鹦鹉衣原体牦牛流产株原体和始体的提纯及超微结构观察

采用差速离心、泛影葡胺不连续梯度离心方法,分离提纯鹦鹉衣原体牦牛流产株的原体和始体,结果证明,分离纯度高。用电镜对该提纯株进行了超微结构观察,首次描述了原体类核“花瓣样”结构,以及类核周围形成的一个电子透明环带现象。     

猪水泡病病毒单克隆抗体相对亲和力的测定

猪水泡病病毒单克隆抗体相对亲和力的测定韩雪清，李忠润，刘湘涛，田增义，李彦敏（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）作为不同用途的主要指标之一是测定其与抗原的亲和力。一般亲和力低则宜于做免疫吸附柱提纯抗原（Ｈｅｙｎｉｎｅｎ１...     

肝片吸虫诊断抗原提纯方法的研究

用肝片吸虫成虫粗制抗原经葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)分离到4个蛋白峰,以间接血凝法(IHA)测定各峰抗原活性,除第Ⅳ峰外,其余各峰均有活性,以Ⅱ、Ⅲ两峰的特异性最强。提纯抗原能检出人工感染10～100个囊蚴14天以上的羊抗体。提纯抗原保存60个月,其效价不变。     

DEAE_(32)纤维素色谱法纯化EDS-76病毒的研究

应用DEAE_(32)纤维素色谱法纯化EDS-76病毒的方法是:采用起始缓冲液(0.01molpH7.2PB)充分平衡柱床和病毒样品,加样后以0.01mol pH7.2 PB,0.05mol NaCl缓冲液洗柱,再以0.01mol pH7.2 PB,0.30mol NaCl缓冲液洗脱并收集病毒。电镜观察证实,所获得的病毒样品具有较高的浓度和纯度,病毒颗粒无囊膜、球形二十面体对称,大小均一,直径约80nm。     

油酸人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备

为建立奶牛血清中油酸(OA)含量的免疫学检测方法,将油酸用活泼酯法分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制备人工抗原和包被原;利用薄层色谱法(TLC)和红外光谱法鉴定人工抗原合成是否成功;用OA-BSA常规免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行亚克隆;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Hi Trap Protein G HP纯化柱纯化腹水,并对纯化后的腹水用ELISA检测抗体效价,以及抗体亚型鉴定。结果表明,TLC监测抗原合成过程中有新物质生成,红外图谱显示OA-BSA波谱形态与BSA相似且拥有OA的特征峰;小鼠血清抗体效价为1∶12 800,用ELISA方法筛选出1株细胞G-1,抗体亚型为Ig G1型。为建立油酸的免疫学检测方法奠定了基础。     

用高效液相色谱法测定跌打损伤颗粒中人参皂甙Rg1的含量

探讨了应用高效液相色谱法 (HPLC)测定跌打损伤颗粒中人参皂甙Rg1含量的方法 ,并对其含量进行了测定。测定条件 :色谱柱为Ultrasphere ODSC18柱 (4.6mm× 2 5 0mm ,5 μm ) ;流动相为V(乙腈 )∶V(水 ) =3∶7;检测波长 2 10nm ;流速 1mL/min ;柱温为室温。测定结果显示 ,人参皂甙Rg1的含量平均为 0 .5 67% ,平均回收率为 99.11% ,RSD为 0 .92 3%。表明该测定方法简便、灵敏、准确、快速、重现性好 ,可用于控制该制剂的质量     

病毒提纯方法的比较试验

病毒提纯方法的比较试验裴天云，侯顺利，赵改敏，刘万恒，臧荣鑫（兰州军区后勤部军事医学研究所７３００２０）目前，用于提纯病毒抗原的方法有差速离心法、葡聚精凝胶层析法、硫酸铵沉淀法等，这些方法为化学提纯法打下了基础。现就常规与化学提纯法的比较试验情况作如...     

绵羊瘤胃内厌氧菌的分离和鉴定

绵羊瘤胃内厌氧菌的分离和鉴定王良娟，马勋，靳万贵，秦学敏，周霞，王晓兰（新疆石河子农学院８３２００３）我们从绵羊瘤胃内分离出８株厌氧菌，用厌氧菌的ＧＡＭ肉汤培养物，进行气相色谱测定，根据各厌氧菌的革兰氏染色特性和培养物代谢产物的气相色谱法分析及生化反...     

猪血清IgG提取方法的比较

目前在兽医研究工作和诊断中,对纯化免疫球蛋白Ig的质量提出了更高的要求,因此寻求一种操作简单、高效、实用的Ig提纯方法是很有必要的。为此,我们用葡萄球菌A蛋白(SPA)菌体法,饱和硫酸铵盐析法、DEAE——纤维素柱层析法纯化猪血清IgG,并加以比较,结果报告如下,供同行借鉴。 (一)材料与方法 1 饱和硫酸铵盐析法:盐析法是根据蛋白质在纯水和各种盐类溶液中的相对溶解度不同而进行的。当介质中盐份增加时,就会影响水分子与蛋白质分子极化部分的相互作用而减     

猪血清IgG提纯及测定技术

免疫学是近年来医学科学中发展较快的一门学科,对兽医免疫学的发展影响很大。在兽医免疫学的进展中,对血清免疫球蛋白的提纯及测定技术将有新的发展。本文就我们近年来对猪血清IgG的提纯及测定技术作一简单介绍。     

马血浆纤维蛋白连接素分子量、糖、氨基酸的分析

为了更深入地研究马血浆纤维蛋白连接素(Fibronectin, Fn)的功能,对该蛋白进行了分子量、糖和氨基酸的试验分析。结果如后。 (一)材料与方法 1.样品来源:是应用改良gelatin-Sepharose 4B柱亲和层析提纯的马血浆Fn,浓度为0.7mg/ml。 2.分子量的测定:应用SDS-6H(SIGMA)的一个包装,用1位浓样品与1ml缓冲液溶解。马和人血浆Fn用低渗盐水配成2mg/ml,再加等体积样品缓冲液,然后按常规的SDS-PAGE方法,加样、电泳、固定染色及脱色等处理。     

肝片形吸虫体内谷氨酸的定性及定量研究

用反相梯度洗脱柱前衍生化荧光检测高压液相色谱法（ＨＰＬＣ），测得肝片形吸虫体内谷氨酸（ＧＡ）的含量为８２．３０μｇ／ｇ±９．５３μｇ／ｇ虫湿重，虫体尾部ＧＡ含量略高于头部。经体外培养证实，肝片形吸虫能摄取外源性ＧＡ。     

兔病毒性出血症病毒的提纯及电镜观察

本试验用人O型红细胞吸附-释放病毒的方法提纯兔病毒性出血症病毒,通过电镜观察证实了提纯效果。电镜下观察到的病毒颗粒细微结构清晰,大小约30～40nm,背景中杂质极少。     

人生不必太提纯

你知道功能卓越的半导体晶体管是怎样诞生的吗?科学家发现将锗提纯,可以制成极为优异的晶体管。这之后,几乎所有的科学家都力求去掉锗中的所有杂质,使其纯度达到100%,让理想中的晶体横空出世。两位研究者沿着这种构想,进行了无数次的试验,但每次都不可避免地带进了杂质。后来,他们想:既然绝对提纯不可能,那么可否反其道而行之,试着一点点地加进杂质?当时,这个构想遭到了很多人的反对和嘲笑。谁知,终于有一天,奇迹出现了,一种极为优异的晶体在他们手下意外地诞生了。他们因此获得了诺贝尔奖。其实,有时候想想,人生也是一样,绝对提纯是不可能…     

以SPA-ELISA法检测家犬狂犬病抗体的试验

(一)材料与方法1.材料:(1)抗原:为狂犬固定毒CVS株经地鼠肾源代细胞培养提纯的冻干制品,由兰州生物制品研究所提供,批号89004。(2)HRP-SPA:工作浓度1∶100,来源同上,批号89002。(3)阳性血清:家犬经狂犬病弱毒ERA苗加强免疫后采血分离。(4)阴性血清:从非疫区从未注过狂犬疫苗的8个县260只犬采血分离,经酶联免疫试验求平均OD值加两个标准偏差选定。(5)被检血清:免疫后的犬血清及其它病犬血清。(6)其他:邻苯二胺(显色剂),2mol H_2SO_4     

鸡衣原体病的调查研究——病原学与人工感染试验

本研究从患有纤维素性心包炎、气囊炎、肝周炎、腹膜炎和脾肿大的病死鸡中分离到3株衣原体(JLC-3、JLC-5和JLC-6株)。该分离物接种7日龄鸡胚卵黄囊能致鸟胚在96～120小时内规律性死亡。剖检死亡鸡胚可见明显的病变,卵黄囊膜涂片镜检能观察到大量原生小体;交叉补体结合试验证明,该分离物能与标准衣原体补体结合试验抗原和阳性血清发生交叉反应,具有抗原相关性;对磺胺嘧啶的具有抵抗力;碘染不着色;对鸡胚的致死毒价为10~(11)ELD50/0.4ml;静脉途径接种小鼠后产生毒素,在24～48小时内致死小鼠; 经提纯后在电镜下能观察到衣原体的原生小体和始体。以上结果表明所分离到的衣原体为鹦鹉热衣原体(Chlamydia ps-ittaci)。将该分离物分别以腹腔、滴鼻、口腔途径接种7日龄雏鸡,并接种生理盐水作为对照,结果腹腔和滴鼻途径接种能复制出与自然发病相同的病例。     

抗非洲猪瘟病毒VP73蛋白鸡卵黄抗体的制备及鉴定

为研制非洲猪瘟的诊断试剂,将原核表达的非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白纯化后,作为抗原免疫蛋鸡,先后用饱和硫酸铵和硫酸钠对卵黄抗体(IgY抗体)进行分离提取,制备抗非洲猪瘟病毒VP73蛋白的特异性IgY抗体。对初步提纯的IgY抗体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,并用间接ELISA测定IgY抗体的效价。结果显示,提纯后的IgY抗体有1条重链和1条轻链,分子质量分别约为65ku和26ku;IgY抗体可与非洲猪瘟病毒VP73蛋白发生特异性反应,在约71ku处出现特异性杂交条带;间接ELISA测定的IgY抗体效价约为1∶8 192;浓度测定结果显示,每1mL卵黄液可得到9.2mg卵黄抗体。结果表明,用表达的VP73蛋白作为免疫原制备的特异性IgY抗体具有免疫反应原性,可用于研制非洲猪瘟的诊断试剂。     

ELISA双抗夹心法检测鸡IBV的研究

用差速离心结合不连续蔗糖密度梯度纯化的鸡传染性支气管炎病毒抗原免疫兔和鸡,获得高效价的多克隆免疫血情。经鸡胚胚体乳剂吸收和过DEAE-52纤维素柱提纯其IgG,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的ELISA双抗体夹心法。应用本ELISA对人工感染鸡和传染性支气管炎病鸡群的气管样本的检测,其病毒抗原阳性检出率分别为10O％(20/20)和78％(39/50)。实验结果表明,ELISA双抗体夹心法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简单、快速、敏感性高、特异性强和重复性好等优点。     

马传贫弱毒的提纯及结构蛋白分析

本实验用含2％或无血清的培养液在驴胎皮肤细胞上培养马传贫弱毒,用差速离心结合二次蔗糖密度梯度离心,从收集的培养液中提纯了完整的具有感染活性的马传贫弱毒粒子。提纯的病毒经SDS-PAGE分析出现8条蛋白带,测得其分子量分别是24.5、29.5、43.6、52.5、66.0、100.0、120.0、140.0Kd;其中三种主要蛋白质分子量是24.5、52.5和66.0Kd。     

兽药黄连解毒散中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的HPLC法测定

采用Eclipse XDB-C18键合硅胶柱(4.6 mm×150mm,5μm)为色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-2mL/L磷酸水溶液(25∶75),流速为1 mL/min;检测波长:黄芩苷278 nm,盐酸小檗碱347 nm;进样量10μL。结果,黄芩苷、小檗碱的进样量分别在0.464～1.16μg(r=0.999 8,n=7)、0.194 4～0.486μg(r=0.9999,n=7)范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.91%和98.69%,RSD分别为1.42%(n=9)和0.85%(n=9)。结果表明,建立的高效液相色谱法快速、准确,重现性和精密度均良好,可为兽药黄连解毒散的质量控制和评价提供技术支撑。