间接荧光抗体染色测定猪弓形体抗体的研究

试验采用兔抗猪IgG 荧光抗体(IgGFA),对弓形体虫体涂片进行IFA染色,检查了人工接种弓形体猪、现场自然感染弓形体猪和屠宰猪的血清样品共444头份。在这些样品中,检出弓形体阳性血清样品的抗体滴度在1:16～1:1024之间。 本文叙述了兔抗猪IgGFA的制备和弓形体IFA染色的操作方法,并对试验检出弓形体抗体的滴度结果和IFA诊断猪弓形体病的实用价值,做了简单的讨论。     

溴氰菊酯和杀灭菊酯的灭蜱试验

(一)试验材料 1.药品:溴氰菊酯(Butox),又名敌杀死。法国罗素优克福公司生产,为2.5％乳油剂;杀灭菊酯(Fenvlerate)又名速灭杀丁、速灭菊酯、戊酸氰醚酯。上海第十四制药厂生产,为20％乳油剂。 2.试验动物:来自91团畜牧公司养禽场4月龄来航鸡800只。 (二)试验方法和结果 1.离体蜱的杀灭试验:每种药液选用4种浓度(每种药物所选浓度见结果),然后将滤纸分别于各种不同浓度的药液中浸湿,放入平皿,每个平皿内放入虫龄、饱血程度不同的     

应用SPA-固相免疫电镜法检测口疮病毒

我们在进行骆驼传染性口疮病原分离鉴定研究中,采用SPA—固相免疫电镜法检测口疮病毒,获得较好效果。 (一)材料和方法 1.抗原 (1)骆驼传染性口疮病毒:取自人工感染发病驼痂块,按常规方法作1:10(W/V)稀释,—20℃冻结保存,使用前水浴融化,4000rpm离心30分钟,取上清备用。     

用SPA-ELISA诊断鸡新城疫

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus proteinA,SPA)能非特异性地吸附多种哺乳动物免疫球蛋白分子中的Fc段,因此,可以广泛地用它来代替第2抗体。若将SPA与辣根过氧化物酶(HRP)制成酶标SPA,可以作为一种广谱免疫学试剂直接和间接地检测不同动物种属的抗原或抗体,而不需制备各自相应的标记物,并且特异、稳定。鉴于目前尚未见有应用SPA-ELISA诊断鸡新城疫(ND)的报道,为了探讨本法用于检测鸡新城疫病毒(NDV)大分子抗原的可行性,我们开展本试验。     

葡萄球菌A蛋白在猪丹毒杆菌鉴定上的应用试验

葡萄球菌A蛋白(SPA),是金黄色葡萄球菌细胞壁所含的一种蛋白质,作为一种新的免疫学试剂,在医学领域广泛应用。笔者参考国内外有关资料,用猪丹毒高免血清致敏SPA,对保存的10株猪丹毒杆菌进行了鉴定,其结果介绍如下。     

戊菊酯驱杀绵羊痒螨的疗效观察

1984年11月,笔者进行了用戊菊脂驱杀绵羊痒螨的试验。 (一)材料及方法 1.药品:戊菊酯为淡黄透明液体,由内蒙古药监所提供。使用时用pH6.5～7.5的常水配成1:900、1:1000、1:1100三种浓度。 2.取螨:从01号病羊体表用大头针挑取活力较强的痒螨(成虫、若虫、幼虫)于平皿内,每组8个,室温控制在15℃左右。把分类好的虫体分别挑入凹面载玻片上,凹面的边缘用脱脂棉围起,然后把不同浓度药液分别滴入,以药液浸泡住虫体为度。     

金黄色葡萄球菌Fc段受体结合蛋白A基因的克隆与原核表达

为研制葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)的相关免疫试剂盒,设计了1对引物,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出了876bp的细胞壁结合蛋白SPA基因,该基因编码292个氨基酸,包含了E、D、A、B、C 5个IgG结合结构域。构建了原核表达载体pET28a(+)-SPA,经IPTG诱导,表达出分子质量约35.0ku的SPA蛋白,并应用亲和层析柱纯化了SPA蛋白,Western-blot分析表明纯化的SPA蛋白具有生物学活性。     

炭凝集试验快速诊断猪弓形体病的研究——弓形体炭抗原的特异性和敏感性

弓形体病的实验室诊断有染色试验(DT)、间接血凝试验(HA)、荧光抗体法(FAT)、免疫酶标记等十余种方法,这些方法皆具有较高的特异性,但大多操作过程繁琐,技术性强,设备苛求,反应出现缓慢,观察比较困难。根据我国当前实际情况,作者等谋求寻找一种方法简便、快速准确、容易观察结果、便于基层在生产实践中推广应用的诊断方法。鉴于此,在实验条件下,探讨了炭凝集试验在诊断弓形体病中的价值。     

应用酶联免疫吸附试验诊断弓形虫病

1984～1986年,本课题协作组在广西、北京、福建、安徽、黑龙江、浙江等省市的6个单位进行了弓形虫病酶联免疫吸附试验诊断方法的研究,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)。 葡萄球菌A蛋白—酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA)固相免疫酶底物珠试验(DASS),玻片虫体过氧化物酶联免疫吸附试验(TSHE),玻片虫体—葡萄球菌A蛋白酶联吸附试验(TSSH)5种酶联试验方法,现汇总报告如下。     

应用醛化鹅红细胞进行乙脑病毒HA和HI试验

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验,是进行乙脑病毒(JEV)鉴定、临床诊断和流行病学调查的两种主要方法。以前使用新鲜红细胞,因其保存期短,需要不断采集进行配制,多给实验带来不便,又因来源于不同个体的红细胞敏感性不同,影响了试验结果的准确性。在乙脑诊断中,笔者采用了戊二醛化鹅红细胞,克服了上述缺点,获得满意结果。 (一)材料与方法 1.JEV血凝素:用JEV猪株SR-83毒,脑内接种5～7日龄乳鼠,以碱性溶液(pH9.0硼酸缓冲液)提取法从发病鼠脑中提取血凝素,置4℃冰箱保存备用。 2.鹅红细胞: (1)新鲜鹅红细胞:采自本研究室动物房饲养的健康鹅,以阿氏液抗凝,4℃保存(一般不超过10天)。用时以生理盐水洗涤3次,以pH5.3的磷酸盐缓冲液(PBS)配成     

口蹄疫及猪传染性水泡病病毒感染猪只的体温变化及心肌肉眼、切片观察报告

本试验目的,在于明了口蹄疫与猪传染性水泡病之体温、心脏病理有否不同,以求在区别二种猪的水泡症候之传染病时有所借鉴,故做此试验。现将初步试验结果报告于后。 一、体温变化、临床症状及心肌肉眼病变观察 (一)试验材料: 1.动物:猪18只(6月左右浙江猪12只,1～2月龄临洮猪6只)。 2.病毒品系: (1)A型牛源毒阿克陶系44代毒(1:10倍)。 (2)A型兔化弱毒363代毒(1:10倍)。 (3)上海龙华猪水泡皮毒(1:10倍)。     

弓形体快速原虫辐射后对IB-RS-2细胞的活力观察

弓形体(Toxoplasma gondii)的组织培养及其在组织内的分裂繁殖与传代培养,曾做了较为详细的观察(兽医科技杂志,1980年第1期)。现在报告弓形体的快速原虫(Tachy-zoites)用不同剂量的Co~(60)γ-射线辐射后对细胞的活力关系,目的是观察辐射虫体侵入细胞的能力与繁殖的抑制作用,从而探讨获得弱毒抗原的可能性。     

绵羊SP-A基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

肺表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)具有维持肺内稳态、防御病原感染以及协助免疫应答等重要作用。本试验建立了定量检测绵羊SP-A基因及内参基因B2M(beta 2 microglobulin)m RNA表达水平的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,并采用该方法对健康滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊三个绵羊品种肺脏中SP-A m RNA的表达情况进行了检测。结果显示,SP-A基因和B2M基因的扩增效率分别为94.1%和95.9%;线性范围分别在1×10-1~1×10-6和1×10-1~1×10-7;相关系数分别为0.998和0.999;熔解曲线分别在84.5℃和83.0℃出现一个特异峰;滩羊SP-A m RNA的表达水平略高于小尾寒羊和滩寒杂交羊。本试验建立的绵羊SP-A基因实时荧光定量RT-PCR方法特异性好、检测线性范围广,为绵羊SP-A m RNA表达水平的检测提供了重要方法。     

A型H1N1及H3N2亚型流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

根据A型H1N1亚型流感病毒2009年北美变异株和H3N2亚型流行株的基因序列,设计了3套特异性引物、TaqMan探针,分别用不同的荧光基团标记,以构建的A型流感病毒及H1N1和H3N2亚型流感病毒基因重组质粒作为阳性对照,经反应条件优化,特异性、敏感性和重复性试验,筛选出3套不同的反应体系及同一个反应参数,建立了可同时检测A型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒的实时荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法可特异地检测H1N1(人源、猪源)、H3N2(猪源),禽流感病毒H5、H9等A型流感病毒,且与新城疫病毒、减蛋综合征病毒等其他病毒不发生交叉反应,具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点,试验耗时仅3h。表明,建立的方法,一次试验即可完成A型流感病毒的初筛和H1N1、H3N2亚型流感病毒的初步确认定型。     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用SP2／0骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原（SPA）免疫的Balb／c鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得8株分泌抗SPA的杂交瘤细胞株，即3A_4、1IC_2B_3、2C_2、2E_3、3E_6、3F_(10)和3C_2。亚类鉴定为IgG_1（3A_4、3E_6、1C_2、3F_(10)和3C_2）、IgG_2b（2C_2)、IgG_3(2E_3）、IgG总（2B_3）。免疫双扩散法显示2C_2腹水及2B_3、2C_2、2E_3培养上清粗提物与SPA有反应，与细粒棘球蚴囊液（SHF）抗原及细颈囊尾蚴抗原（CtAg）无反应，以WesternBlot证实3A_4、2C_2、3C_2在SPA50KDa处有强反应带，但对SHP和CtAg亦有微弱反应。依赖于补体的杀伤试验及ADCC实验，提示这些单抗在寻求保护性抗原方面具有一定研究价值。     

家兔T淋巴细胞的ANAE标记及正常值

我们根据Muller,J.提出的一种改良的T淋巴细胞酯酶染色法,使用冰冻切片和涂片来观察家兔淋巴器官内的T淋巴细胞酸性非特异性酯酶(ANAE)的反应特征和数量。 (一)材料和方法 1.试剂配制; (1)血液涂片、淋巴细胞涂片固定液:磷酸氢二钠100毫克、磷酸二氢钾500毫克、双蒸馏水150毫升、丙酮225毫升、40％甲醛125毫升,称取Na_2HPO_4、KH_2PO_4溶于双蒸馏水内,再加丙酮和甲醛充分混匀,溶解,过滤,置4℃冰箱内备用。 (2)Holt树胶蔗糖液:供冰冻切片用。取蔗糖30克、阿拉伯树胶1克,混合研成粉末状,加蒸馏水使到达100毫升,4℃保存备用。     

奶山羊黄豆中毒的研究

1.试验动物:把20只置有永久性瘤胃瘘管的健康杂种萨能奶山羊随机分为4组:试验1(B_1)试验2(B_2)、试验3(B_3)及对照(A)组,每组5只。B_1、B_2、B_3分别按40、60、80g/kg体重给予黄豆粉(生黄豆用清水浸泡3昼夜,每小时换水1次,然后晒干粉碎,与等量温水混合经瘤胃     

猪密螺旋体耐氧耐热性试验

猪密螺旋体(Th)在病猪消化道内营厌氧生活;在-70℃密闭容器中保存,可存活数月。但在自然环境,不同温度条件下或在排出的猪粪的存活情况报道甚少。笔者为了寻求净化密螺旋体污染环境的经济而有效的方法,对从本地区分离的4株Th的抗逆性进行了模拟试验。 (一)材料与方法 1.试验菌株:ThH株系上海市农科院畜牧兽医研究所赠送,Thy株系黑龙江省农垦总局畜牧兽医总站赠送;ThK1、ThK2株系本所实验室分离。 2.Th活力测定:     

弓形体滋养体在传代细胞上的适应性及其增殖能力

弓形体是一种负于细胞内的寄生虫,除了无核细胞外,它有广泛宿主细胞的易感性。为了研究动物弓形体病的需要,我们于1978年用PTPM和RTPM两个虫株对BHK_(-21)、PK_(-15)、IB-RS-2和Vero四种传代细胞做了适应性及其增殖性的观察,并对病原性进行了探讨,回顾了弓形体体外培养的历史资料,以资共同工作着的参考和评价其结果为:弓形体进入细胞3小时后就已开始进行二分裂,6小时钻入细胞的能力基本结束;两个虫株都能适应上述四种传代细胞,在72小时内可增殖大量的虫体,收集抗原;实验证明这两个虫株都是强毒株,细胞培养66天19代不失其病原性。     

农牧宝消毒剂杀灭鸡球虫卵囊的试验

为了验证农牧宝在1:200浓度下,对鸡球虫卵囊的杀灭作用,于1988年7、8月进行了本项试验。 (一)材料和方法 1.试验用药:由国家机械委204研究所、陕西省凤县兽药厂联营生产的农牧宝——复合酚消毒剂。批号:(87)陕兽药字07126。 2.试验用卵囊:天津农学院牧医系寄生虫教研室保存的柔嫩艾美尔球虫(Eimeria lennlla)。 3.试验鸡:为34日龄无球虫感染的京白公鸡。