胶乳凝集试验及其在精斑检验中的应用

<正> 精斑检验在鉴定法医学性犯罪案件中有很重要的作用,精斑确证试验的方法主要有:形态学方法、化学方法、生物化学方法及免疫学方法。这些方法各有其优点和一定的局限性,目前仍较多地采用精子检出法和抗人精液血清琼脂双扩,而输精管结扎术者及精子缺乏症者其精斑中无精子,抗人精液血清特异性不够好便难以检出。近几年来用特异性抗-P30血清作     

双面胶带法快速检出精子

在性犯罪案件中,确认精斑存在与否非常关键,而检出精子是认定精斑存在最简便、最可靠的方法,并且不需要特殊的试剂和仪器,同时也为案件以后进行DNA检验打下基础,适用于各基层实验室.作者在工作实践中,总结了一种简单实用的精子快速检出方法-双面胶带法,现介绍如下.     

混合斑中酸性磷酸酶及精子检出时限的研究

目的 研究探讨性生活后活体阴道内混合斑中酸性磷酸酶（ ACP）及精子的检出时限。方法 采用取材、检验三盲法对 600例阴道拭子进行 ACP及精子的常规检验。结果 ACP最长检出时限 255h,平均检出时限 52h。精子最长检出时限 132h,精子平均检出时限 29h。 ACP检出例中阳性程度在（＋＋）以上占 41.3％,精子检出例中阳性程度为每个视野 6～ 10个占 34.3％。 结论 应用混合斑中酸性磷酸酶及精子的检出时限 ,能为侦审性犯罪案件的法医学鉴定提供客观依据。     

碎浆法检验硅藻的应用

目的探讨一种硅藻检验新技术。方法取材5g,用碎浆法纯机械破机,离心后涂片、镜检。结果除个别羽纹纲硅藻外大部分硅藻纹理清晰、容易辨认,还能灵敏地检出有机硅藻。结论碎浆法检验硅藻技术操作简单、成本低廉、检出率高,对身体和环境几乎无损害。     

精液混合斑检验方法的应用

目前精斑-混合斑的检验方法很多,本文重点介绍其选择、综合检验方法,此法可相互印证,起到复核作用,结果可靠,使用0.5cm~2检材检验可取得理想结果。 1.现场提取性犯罪检材,涂片镜检出 精子,可直接用解离法或配合中和法测其血型。 2.检材未直接检出精子,可参考表中方法制定检验方案。     

免疫酶斑点法同步检测人精液中P30及ABH物质的研究及其应用

本文用免疫酶斑点法同步检测人精液中前列腺特异性抗原P30及ABO血型,并与常规的精子检出法和中和法进行比较。结果表明用免疫酶斑点法同步检测人精液申特异蛋白P30和ABO血型,可以替代常规的精子检出法和中和法在实际检案中应用。     

DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

精子富集柱分离技术的研究

目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。     

应用免疫磁珠分离混合斑中精子

目的探讨应用免疫磁珠法分离精子-上皮细胞混合液中精子的可行性。方法制备不同比例的精子-上皮细胞混合液各15例,分别应用免疫磁珠法及差异裂解法提取精子,经PCR扩增进行DNA-STR分型,比较两者的差异。结果免疫磁珠可以特异性捕获精子,对精子个数为500～2 000/mL的混合斑STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU200)为93.33%,差异裂解法为46.67%,两种方法存在明显差异(P0.05)。结论免疫磁珠可有效分离精子和混合斑中其他成分,在精子个数低于2 000个/mL检材中优于差异裂解法。     

“相纸转印YH染料擦显法”的正确利用和改进

在现场勘查时，最多见的就是灰尘加层或减层痕迹。对于灰尘痕迹一般采取的提取方法有照相法、透明胶带贴取法、静电吸附法、背胶纸贴取法和相纸转印法等技术。上述几种灰尘痕迹提取方法当中，前4种方法操作简单，但是对灰尘痕迹的灰尘量要求较多，提取后的反差小。相纸转印法虽然操作程序比较复杂，转印贴取技术要求较高，但是对痕迹的灰尘量要求不多，显现后痕迹细节特征反映非常好，排除背景干扰。     

硅珠法提取DNA在强奸案中的应

通常情况下进行混合斑中精子DNA的提取采用酚 -氯仿法及Chelex -100法,但仍存在一些缺点.本实验室采用了一种新的方法进行精子DNA的提取,取得了较好的效果.介绍如下:     

尿中甲基安非他明二硝基苯甲酰衍生化GC-ECD分析

<正>血、尿中检验甲基安非他明(MA)的方法较多,常用者有GC-NPD、GC／MS、HPLC法等,本文建立了尿中MA的3,5-二硝基苯甲酰氯衍生化GC／ECD方法,其操作简单,具有较高灵敏度,完全可满足检案要求。     

GC/MS衍生化测定精浆中游离支链氨基酸和果糖

目的 建立人精浆中支链氨基酸和果糖的气相质谱衍生化分析方法.方法 精液样本液化离心后,按精子活率的临床标准分为正常组和非正常组,经TMS微波衍生化,GC/MS分析两组支链氨基酸、果糖衍生物含量差异.结果 正常组与非正常组的缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸在相对含量上均有一定差异.正常组3种氨基酸相对含量高于非正常组.果糖分析观察到同样的特征,正常组相对含量高于非正常组.结论 精子活率低的精浆样本仍可检出支链氨基酸和果糖,其差异有助于无精子、少精子精斑的法医学鉴别.     

应用Differex~(TM)法提取混合斑中精子DNA

对混合斑中精子的检验,采用传统的Chelex-100两步消化法存在消化时间长、离心洗涤次数不易控制等缺点,一旦操作不当,就会因此而引起DNA混合、损失,导致PCR反应失败。本文应用D ifferexTM系统法,解决了部分混合斑检材的精子DNA提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的效果。1材料与方法1.1案件检材所用检材系案件鉴定中含有精子的现场提取床单上的混合斑、被害人的短裤、擦拭用的报纸、被害人的阴道及口腔拭子,以及在室温下存放约1年的阴道拭子。1.2 DNA提取方法1.2.1 Chelex-100两步消化法[1]取适量检材剪碎,加入适量TNE,37℃水浴…     

超声提取法在固体毒物检材前处理中的作用

针对实际办案中检材中毒物含量很低时不易检验的问题进行了研究,探索出一种固体检材前处理的超声提取法,能够很好地解决这一问题。本方法具有操作简单,检材用量小,提取效果好、省时省费用的优点。     

精斑检验干扰因素的研究

目的研究精斑检验中预试验与确证试验结果的关系,以及取材时间、生活习惯对确证检验结果的干扰。方法取376例阴道拭子,用酸性磷酸酶(ACP)染色法、斑点ELISA法和抗人精PSA金标试纸法检测检测精斑。结果ACP阴性时,可检出P30、精子,性生活后精斑确证检验大部分阳性检出分布在48小时以内样本中,结果经X2检验,P<0.01,差异性显著,而不同的生活习惯对P30检测具有显著性差异。结论研究结果对精斑的检验以及检材的提取具有推广应用和指导性意义。     

用特异兔抗人精蛋白抗体间接ELISA法检测人精斑

本文报告利用抗人精血清进一步精制而得的特异兔抗人精蛋白抗体进行间接ELISA试验检测人精斑的方法。经用61例各种常见体液斑检材及多人不同浓度的精液、唾液、乳汁、血液等体液稀释液进行测试,结果正确检出精斑的准确率达100％。对混合多人精液稀释液的最高检出稀释度为1/10000,非精斑检材均不出现阳性反应。该法的特异性完全适合精斑确证检验鉴定的需要,其灵敏度明显高于传统的精斑确证检验方法。本法操作简单,无需特殊仪器设备,使用的抗体来源方便,便于应用。     

双差异分离法对混合斑快速检验的初探

目的建立强奸案中混合斑的分离检验新方法,并评估其应用价值。方法采用双差异分离法对人工制备的3个不同浓度的模拟混合斑样本及相应滤膜进行分离提取,对所得DNA进行定量分析和STR分型检验。结果不同浓度的3个样本经孔径为10μm尼龙网格膜两次离心过膜后精子细胞损耗率均小于3%,同时3个样本沉淀均检出完整单一的男性STR分型。结论该双差异分离法所用滤膜对精子细胞DNA的损耗极少并且具有稳定性;该方法用于精阴混合斑的分离检验,具有高分离效率,装置简单,操作便捷,成本低廉等优势,为性侵案中混合斑的分离检验提供了一种新思路。