匹拉米洞与联苯胺在血痕预实验中的灵敏性及DNA损伤检测研究

目的血液痕迹是暴力犯罪现场最易遗留的一类痕迹,是法医学检验中最常见和最重要的一类物证。血痕预实验是利用化学检测的方法从现场大量分布的可疑斑迹中初步筛选可能是血痕的重要方法,是法医学鉴定的重要前提。本文比较匹拉米洞法和联苯胺法的灵敏度、对DNA-STR检验的影响以及对细胞核的损伤情况,以探索匹拉米洞法应用于血痕预实验的可行性。方法对新鲜全血进行梯度稀释,观察比较检测灵敏度;利用Chelex-100提取匹拉米洞、联苯胺等试剂预检后的血痕样本中的DNA,应用PCR-STR技术及荧光检测技术检测样本的STR分型,观察STR分型结果,比较两种方法对后续DNA-STR检验的影响;在细胞培养液中加入联苯胺、匹拉米洞,应用彗星电泳技术评价细胞核DNA的损伤。结果匹拉米洞法可检测的最低血红蛋白浓度为25μg/m L,灵敏度低于联苯胺法(5μg/m L);DNA-STR有效分型率为96.67%,远高于联苯胺法(18.09%);联苯胺组彗星尾长为52.40±9.21、尾距为43.29±4.85、尾部DNA含量为16.25±2.35,显著高于匹拉米洞组。结论匹拉米洞法可用于血痕预实验,对血痕中DNA的损伤、对DNA-STR分型的影响均低于联苯胺法,可替代联苯胺作为新的法医学血痕预实验方法。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

血手印显现的实验研究

目的 提出了采用荧光显现试剂显现血手印的新方法。方法 在比较使用联苯胺及其衍生物显现血手印的同时,实验了通过强氧化剂破坏血红素、沉淀珠蛋白,采用激活血痕、蛋白染色的方法,使血手印清晰显出。结果 显现效果不受客体表面颜色的影响,不受血手印遗留时间的影响。结论 适用客体范围广,灵敏度高。     

介绍一种联苯胺的安全代用品——四甲基联苯胺用于血痕检验

<正> 联苯胺用于血痕检验已有多年历史。这种试剂用来检验血虽有较高的灵敏度,但具有致突变和致癌作用。为此,寻找一种比较安全的联苯胺代用品就具有重要意义。1974年,Holland 等合成了3,5,3′,5′,—四甲基联苯胺(3,5,3′5′-Tetramethyl-benzidine,缩写为 TMB),并作血痕检验;Holland 等还将联苯胺和 TMB 对大鼠进行     

联苯胺预试验处理血痕后样本DNA定量的研究

目的探讨联苯胺血痕预试验处理后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法选取10名无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,保存干燥时间分0．5h、1h、3h、6h、12h、24h六个实验组,并采用磁珠提取法、QIAcubeDNA提取纯化法、chelex-100提取法提取样本DNA,应用RT-PCR定量技术检测样本DNA含量,同时应用PCR-STR技术和Idfiler-plus试剂盒检测相应样本STR分型。结果联苯胺血痕预试验后处理样本,随保存时间的延长,其样本DNA含量显示逐渐降低的趋势。回归线性对数分析显示,磁珠提取法：Y=-0．40871n（x）＋0．7044R0—0．7633;QIAcubeDNA提取纯化法：Y=-0．23931n（x）＋0．4764R0—0．8715;chelex-100提取法：Y=-0．11781n（x）＋0．2302R2=0．9571。不同DNA提取方法对同一保存时间的联苯胺血痕预试验试剂处理样本DNA含量间差异有极显著性,P〈O．01。结论联苯胺血痕预试验后对后续STR分型影响较大,联苯胺血痕预实验后的血痕不能继续进行STR分型检测。     

应用免疫斑点法检验微量陈旧血痕种属的实验

检验血痕种属的方法很多。从古老的沉淀环到目前所应用的ELISA法、主要适用于比较新鲜的血痕，而对陈旧血痕及其它受物理因素影响的血痕效果不佳。本文提出一种用1／氨水液提取血痕，ELISA法检验种属的较佳方法。经反复试验，以肉眼观察颜色变化判断结果，可以测得长达33年陈旧血痕，而各种动物实验对照无非特异性反应，给种属检验提供一个新的途径。材料和方法l．试剂l％低脂奶粉；兔抗人IgG酶标抗体（北京生物制品所）PHg．6的CBS和PH74的TBS缓冲液；1％氟水溶液；O．85％生理盐水；国产硝酸纤维素膜（NC）。2．检材室温保存11…     

反向间接血凝(RPHA)法应用在血痕检验中的研究

血痕检验目前采用的方法有肉眼观察、预试验、确证试验、种属鉴别、血型检查及出血部位检验等.用免疫法制备抗人血红蛋白(Hb)的抗血清进行人血液的法医学种属鉴别已沿用很久,但国内还未见到RPHA法应用在血痕检验中的报导.本实验室建立了该法检测人粪便隐血,并对模拟血痕的检测也作了研究.认为本法对微量血痕     

血痕预试验检测的应用现状与研究进展

血迹是凶杀、伤害等案件中最常见和最重要的一种物证。血痕预试验是利用化学检测的方法从现场大量可疑的斑迹中初步筛选出可能是血的痕迹物证。本文对常用血痕预试验试剂的应用现状及其灵敏度、特异性、稳定性等进行分析比较,同时对预试验检测中存在的问题及今后的发展趋势进行综述,旨在为更好地研究、利用血痕预试验试剂提供参考。     

用酶标抗人Hb单克隆抗体检测微量血痕种属的实验

法医学血痕种属检验的方法很多，如环状沉淀试验，琼脂糖单扩散试验以及对流免疫电泳试验等。这些方法操作简便，但灵敏度低，易受血痕所附着的客体以及化学合成物等因素的干扰。笔者参照文献［1］介绍的方法，用酶标抗人Hb单克隆抗体检测微量血痕种属，取得良好的效果，现报道如下。材料与方法一、材料酶标扰人Hb单克隆抗体和8管反应板（华能公司博塞试剂研究所生产）；抗人Hb单克隆抗体（白求恩国际和平医院提供）；抗人Hb多克隆抗体（公安部第二研究所血清室提供）；三羟甲基氨基甲烷等试剂（北京化学试剂厂）；牛血清白蛋白（BSA）（…     

雨淋外衣上潜在血迹DNA检验1例

1 案例 某日,在某地发生一起杀人案件.嫌疑人余某作案后离开现场时正在下雨,雨水将其当时穿的衣服全部淋湿.10日后抓获余某,取其作案时穿的衣、裤进行检验.送检衣、裤均已晾干,颜色均为深蓝色,肉眼不能发现血迹,选择性地进行联苯胺试验,均未发现有阳性反应区.     

血痕预试验的改进

在法医物证检验中鉴定血痕首先应进行预试验,从而确定下一步检验.实验检查血痕一直沿用血红蛋白(以下缩写为Hb)有过氧化酶活性的原理来进行检验的.但是现场提取的检材中往往含有植物氧化酶、化学触酶或其它氧化剂,它们同样具有过氧化酶的活性,对血痕预试验有强烈的干扰作用,给血痕的认定带来了很大困难.为解决这一     

TES缓冲液在陈旧性血斑金标抗人Hb试剂条试验中的应用

目的分析评价TES缓冲液在陈旧性血斑金标抗人Hb试剂条试验中的应用效果。方法对31份10年以上的陈旧性血斑进行联苯胺试验;分别使用蒸馏水和TES缓冲液震荡浸泡检材,于0h、6h、12h、24h进行金标抗人Hb试剂条试验。结果 31份陈旧性血斑联苯胺试验呈不同程度阳性;金标抗人Hb试剂条试验,TES缓冲液组有9份检材检测为阳性,6h后14份检材出现阳性结果,而蒸馏水组仅有1份检材浸泡6h后检测为阳性。结论对于10年以上的陈旧性血斑,使用TES缓冲液进行金标抗人Hb试剂条试验,并适当延长浸泡时间能显著提高种属鉴定检出率。     

抗人红细胞凝集素血清的应用研究

本文通过吸收抑制试验证明了抗人血红蛋白沉淀素血清中存在的那种能凝集人类红细胞的凝集素,实际上就是用人的红细胞免疫家兔而产生的抗人红细胞凝集素.为考察抗人红细胞凝集素血清对血痕种属的鉴识能力,本文用此抗血清作解离试验,对不同稀释度的新鲜人血痕、室内存放的久暂不一的人血痕和15种动物血痕进行了检测.得到的结果是,新鲜人血痕稀释至1/1000仍呈阳性;500例室内存放的人血痕中,存放时间在11年以下的448例全部能够准确测出;存放12-16年的52例人血痕中,有33例能够测出,余19例呈阴性;15种动物血痕全部呈阴性.     

溴甲酚绿与溴甲酚蓝显现液显现潜血印痕的比较

目的 探索一种犯罪现场上潜血印痕新型显现技术；方法 利用溴甲酚绿、溴甲酚蓝、四丁基碘化铵与酒精溶液作为新型潜血印痕显现液,研究该技术显现潜血印痕的效果,并与国内外最常用的四甲基联苯胺显现技术进行交叉比较；结果 新型溴甲酚绿和溴甲酚蓝酒精显现液对稀释浓度到为1/1000的潜血印痕的极其敏感,显现出的手印纹线清晰连贯、反差明显,无颜色背景,且能够有效增强四甲基联苯胺处理后潜血印痕；结论 新型潜血印痕显现技术反应灵敏、反差明显,能作为四甲基联苯胺的后处理试剂,若得到推广应用,将能够有效提高犯罪现场上潜血印痕的发现率、提取率和利用率.     

用荧光抗体法作血痕的种属鉴定

血痕的种属鉴定,最早是应用抗人血清作环状沉淀试验,后来使用特异性更好的抗人血红蛋白沉淀素血清替代抗人血清作各种沉淀试验.此外,还有应用抗人球蛋白消耗试验、间接血凝试验法、胶乳载体试验法.近来,随着免疫学实验技术的发展,应用酶联免疫技术等检测人血液中各种特异组分作血痕的种属鉴识.本文使用荧光标记抗体检测人血痕中的IgG组分,作人血和动物血的鉴别,取得较好结果,现将实验报告如下:     

蓝绿色及其它深色客体表面血手印的显现方法

目前显现血手印一般均采用四甲基联苯胺试剂,这也是迄今为止显现血手印较为灵敏、安全、有效的方法之一。但此方法对于深色客体却无显效。其原因是该试剂反应后的生成物——四甲基联苯胺蓝呈蓝绿色,如遇深色客体,则反差极小,以至看不出显出的手印纹线;另外对于血迹较浅的血手印,因与检材颜色背景反差弱,也不便于拍照提取。针对这些问题,我们经过反复实验、摸索出一种显现深色客体上血手印的好方法。     

用毛细管法进行血痕种属的检验

在实际案件中常遇到微量血痕。血痕量的多少,直接影响着每一步的检验,而血痕种属的检验则是血痕(斑)用量最多的一个环节。由此,对传统的环状沉淀反应,改用毛细管环状沉淀反应,操作简单,效果相同,且浸出液用量减少了几倍。具体操作:用作血痕浸出液蛋白浓度测定的毛细管,手指封闭一端,另一端插入测试离心好的血痕浸出液中,微抬封闭管口的手指,待液面外至0.5～1cm时取出,用干棉球轻轻擦净管外的液体,再将此管插入测好的抗人血红蛋白血清中,待液面升至与浸出液吸入量均等时,取出擦净液体,     

琼脂单向免疫扩散法在洗涤剂污染血痕检材中的应用

在血痕种属检验中,通常采用较为灵敏和快速的环状沉锭法。当遇有被肥皂、洗衣粉等污染的血痕检材时则往往得不到正确结果。我们采用琼脂单向免疫扩散法对常见洗涤剂污染的血痕检材进行实验,取得了满意的结果。 1 器材与试剂 (1)人血样品(医院血库提供)。 (2)抗人血红蛋白血清(华西医科大学法医系提供,效价:1∶10000)。 (3)琼脂糖,1.5％和5％的肥皂液,1.5％和5％伪洗衣粉液,1.5％和5％的餐具洗洁精液(以上液体均用自来水配制而成)。 (4)加热磁性搅拌器、冰箱、培养皿。 2 方法     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1~3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1.0mm纸片,分别用DNATyperTM15Plus试剂盒、GoldeyeTM20A试剂盒和华夏TM试剂盒在标准条件(说明书条件)、优化条件1(标准条件+1μL DMSO)和优化条件2(标准条件+室温浸泡1h)扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均97.00%,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27.22%~31.67%,在优化条件2下,检验成功率相似(97.00%),与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异(P0.01)。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

一种检验血痕的新方法——氯丙嗪试验

以往法医工作中对可疑斑痕要确定是否是血,需应用"血色原结晶试验"或"氯化血红紊结晶试验",但这两种试验的共同缺点是灵敏度低、用材量大,在法医实践中使用很不方便.较常用的"联苯胺试验"虽应用简便,但自然界中不少植物汁液和其它物品对它都呈阳性反应,故只能作为一种预试验.加之联苯胺是一种致癌药,来源也很紧张,为解决这个问题,我们参考有关资料,研究出了简便、灵敏、特异且安全无毒的"氯丙嗪试验".经过我们对数百种物质