CpG ODN对传染性腔上囊病病毒活疫苗免疫效果的影响

将120只来航系SPF鸡随机分成对照组、注射CpG ODN组、IBDV活疫苗点眼免疫组及IBDV活疫苗 CpG ODN免疫组,每组30只,于7日龄时对试验鸡进行初次免疫,21 日龄时进行加强免疫,28日龄时用IBDV野毒株攻毒。检测不同时间的IBDV特异性抗体效价、血液和脾淋巴细胞的Con A刺激指数(SI)。结果表明,CpG ODN处理后脾细胞的增殖转化能力强于血液淋巴细胞的增殖转化能力;CpG ODN的使用使血清中IBDV特异性抗体产生时间提前7 d,抗体效价升高;与对照组相比,仅用CpG ODN处理就可使1/3的鸡攻毒后迅速产生高效价(约1∶3 000)的特异性抗体,降低了发病率和死亡率,证明CpG ODN能增强IBDV活疫苗的免疫效果。     

CpG序列对副伤寒疫苗免疫小鼠应答反应的影响

研究了CpG序列作为分子免疫增强剂 ,对常规副伤寒疫苗免疫小鼠后 ,小鼠体液和细胞免疫反应的变化情况。试验结果显示 ,CpG序列作为免疫增强剂 ,可以使免疫小鼠的总IgG含量、血清特异性抗体效价、淋巴细胞IL 2的诱生活性和脾淋巴细胞的增殖反应有明显的提高。结果表明 ,CpG序列能显著增强免疫动物对常规疫苗的免疫应答反应水平 ,可以作为提高疫苗免疫效果的有效途径     

IBD细胞苗和鸡胚苗病理组织学比较的研究

本试验通过IBDPBG98鸡胚苗和IBDPBG98F_5CEF细胞苗对1日龄雏鸡在免疫原性、临床安全性、病理致病性等方面进行比较研究,结果表明:两种疫苗对雏鸡法氏囊均有一定的保护力,而以IBDPBG98F_5CEF细胞苗保护法氏囊组织免受强毒破坏的效果优于鸡胚苗。用细胞苗1000EID_(50)的免疫剂量免疫2周,就可达到100％的保护率。两种疫苗对法氏囊组织几乎不形成组织学损害,免疫雏鸡后,只引起法氏囊内反映体液免疫反应的B淋巴细胞系细胞明显的活化增生。     

黄参多糖的提取及其对雏鸡细胞免疫应答的影响

为探讨黄参多糖(SGP)的免疫活性作用,采用微波处理法从黄参中提取制备SGP,并进行红外光谱分析。采用MTT法比较不同作用浓度的SGP对鸡外周血T淋巴细胞体外增殖作用。采用雏鸡外周血T淋巴细胞亚群检测,比较不同作用浓度的SGP对雏鸡细胞免疫的影响。结果显示,在微波处理90min时,SGP得率高达5.85%。红外光谱分析表明,提取物为SGP。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,SGP能够刺激和促进鸡淋巴细胞增殖,并且能协同刀豆素A刺激鸡外周血T淋巴细胞增殖,这种刺激作用都具有一定的剂量效应关系,且以SGP终作用浓度在250mg/L时效果最佳。研究进一步表明,SGP能够显著提高雏鸡外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值,增强雏鸡细胞免疫能力、调节T细胞亚群分化,以2mg/kg SGP剂量组效果最佳。当SGP与新城疫病毒LaSota疫苗联合使用时,具有明显的免疫协同作用,也能提高雏鸡外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值。结论:SGP有免疫增强作用,并能促进机体细胞免疫应答。     

重组鸡痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性及在鸡体内的表达

为了评价重组禽痘病毒rFPV-VP3-F的遗传稳定性,将rFPV-VP3-F在鸡胚成纤维细胞(CEF)连续培养20代.对第5、10、15和20代病毒的F基因进行扩增及序列分析,未发现F基因发生氨基酸改变;通过间接免疫荧光方法检测各个代次rFPV-VP3-F中F基因特异表达的情况;将rFPV-VP3-F和禽痘病毒FPV017分别接种于35日龄商品鸡,在免疫后第7、14、21、28、35 d采集各组血清,检测中和抗体效价.结果显示,F基因在重组禽痘病毒中可以稳定遗传,可在CEF中表达相应蛋白,可刺激鸡产生相应的抗体.     

阳离子脂质体包裹CpG对猪瘟猪肺疫猪丹毒三联疫苗免疫效应的影响

对 3组分别注射猪瘟猪肺疫猪丹毒三联疫苗 (简称三联疫苗 )、CpG +三联疫苗、阳离子脂质体包裹CpG +三联疫苗的小鼠细胞和体液免疫反应进行了比较分析。结果显示 ,阳离子脂质体包裹CpG +三联疫苗免疫小鼠脾细胞增殖反应明显增强 ,白细胞介素 2 (IL 2 )诱生活性和免疫细胞数量、血液IgG含量较仅注射三联疫苗的小鼠显著增加。说明阳离子脂质体包裹CpG能增强小鼠对三联疫苗的体液和细胞免疫应答反应 ,使疫苗的免疫原性增强     

H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)株的NA基因及LacZ报告基因克隆到禽痘病毒载体pSY681中,构建重组转移载体pSY(NA+LacZ),将其转染鸡胚成纤维细胞,经蓝白斑筛选,纯化表达NA基因的重组禽痘病毒rFPV-NA,用其免疫SPF鸡,检测该重组禽痘病毒的免疫原性。结果显示,该重组禽痘病毒能够在体外培养细胞内表达具有生物学活性的NA蛋白,表达产物的分子质量约为55 ku;用该重组禽痘病毒免疫SPF鸡后,能够使免疫鸡获得对H5N1和H7N1两种亚型HPAIV攻击的部分保护。表明,重组禽痘病毒rFPV-NA具有良好的免疫原性。     

甘草酸二钾体外抗鸡传染性法氏囊炎病毒的作用机制

利用鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养系统,通过观察细胞病变(CPE)和用MTT法测定细胞活力这两种方法来评价甘草酸二钾体外抑制鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)对CEF的感染作用,并通过甘草酸二钾对病毒复制、吸附的阻断作用测定试验及直接灭活病毒测定试验,初步探讨了甘草酸二钾的抗病毒机制。结果显示,甘草酸二钾在安全浓度范围内对病毒感染细胞的抑制率达到70%以上,EC50为663.2±268.4μg/mL,SI>4.52;在阻断病毒复制、直接灭活病毒的试验中,甘草酸二钾显示了较强的抗病毒能力,但在阻断病毒吸附试验中却没有作用,推测其抗病毒机制可能是干扰了病毒的复制和直接使病毒灭活。提示,甘草酸二钾能够作为预防及治疗传染性法氏囊炎的药物或先导化合物。     

RU_(486)对地塞米松诱导鸡淋巴细胞免疫抑制的逆转效应

给２０日龄雏鸡注射不同剂量糖皮质激素（ＧＣ）制剂———地塞米松（Ｄｅｘ）,结果不同剂量的Ｄｅｘ对鸡淋巴细胞免疫功能都产生明显的抑制效应;体外试验进一步证明Ｄｅｘ能抑制鸡脾淋巴细胞的刺激增殖活性,用１０－７ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＲＵ４８６（ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎ）阻断鸡淋巴细胞糖皮质激素受体（ＧＲ）则可逆转这种抑制效应。试验证明２５ｍｇ／ｋｇ体重剂量的ＲＵ４８６在鸡体内有拮抗Ｄｅｘ抑制鸡体免疫功能的作用,从而证实ＧＣ诱导鸡淋巴细胞免疫功能降低是由淋巴细胞的ＧＲ介导的。所以,部分阻断ＧＲ可防止鸡体因ＧＣ升高所导致的免疫力下降,这对提高鸡的疫苗免疫效果及应激状态下抗病力有理论指导意义。     

惠阳胡须鸡Ⅱ型干扰素基因在毕赤酵母中的表达及其产物活性分析

为了确定惠阳胡须鸡IFN-γ基因(chIFN-γ2)在毕赤酵母中表达的重组蛋白的抗病毒活性和蛋白的二级结构,将pGEM-T-chIFN-γ2重组质粒中的chIFN-γ2基因克隆到表达质粒pPICZαB上,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后的序列同源性分析,证明目的基因没有发生缺失、突变,并且插入方向正确。将重组质粒电转化到毕赤酵母感受态细胞GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达。重组IFN-γ的分子质量约为33 ku,表达量达0.604 mg/mL,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上抑制VSV的抗病毒活性为3.2×104U/mg。圆二色性分析表明,IFN-γ酵母重组蛋白属于典型的α螺旋蛋白,二级结构含量为:α螺旋55.1%,β折叠8.3%,转角13.9%,无规卷曲22.8%。采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-γ,并首次证明鸡IFN-γ重组蛋白属于典型的α型蛋白。     

抗禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

利用提纯的禽脑脊髓炎病毒(AEV)VR株CEF适应毒制备抗原,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术以间接ELISA筛选获得1株分泌抗AEV(VR)单克隆抗体的杂交瘤细胞.对制备的细胞上清及腹水进行单克隆抗体特性鉴定,经染色体计数、免疫球蛋白类及亚类测定、特异性试验、稳定性试验、SDS-PAGE电泳,表明该杂交瘤细胞染色体数目介于90-110条,该单克隆抗体亚类为IgG2a,分子质量为142 ku,ELISA测定细胞上清效价为11×104,腹水效价为11×106,与其它病原无交叉反应,抗体分泌稳定.     

不同家禽细胞Wnt/β-catenin信号通路基础活化状态的比较

了解家禽细胞静息状态下Wnt/β-catenin信号通路的基础活化状态,为研究家禽Wnt信号通路提供细胞模型。利用激光共聚焦显微镜、绝对荧光定量PCR和Western-blot方法检测鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞(CEK)、鸡成纤维永生化细胞系(DF-1)和鸡肝癌细胞系(LMH)中β-catenin蛋白的定位情况以及表达情况。同时使用双荧光素酶报告基因检测不同细胞加入激活剂后Wnt信号通路的活化情况。结果显示,CEF细胞中β-catenin基因和蛋白表达水平较低,主要位于细胞膜上,且对信号通路激活剂反应最为明显。DF-1细胞与LMH细胞中β-catenin的m RNA水平与蛋白水平均高于正常家禽细胞。结果表明,CEF细胞Wnt/β-catenin信号通路基础活化状态较低,是研究家禽Wnt相关信号通路的良好细胞模型。     

IBD疫苗抗原量对鸡体液免疫应答的影响

将含不同抗原量的IBD油乳剂灭活疫苗免疫17日龄雏鸡,结果IBD-ND二联苗和IBD浓缩苗免疫组鸡的抗体水平上升较快,免疫11d时免疫组抗体水平显著高于免疫对照组(P＜0.01);3个免疫组鸡的攻毒保护率基本一致,但IBD原苗组鸡的腔上囊损伤最为严重.试验结果表明适当增加IBD抗原量能刺激鸡早期体液免疫应答,提高特异性免疫力.     

A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析

为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70～81位、118～140位,VP1 G-H环131～157位、C末端188～212位,A/WH/CHA/09 VP1 43～48位、VP3 55～72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。     

鸡IFN-γ基因在大肠杆菌中的表达及表达产物对鸡的免疫保护

将鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)成熟肽基因编码区序列亚克隆到原核表达载体Pqe30上,并转化大肠杆菌M15感受态细胞.经诱导后,以镍金属亲和层析法对表达蛋白进行纯化,采用SDS-PAGE与Western-b1ot对表达蛋白进行鉴定.结果显示,经诱导的转化子在体外获得了高效表达,表达蛋白约占菌体蛋白的23%.0.5 ng/Ml以上的重组ChIFN-γ(rChIFN-γ)能显著抑制鸡新城疫病毒对细胞的侵染与伤害;但是,细胞先感染病毒后,再以不同剂量rChIFN-γ作用于细胞,则不具有对细胞的保护作用,说明rChIFN-γ对细胞的保护是通过调节机体免疫能力、干扰病毒入侵实现的.1 ng/ML的rChIFN-γ可显著提高新城疫疫苗的免疫效价,具有较强的免疫协同作用.表明,原核表达的rChIFN-γ具有显著的生物学活性.     

马立克病病毒单克隆抗体的制备

以纯化的经鸡胚成纤维细胞(CEF)培养的马立克病病毒(MDV)超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原,制备特异性识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次,离心取上清,选用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,浓缩液通过Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶作为层析介质分离纯化MDV病毒粒子,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR分析不同收集峰MDV病毒含量,并经过透射电子显微镜观察到直径约100 nm的MDV病毒粒子。进一步用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,制备峰尖病毒浓缩液,以此免疫雌性BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和Western-blot筛选,最终获得107个阳性克隆,由其中1株强阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株10B2制备的单克隆抗体腹水IPMA效价为1∶2.56×10~6。本研究结果为后续MDV单克隆抗体的筛选、鉴定及诊断试剂研发奠定了重要基础。     

宿主对绦虫蚴感染免疫应答的研究进展

从绦虫蚴病的细胞免疫及细胞因子、体液免疫、补体介导的免疫应答、绦虫蚴分泌物对宿主反应的抑制几方面阐述了宿主对绦虫蚴感染免疫应答的研究进展。旨在探讨绦虫蚴感染宿主后不同发育阶段细胞免疫和体液免疫的特点、绦虫蚴产生的活性分子MF对宿主免疫应答的调节以及宿主产生的NO和补体对感染绦虫蚴的抑制和杀灭作用。     

病毒调控宿主免疫反应的研究进展

病毒感染宿主后,针对宿主免疫反应的特点和薄弱环节,形成了多种方式拮抗宿主的免疫防御。论述了病毒抑制体液免疫及其抑制或调节细胞因子活性的过程和方式,旨在从分子水平上阐明病毒逃避免疫应答的机理。     

表达MDV-gB基因的重组鸡痘病毒免疫效果观察

将马立克氏病病毒 (MDV ) gB基因插入鸡痘病毒中 ,构建了含有MDV gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV ) ,用rFPV、火鸡疱疹病毒 (HVT)冻干疫苗、rFPV HVT二联疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,8日龄攻毒后观察免疫保护效果。结果表明 ,3种疫苗均诱导了免疫应答 ,免疫保护率分别为 69%、69%和 85 %。该重组病毒疫苗的免疫效果与HVT疫苗的免疫效果相当 ,二者联用具有免疫协同作用。     

鹅Ⅰ型禽副黏病毒F基因重组质粒的构建及其DNA免疫

通过RT PCR扩增出鹅Ⅰ型禽副黏病毒GPMV/QY97 1株F蛋白基因的cDNA ,并将F基因cDNA克隆到含CMV启动子的pCI载体上 ,构建这一基因的真核表达质粒pC GPMVF ,以此质粒肌肉注射 3周龄非免疫鸡 ,并分别于免疫后第 2、4、6周通过ELISA方法检测抗体水平。结果证明 ,用重组质粒pC GPMVF免疫鸡 ,能刺激机体产生抗Ⅰ型禽副黏病毒的特异性抗体和免疫应答