鸡新城疫－减蛋综合征蜂胶佐剂灭活二联苗的研究

首次用蜂胶作为佐剂，研制出鸡新城疫－减蛋综合征（ＮＤ－ＥＤＳ）二联灭活苗。在开产前１个月左右，用该苗按０．５ｍｌ／只的剂量皮下或肌肉注射免疫蛋鸡，接种后２０ｄ测ＮＤ抗体（ＨＩ法）效价为６．２５～７．０（ｌｏｇ２，下同），ＥＤＳ－７６抗体（ＨＩ法）效价为６．５～８．０。用ＮＤ－ＥＤＳ油乳剂灭活二联苗做对照，进行免疫持续期平行测定对比试验，免疫后１８０ｄ，蜂胶苗免疫组鸡的ＮＤ抗体滴度为８．５～８．７，ＥＤＳ－７６抗体滴度为８．３～８．５，与油苗免疫对照组鸡的ＮＤ抗体（８．６）和ＥＤＳ－７６抗体（８．１）效价相比，无明显差异（Ｐ＞０．０５，Ｐ＞０．０５）。用禽胚做中和试验揭示，该苗免疫半年后，其保护率仍可达９０％以上。田间试验表明该苗安全性理想；免疫４．５月ＮＤ抗体效价达９．０，ＥＤＳ－７６抗体效价为８．０     

鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗的试制及其免疫应答

试制的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ）蜂胶佐剂灭活苗中蜂胶含量为６ｍｇ／ｍｌ。用此苗按０．５ｍｌ剂量给开产或临开产母鸡接种后１５天，测免疫抗体滴度达２￣（－８）～２￣（－１０），６０天测免疫抗体滴度达２￣（－９）～２￣（－１１）。实验室试验结果和田间试验结果初步表明ＥＤＳ蜂胶苗的近期免疫效果优于ＥＤＳ白油苗。     

鸡新城疫减蛋综合征和大肠杆菌病三联油佐剂苗免疫试验

应用鸡新城反（ＮＤ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）、大肠杆菌病三联油佐剂灭活苗进行田间免疫试验，结果表明该三联苗免疫鸡不仅抗体水平高，而且免疫持续时间长，具有与单苗同样的免疫效果。被检血清中ＮＤ抗体ＨＩ平均效价比卵黄高１～２个滴度；血清与卵黄中ＥＤＳ－７６抗体ＨＩ平均效价基本相同（Ｐ＞０，０５），可用卵黄代替血清作为血清学检验材料。卵黄中未检出大肠杆菌凝集抗体。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎（ＩＢ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１８０，酶结合物、抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母源抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１１日龄经ＩＢＶＨ１２０弱毒苗免疫雏鸡的抗体，其Ｐ／Ｎ值于免疫后第１８ｄ达峰值（３．７）。调查的５４群发病鸡，其抗体阳性率为１００％，Ｐ／Ｎ值为４．０～７．５     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

中药免疫增强剂提高鸡免疫功能的研究

以鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）和新城疫（ＮＤ）为模型研究自拟中药免疫增强剂（简称补益方１、补益方２）对ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗、ＮＤ油乳剂灭活苗的免疫增强效果；用间接ＥＬＩＳＡ法测定鸡血清ＩＢＤＶ抗体效价，以微量血细胞凝集抑制试验测定血清ＮＤ血细胞凝集抑制（ＨＩ）抗体效价。结果表明，补益方１与ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗配合使用，血清ＩＢＤＶ抗体Ｐ／Ｎ值在测定期内（４～３９ｄ）都高于免疫对照组；补益方１和补益方２对ＮＤ油乳剂灭活苗均有一定的免疫增强效果，其中补益方２的免疫增强效果（平均为１．０２０）明显优于补益方１（平均为０．４１０），从而认为补益方２与ＩＢＤ疫苗、ＮＤ疫苗配合使用具有免疫增强作用，可以提高机体体液免疫水平。     

鸡传染性法氏囊病中和抗体动态水平监测及其应用的研究

用鸡胚成纤维细胞的微量血清中和（ＳＮ）试验跟踪抽检了同群两种不同免疫程序的１２组次共１４２只鸡的传染性囊病（ＩＢＤ）中和抗体滴度。结果表明，该群１日龄雏鸡的母源抗体水平高达８．３ｌｏｇ＿２并且较整齐，雏鸡母源抗体半衰期约为４．３～５．０天，用ＳＮ免疫监测不同的免疫程序及其实际效果，说明在中和抗体滴度降１６．０～６．５ｌｏｇ＿２（１５～１８日龄）时首免效果最好。该方法准确且敏感性高，可用于鸡群免疫监测，指导合理的免疫程序。     

抗兔轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）与经兔轮状病毒（ＬａＲＶ）免疫的ＢＡＬＢ／ｃ。系小鼠脾细胞进行融合，融合成功率为２２％。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）筛速杂交瘤细胞，阳性率为２９％左右。对其中６株强阳性的杂交瘤细胞进行了亚克隆，获得高产亚克隆杂交名细胞，用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产了腹水，鉴定后选取２株强阳性高效阶的杂交瘤细胞，以ＥＬＩＳＡ阻断试验检验其分泌抗体的特异性，以直接ＥＬＩＳＡ测其敏感性，用琼脂双扩散试验鉴定类和亚类型别。结果１Ｂ＿３为ＩｇＧ，，２Ｂ＿４为ＩｇＧ＿（２ｂ）。     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂支瘤细胞（３Ａ＿６、３Ｂ＿８、３Ｄ＿５）。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ＿１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

四川省家禽及鸟类减蛋综合征血清流行病学调查

采集四川省农村散养的鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽和野外麻雀的血液，分离血清，应用微量血凝抑制（ＨＩ）试验检测减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒感染情况。阳性率为：鸡３．０１％（１３／４３２），鸭４４．８６％（４３６／９７２），鹅２８．８１％（１１９／４１３），鹌鹑３．５７％（２７／７５６），鸽１８．７５％（１８／９６），麻雀３０．５６％（１１／３６）；另外在１９８５年疫病普查时采集并保存的鸭、鹅血清中也查到了ＤＥＳ－７６抗体，阳性率分别为鸭４３．３０％（４２／９７），鹅２６．４０％（２９／１１０）。     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１２００，以ＯＤ４９０＞０．３，Ｐ／Ｎ＞２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ＿（１１）／７５ｃ，ＳＢ＿１，ＨＶＴ＿（ＦＣ１２６）三个马立克氏病毒株分别免疫Ｂａｌ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒（ＭＤＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ＿３、ＦＭ＿（１７）、ＦＭ＿（２４）、ＦＭ＿（２８）、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（４５）、ＦＭ＿（６２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５４）、ＦＭ＿（１５９）．这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０￣３～１０￣５，其中ＦＭ＿３、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（１５９）等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，腹水抗体效价为１０￣３～１０￣５。ＦＭ＿（１５０）识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿３、ＦＭ＿１７识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５７）识别血清Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４５）识别血清Ｉ和Ⅱ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（２４）识别血清Ⅱ型和Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４２）能识别三个血清型ＭＤＶ。这些单克隆抗体可用于ＭＤ早期诊断，和疫苗质量的监测。     

表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。     

猪水泡病病毒抗独特型抗体的研究──Ab_2的免疫原性及在诊断中的应用试验

用猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）抗独特型抗体（Ａｂ_２）２Ｂ_６─Ａｂ_２和４Ｈ_９─Ａｂ_２分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备ＳＶＤＶ抗─Ａｂ_２（Ａｂ_３），通过ＥＬＩＳＡ、正向间接血凝试验（ＰＨＡ）、反向被动血凝抑制试验（ＲＰＨＩ）和细胞中和试验结果表明，Ａｂ_３为特异性的抗ＳＶＤＶ中和抗体。提示ＳＶＤＶＡｂ_２能模拟ＳＶＤＶ抗原的中和表位，在实验动物中具有类似ＳＶＤＶ的免疫原性。ＳＶＤＶＡｂ_２抑制ＥＬＩＳＡ结果表明，ＳＶＤＶＡｂ_２可作为一种生物探针，检测猪血清中抗ＳＶＤＶ抗体。     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

鸡病毒性关节炎病毒的提纯结构蛋白及其免疫活性分析

采用差速离心和蔗糖递度超速离心法提纯了鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｈ＿（９３０７）株，并用ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳技术分析其结构蛋白，该病毒主要由８条多肽组成（ＶＰ＿１～ＶＰ＿８），它们的分子量分别是１４５、１３０、１１５、７２、７０、６５、４２、３９ＫＤ。用Ｗｅｓｔｅｒｎｈｌｏｔｔｉｎｇ免疫印迹技术分析这些多肽的免疫活性，与同源病毒株抗血清出现５条可见的反应带，分别是ＶＰ＿１、ＶＰ＿２、ＶＰ＿４、ＶＰ＿５和ＶＰ＿７；与异源病毒抗血清反应只出现两条可见的阳性反应带，分别是ＶＰ＿１和ＶＰ＿２。     

绵羊肺炎霉形体单克隆抗体的研制及初步应用

用绵羊肺炎霉形体（ＭＯ）抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，融合其脾细胞和ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞，筛选出６株分泌抗ＭＯ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系。用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ做特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＭＯ抗原发生反应，而不与猪肺炎霉形体、山羊无乳症霉形体抗原发生反应。用检测ＭＯ抗体的间接ＥＬＩＳＡ与ＩＨＡ比较检测绵羊血清中抗ＭＯ抗体，前者的阳性检出率较后者高７．１４个百分点