双胞胎鉴定10例

双胞胎分为两类：同卵双生和异卵双生。同卵双生子起源于同一个受精卵，受精后，卵裂的产物没有立刻分化，结果发育成两个正常的个体，因此两个体具有完全相同的基因组。异卵双生子是由两个卵子同时或几乎同时发生受精形成的双生子，两个体之间的遗传关系与同胞兄弟姐妹之间的关系相同。双胞胎的发生率为１～３％［１、２］，性别相同约占２／３，其中同性别双胞胎约３／４为同卵双生犤３犦，性别不相同全部为异卵双生。在性别相同的双胞胎中区别是否同卵双生，过去通常检测血型、酶型及HLA，目前常规采用PCR－STR分型技术，可以获得理…     

1对同卵双生新生儿DNA甲基化谱差异分析

目的 探索1对同卵双生新生儿之间DNA甲基化谱的差异.方法 应用甲基化免疫共沉淀结合高通量测序法对1对同卵双生新生儿的DNA甲基化谱进行检测,分析基因组DNA甲基化特点及其之间的差异,筛选适用于法医学分析的甲基化位点.结果 两样本各获得7300万原始测序序列(raw reads)数据,与人类基因组参考序列比对,各得到4800万和5000万唯一比对reads,其中大部分分布在重复区域,且在Alu序列分布最为广泛.两样本DNA甲基化富集区域(peak)各检测到257 362条和197 272条,基因组覆盖率分别为6.53％和5.29％,分布在基因组不同区域,以中间内含子区含量最多.分析两样本甲基化差异区域得到2205条差异的甲基化序列,其中595条位于基因区域,1610条位于基因间区,从中筛选出113条序列,用于进一步深入研究其法医学应用价值.结论 本研究初步证实了DNA甲基化用于同卵双生子鉴定的可行性,为筛选同卵双生子DNA甲基化差异位点提供了基础数据.     

DNA甲基化标记检测方法及其法医学应用

DNA甲基化是重要的表观遗传修饰,主要在转录水平上调控基因的表达。DNA甲基化在人类基因组中含量丰富、分布广泛;甲基化谱有时空特异性、细胞特异性和亲源特异性。新近研究表明DNA甲基化在组织体液鉴定、同卵双生子鉴定、年龄推断、性别推断和亲子鉴定等方面具有一定的应用价值,有望成为一种新的法医学遗传标记。本文就DNA甲基化检测方法的研究进展及法医学应用进行综述,以期为法医学实践提供参考。     

表观遗传学及其在同卵双生子研究中的新进展

表观遗传学是指不改变DNA序列的可遗传的基因表达改变.是多细胞真核生物的重要生物学现象.DNA甲基化、基因组印记、组蛋白乙酰化、组蛋白甲基化、染色质重塑、假基因和小分子RNA等是表观遗传学的主要研究内容.同卵双生子(monozygotic twins,MZ)是由一个受精卵分裂发育而成的双胞胎,二者具有完全相同的基因组DNA序列.从经典遗传学的角度,使用短串联重复序列(short tandem repeat,sTR)和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)等遗传标记均不能对其进行有效的个体甄别.因此,寻找新的遗传标记显得尤为重要,最新表观遗传学领域的研究成果表明.MZ个体间DNA甲基化差异显著,这为甄别MZ个体提供了新的策略.本文对表观遗传学的概念、研究内容及表观遗传学在MZ鉴别中的应用前景进行了综述.     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅰ)

应用 MYO DNA 探针对中国人进行了 DNA 遗传指纹图检验。从两个家系16人及100个无关个体中取肘静脉血提取 DNA,用限制性内切酶 HinfⅠ或 HaeⅢ水解,1%琼脂糖凝胶电泳分离,经 Southern印迹转移,MYO DNA 探针杂交,获得了清晰可辨的 DNA 指纹图谱。结果每个个体在3.0Kb 以上均能检出10条以上杂交区带,个体间的相关概率<4×10~(-9),由杂交区带构成的图谱是个体特异的,杂交区带遵循孟德尔的显性遗传方式由亲代向子代遗传;具有 DNA Fingerprints 的特点。对两起亲子鉴定的案例进行指纹图检验,孩子所存在的杂交区带,除来自母亲外,其余可在嫌疑父亲带中找到,肯定了孩子与嫌疑人的父子关系。MYO DNA 探针在亲子鉴定与个人识别的法医学鉴定中有着重要的实用价值。     

PCR-RFLP法分析北方汉族人群HLA-B基因多态性

目的建立以PCR-RFLP法分析HLA-B基因多态性的方法,并对105名北方汉族人群酶切片段类型、频率进行调查,为其法医学应用奠定基础。方法酚/氯仿抽提法抽提样本DNA;PCR扩增HLA-B基因的外显子2,3;NlaIII酶切PCR产物;聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术检测酶切结果;DNA测序确认酶切位点。结果HLA-B特异性扩增片段长度为943bp,以NlaIII酶进行酶切时在北方汉族人群中获得了14条片段,20种谱带类型,观察到了6个酶切位点。结论仅应用一种内切酶对HLA-B基因进行PCR-RFLP分析即可获得多条片段,多态信息含量大大提高,该法可以应用于法医学亲子鉴定和个人识别等。     

DNA甲基化在法医DNA分析中的应用

表观遗传学在生命的发生、发展过程中起着十分重要的作用。DNA甲基化作为表观遗传的一个重要方面,不仅参与多种基因的表达调控,与机体的发育、肿瘤发生等密切相关,而且具有可遗传性、相对稳定性、亲缘特异性、基因组中含量丰富等特点,已证实适用于法医DNA分析。本文对近年来DNA甲基化在印迹基因、同卵双生子鉴定、年龄、性别推断方面的研究与应用进行回顾与综述,以期为在法医学及相关领域中应用提供参考。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

2例亲权鉴定案中的嵌合体STR谱分析

先天性基因嵌合体由遗传获得，是胚胎早期两个不同受精卵相互混合或血管交叉吻合继而发育成的一个包含两套（种）不同细胞系的个体。分为血型嵌合体（twin chimeras）和全身器官组织嵌合体（whole body chimerasl两种。本文通过两例亲权鉴定中发现的男性先天性嵌合体及其家族成员常染色体、性染色体的STR谱遗传分析，探讨先天性基因嵌合体的类型、发生、基因嵌合现象在不同组织中的表现及其作为证据可能在法庭科学调查中存在的风险。分析结果表明，两例男性Y—STR单倍型显示正常，分别与其男性家族成员Y—STR单倍型一致。但其在常染色体和X染色体上的STR基因表现嵌合现象，分别是在胚胎发育早期由男性-女性、男性-男性的异卵双生子发生融合并发育而成的的全身器官组织嵌合体。嵌合体上不同来源组织的STR等位基因强度显示不均衡状态。     

同卵双生子外周血DNA甲基化谱的差异

目的通过比较不同个体外周血DNA甲基化谱的差异,评估DNA甲基化在同卵双生子个体甄别中的应用价值。方法在知情同意基础上获得22对同卵双生子外周血样。抽提基因组DNA后进行重亚硫酸盐转化．采用Illuraina公司的人27k甲基化微珠芯片检测基因组27578个CpG位点的甲基化程度（启值）。依据常染色体CpG位点的序值,采用欧氏距离计算方法计算同卵双生子间以及同性男ll的无关个体间的表观遗传距离。比较同卵双生子对与无关个体对两组不同人群间的表观遗传距离差异。结果同卵双生子对人群以及无关个体对人群中的男性个体对与女性个体对的表观遗传距离差异均无统计学意义（P值分别为0．0695和0．4825）。同卵双生子对的表观遗传距离显著低于无关个体对人群（中位数：6．02νs7．20,P=0．0002）．但两组人群的表观遗传距离均显著大于4．00（P〈0．0001）。结论同卵双生子间的外周血DNA甲基化谱差异显著．DNA甲基化是进行同卵双生子个体甄别的有效生物学标记。     

用α-珠旦白-3’HVR探针研究DNA指纹

用α-珠蛋白-3’HVR探针,经Southern印迹法,对100名不相关个体及4个家系的32名相关个体的DNA指纹进行了检测,所产生的DNA图谱具有高度的个体特异性,在被测的所有个体中无一相同。经统计学计算表明,任意两个个体DNA指纹图重合率为10~(-11)。家系分析毒明,DNA片段严格按照孟德尔方式遗传。该探针的应用,将在法医学亲子鉴定和个人同一认定中发挥重要的作用。     

复合扩增9个STR位点在亲子鉴定中的应用评估

在法医学亲子鉴定中应用复合扩增及四色荧光自动分析技术检测 Profiler plusTM9个 STR位点,一次性获得的信息量大,累计非父排除率达 0.9999。应用于 268例亲子鉴定的结果表明, 9个具有高度多态性 STR基因座的联合检测,能使三联体亲子鉴定的排除结论明确无误。对不排除案例,其 RCP值均可达国际认定标准。对二联体亲子鉴定一般需增加 CofilerTM试剂盒 4个 STR位点检测。     

基因检测技术与基因隐私权法律保护

当前,基因检测引发的相关法律和道德问题备受争议。基因隐私权有别于一般隐私权,其有特定的内容、性质及特征,在犯罪DNA库建立、亲子鉴定、雇佣及保险过程中进行基因检测应严格遵循知情同意、知情选择及信息安全等原则,此外也要兼顾公众知情权。应当建立符合中国国情和技术发展的保护机制,以实现合理使用遗传信息与保护基因隐私权的利益平衡。     

MicroRNA分析技术在同卵双生子甄别中的可行性分析

同卵双生子具有相同的基因组DNA序列,因而无法使用常规的DNA分型方法如短串联重复序列即STR分析对其作鉴别区分。故破获涉及同卵双生子的案件有非常大的挑战性,因此在法医物证学领域迫切需要新的技术方法来应对并解决这一难题。随着表观遗传学的发展,转录组学成为法医学研究的新切入点。MicroRNA(miRNA)作为一类内源性的非编码小RNA分子,在机体中参与调节多种生理学过程,是转录组学研究的重要对象。研究表明,miRNA具有高保守性、分子量小、表达时序性及组织特异性强等特点,表现出法医物证应用方面的巨大潜力。本文综合分析了miRNA检测技术在同卵双生子甄别中的应用可行性,并综述了近年来miRNA在同卵双生子甄别上的研究进展。     

印记基因5个SNP分型及亲代来源的检测

目的 采用复合PCR-Snapshot联合甲基化敏感酶切技术,检测印记基因中5个SNP的甲基化状态、印记亲代来源及分型.方法 选择15例亲子鉴定已证实为亲生关系的家系样本,采用单碱基延伸复合检测技术,检测家系样本IGF2AS rs1003483、SNURF rs220028、SNURF rs4906939、DLGAP2 rs6558478、SIM2 rs737380等5个SNP分型,同时选用核酸内切酶(McrBC)和甲基化敏感的限制酶(msRE) HhaⅠ、HpaⅡ消化子代DNA,验证印记基因的亲代来源.结果 经用本文方法检测,证实rs1003483为父源印记;rs220028、rs4906939为母源印记;rs6558478及rs737380未在差异甲基化区,不能确定其印记亲代来源.结论 复合PCR-Snapshot联合甲基化敏感酶切技术简单、高效,在检测多个SNP分型的同时可确定亲代来源,可在相关研究和实践中选用.     

DNA甲基化检测方法及其法医学应用研究进展

DNA甲基化是表观遗传标记的重要组成部分,参与基因表达的调控,在生物发育、衰老以及肿瘤学等领域受到广泛关注。由于具有相对稳定性、可遗传、含量丰富、随龄变化等特点,在法医学领域,DNA甲基化可以作为DNA序列相关经典遗传标记的有效补充,用于年龄推断、组织体液来源检测、同卵双生子的鉴定等。DNA甲基化的检测方法主要有基于甲基化敏感限制性内切酶、重亚硫酸盐转化以及甲基化CpG结合蛋白等原理而建立的一系列方法,近年研究表明,第三代测序技术也可用于DNA甲基化检测。本文就DNA甲基化检测方法及在法医学领域的应用研究进行回顾与综述,以期为法医学实践提供参考。     

PCR-RFLP分析线粒体DNA细胞色素b基因用于法医学种属鉴定

目的建立一种PCR-RFLP分析线粒体DNAcyt b基因用于法医学种属鉴定的方法。方法采用一对通用引物扩增人及15种常见动物的线粒体DNAcyt b基因,扩增产物经内切酶Alu I酶切,分析不同动物DNA扩增产物的有无以及酶切前后的变化。结果所检动物中有9种DNA有扩增产物,经内切酶Alu I酶切后,除鳝鱼外都能与人类DNA相区别。结论PCR-RFLP分析线粒体DNAcyt b基因方法简单,结果可靠,是一种较好的法医学种属鉴定方法。     

多聚酶链反应(PCR)在法医生物学检材鉴定中的应用

法医物证学的鉴定客体主要是生物学检材，其形式是多种多样的：如在各种载体k的血痕，精液与阴道液的混合斑，毛发，骨组织，被害人指甲缝中残留的组织成份等．对这些检材进行检验的中要目的就是根据检验结果确定该生物学检材是谁所留．以往所采用的检验方法主要包括红细胞血型和蛋白质遗传标记分型等检测方法．现在我们可以在DNA水’【‘对有关生物学检材进行遗传多态性的检验，因为每一个个体（除非同卵双生）从遗传学上来看都是独一无二的，在DNA水平对生物学检材进行遗传标记的分型检测，可望达到接近个体绝对认定的结果．目前有两种…     

用X-Y同源引物扩增鉴定人血痕性别的研究及应用

本文根据牙釉蛋白(Amelogenin)基因在x染色体第一内含子有6bp缺失的特性,用一对x-y同源引物.扩增x-y染色体特性DNA片段分别为106及112bp,并用PAGE电泳银染显带的方法检测扩增产物.本方法灵敏度高,实用性强.可对2mm~2血痕检材提取的DNA液1/10作出性别判定.对现场提取的生物检材.特别是微量、腐败、陈旧检材,均能较好的作出性别鉴定.室温放置16年的血痕也可检验.实际检案显示本方法简便、有效、无毒,易于推广.