources of extra-legal disciplines.The paper discusses the antecedents of these methods, describes the structure of each and relations between them, and suggests that the criterion of internal method is practical effectiveness, that of external method truth or falsity.     

危险品公路运输风险分析方法及应用

本文运用风险分析的方法，对危险品公路运输事故和灾害风险进行定量研究，给出危险品公路运输的社会风险和个人风险，从而对公路运输风险进行评价。以某石化厂1-丁烯公路运输进行实例研究和现场应用，从而为交通运输和化工企业提供公路危险品运输的路线选择及安全管理提供决策依据。     

物证鉴定的技术方法确认和标准操作规程

物证鉴定中使用的技术方法直接影响和决定了物证检验结果的质量,因此对技术方法的管理是物证鉴定实验室质量保证体系的核心因素之一。开展技术方法的开发确认和内部确认并建立方法的标准操作规程,是保证实验室能够正确选择和使用科学可靠的技术方法,并获得一致结果的主要手段。运行高水平质量保证体系的物证鉴定实验室,应该在案件物证检验工作中使用经过实验室内部确认的技术方法,而且重要新技术方法还应在开发确认基础上进行内部确认,根据方法确认结果建立该方法的标准操作规程。