利用GSS高通量测序技术分析不同生境下霍山石斛内生真菌群落的分布

目的 研究不同地域及不同生长环境下霍山石斛内生真菌群落的分布特征。方法 采用DNA分子标定技术确定不同霍山石斛样本的属种,利用GSS高通量测序技术分析霍山石斛样本内生真菌的种类。结果 供试的所有来源的霍山石斛样本均为Dendrobium huoshanense。从10个霍山石斛样本（编号LP1、LP2、LD1、LD2、LS1、LS2、HP1、HP2、JP1、JP2）中分别获得OTU数540、390、405、376、121、601、423、426、392、394个,通过分析每个OTU对应的物种分类信息,这些霍山石斛样本的内生真菌群落分布可归属至种水平,且分别包含内生真菌140、110、134、128、133、142、144、127、151、135种;样本LP1和LP2共有的OTU在物种水平上占84.22%,LD1和LD2共有的OTU在物种水平上占95.58%,LS1和LS2共有的OTU在物种水平上占94.52%,HP1和HP2共有的OTU在物种水平上占93.59%,JP1和JP2共有的OTU在物种水平上占94.05%。结论 不同地域及不同生长环境下霍山石斛（Dendrobium huoshanense）的内生真菌种类存在着差异性,相同地域及相同生长环境下霍山石斛（Dendrobium huoshanense）的内生真菌群落组成基本相同,霍山石斛（Dendrobium huoshanense）内生真菌的生长存在着地域专属性。     

亳芍内生真菌的分离与鉴定

目的 对亳芍内生真菌进行分离鉴定,旨在丰富其内生真菌资源种类。方法 利用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行亳芍内生真菌的分离、尖端菌丝挑取法进行纯化,利用分子生物学方法对其进行鉴定。结果 从亳芍中分离出24株内生真菌,初步鉴定为9属13种,分别为Fusarium,Talaromyces,Dactylonectria,Myxocephala,Llyonectria,Penicillium,Alternaria,Rhexocercosporidium,Lopadostoma。主要为镰刀属（占33%）。结论 本研究首次从亳芍中分离出内生真菌,呈多样性分布,丰富了芍药内生真菌的种质资源。     

宁前胡内生真菌的培养分离与鉴定

目的 对安徽道地药材白花前胡内生真菌进行培养分离与鉴定。方法 通过组织块法对宁前胡进行内生真菌的分离,采用形态学和分子生物学相结合的手段进行鉴定。结果 从宁前胡中共计分离得到41株内生真菌,分属于10属21种,分别为Fusarium、Penicillium、Aspergillus、Alternaria、Tricladium、Phoma、Collariella、Rhizoctonia、Colletotrichum、Trichoderma。分布最广的类群是镰孢霉属Fusarium sp.,其分离频率为29.27%;其次是青霉属Penicillium sp.和链格孢属Alternaria sp.,其分离频率均为19.51%,为其优势种属。结论 宁前胡中含有丰富的内生真菌资源,进一步开发利用宁前胡中内生真菌资源具有重要意义。     

不同生长时期凤丹内生真菌的分离鉴定及多样性研究

目的 对不同生长时期凤丹根皮内生真菌进行分离鉴定。方法 运用组织分离法进行分离,采用形态学与分子生物学相结合的手段进行鉴定。结果 共得到内生真菌45株,分属于9属13种,其中枯萎期4属4种,分别为Fusarium Keratoplasticum、Myrotheeium prestonii、Septoriella phragmitis、Cosmospora cymosa,相对分离频率为40%。花期6属9种,分别为Fusarium acutatum、Fusarium circinatum、Fusarium fujikuroi、Alternaria alternata、Alternaria arborescens、Climacocystis montana、Pyrenochaeta lycopersici、Penicillium crustosum、Rhexocercosporidium panacis,相对分离频率为60%。结论 凤丹根皮中内生真菌组成丰富,且在不同生长时期其种类组成具有多样性。     

安徽霍山产三种石斛花粉粒在扫描电子显微镜下的邓察

中药霍山石斛系我省名贵药材,弛名国内外,有润喉、清音、明目、养胃清热、生津止渴等功效。以往植物学家、生药学家对霍山石斛研究甚少,用扫描电子显微镜观察霍山石斛更少,为此现将我们对安徽霍山产三种石斛的花粉粒在扫描电子显微镜下的观察情况初报如下。     

霍山石斛对脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠免疫功能的影响

目的 探讨霍山石斛对脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠免疫功能的影响。方法 将36只SD大鼠随机分为正常组,模型组,霍山石斛低、中、高剂量组,每组6只,通过灌服N-甲基-N-硝基-亚硝基胍复合温热药（附子、干姜、肉桂）及劳倦法建立脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠模型。霍山石斛低、中、高剂量组大鼠分别按0.7、1.4、2.8 g/kg灌胃霍山石斛水悬液,正常组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,持续灌胃21 d。比较各组大鼠的活动情况,体质量变化,脾脏指数和胸腺指数变化,脾脏组织形态学变化,外周血T淋巴细胞亚群、白细胞计数和分类,血清中免疫球蛋白A（immunoglobulin A, IgA）、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）,以及血清和胃黏膜组织中白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、干扰素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）水平。结果 各给药组大鼠脾脏指数和胸腺指数均显著上升（P<0.05）;脾脏组织病理状态改善;血清IgA、IgM、IgG水平显著上升（P<0.05）;血清和胃黏膜组织IL-2、TNF-γ水平均有不同程度的升高（P<0.05）,IL-4和IL-10水平均有不同程度下降（P<0.05）。此外,霍山石斛可提高大鼠外周血白细胞计数、淋巴细胞计数和中性粒细胞计数（P<0.05）;能上调外周血中CD3+ T淋巴细胞水平、CD4+ T淋巴细胞水平、CD4+/CD8+ ,下调CD8+ T淋巴细胞水平（P<0.05）。结论 霍山石斛可提高脾阴虚型慢性萎缩性胃炎大鼠的免疫功能。     

霍山石斛通过上调突触蛋白Arc表达增强衰老小鼠学习记忆的研究

目的 探讨霍山石斛对小鼠学习记忆能力减退的影响及其可能机制.方法 将33只SPF级C57BL/6小鼠随机分为模型组、早期给药组和晚期给药组,另取11只12周龄C57BL/6青年小鼠作为对照组.采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;应用透射电子显微镜观察海马CA3区超微结构,采用免疫印迹检测海马CA3区Arc蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,模型组小鼠游泳距离显著延长(P<0.05),靶象限游泳时间明显减少(P<0.05);与模型组比较,早期给药组小鼠游泳路程显著缩短(P<0.05),靶象限游泳时间显著延长(P<0.05).透射电子显微镜显示,早期给药组和对照组小鼠海马CA3区可见较多结构清晰的线粒体,线粒体嵴排列较整齐,突触结构较清晰且较多;模型组和晚期给药组小鼠较多出现线粒体空泡化和嵴断裂或扭曲,线粒体数量和突触数量减少,突触后膜较致密.与对照组比较,模型组小鼠海马CA3区Arc表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,早期给药组小鼠CA3区Arc表达水平显著升高(P<0.05).结论 早期给予霍山石斛可以延缓或预防小鼠学习记忆能力减退,其机制可能与其上调突触蛋白Arc的表达水平进而影响海马突触结构有关.     

为了锻造＂健康软黄金＂--记万继银和他的霍山石斛产业

霍山石斛被誉为“中华九大仙草之首”、“救命仙草”,“健康软黄金”,相传历史上一直贵为皇室专用,皇帝们为了长生不老,用霍山石斛炼制长生丹。《本草纲目》记载：霍山石斛生于悬崖峭壁之间,具有强阴益精,厚肠胃,补肉绝不足,平胃气,长肌肉,益智除惊,轻身延年之功效。而如今,在霍山石斛的原产地——霍山太平畈乡,在当地政府的着力引导和推动下,霍山石斛成了致富创业的热门项目,造就了一大批创业“新贵”。万继银就是其中的一员。     

一株凤丹皮内生真菌Fusarium acutatum的次生代谢产物研究

目的 研究来源于凤丹皮中分离得到的一株内生菌Fusarium acutatum的次生代谢产物。方法 应用硅胶、Sephadex LH-20、开放ODS结合半制备高效液相色谱分离技术进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定结构。结果 从固体发酵产物中分离得到15个化合物,分别鉴定为neosartorin（1）,cyclonerodiol（2）,enniatin H（3）,(3R,6R)-4-甲基-6-(1-甲基乙基)-3-苯甲基全氢-1,4-噁嗪-2,5-二酮（4）,赤霉菌吡喃酮D（5）,赤霉菌吡喃酮F（6）,麦角甾醇（7）,过氧化麦角甾（8）,麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（9）,（7E,9E)-6,11-dioxononadeca-7,9-dienoic acid（10）,5-羟甲基-2-呋喃甲醛（11）,α-D-吡喃葡萄糖基-(1→1′)-3′-氨基-3′-去氧-β-D-吡喃葡萄糖苷（12）,α-D-alloypyranose（13）,豆甾醇（14）,β-谷甾醇（15）。结论 化合物1～15为首次从该内生菌中分离得到。     

一种指纹鉴定的新方法

准确、快速作出指纹鉴定,解决疑难指纹鉴定。使用photoshop6.o进行图像处理的方法。     

正交试验优化霍山米斛总多糖提取工艺

目的 建立霍山米斛总多糖的最佳提取工艺。方法 依据2015年版《中华人民共和国药典》第一部中铁皮石斛多糖测定方法,通过单因素考察及正交试验研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对霍山米斛总多糖提取率的影响,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果 霍山米斛的最佳提取工艺为：提取温度为100 ℃,提取2次,每次提取2 h,料液比为1∶800(g/mL)。结论 所优选的工艺简单、方便、准确,适用于霍山米斛总多糖的提取。     

霍山石斛药材HPLC指纹图谱研究

目的 建立霍山石斛(Dendrobium huoshanense)药材的HPLC指纹图谱,为进一步提高霍山石斛药材的质量提供依据。方法 霍山石斛药材甲醇提取物的分析采用Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相甲醇-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流量为1.0 mL/min;检测波长240 nm;柱温30 ℃。再通过聚类分析、主成分分析和PCA载荷图进行评价。结果 建立了霍山县不同产地的霍山石斛药材指纹图谱,标定了14个共有峰,指认了2个峰,13批霍山石斛药材的指纹图谱的相似度均达到0.850以上;聚类分析、主成分分析和PCA载荷图分析模式均表现出不同产地的霍山石斛药材质量具有差异性。结论 运用3种统计分析方法均能够较好地对指纹图谱进行识别,为霍山石斛药材的采收、质量控制等提供科学依据。     

三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定

目的:提取、分离和鉴定三七中人参炔醇.方法:采用超临界CO2萃取三七脂溶性成分,硅胶柱层析、制备薄层分离,并通过波谱技术(UV、IR、MS、1HNMR、13CNMR)分析鉴定人参炔醇化学结构.结果:从三七中分离并鉴定了人参炔醇成分,得率为0.077%.结论:应用超临界CO2萃取三七中脂溶性成分并分离其中的人参炔醇,得率较高.     

不同干燥方法对铁皮石斛多糖和甘露糖含量的影响

目的 研究不同干燥方法对铁皮石斛中有效活性成分石斛多糖和甘露糖含量的影响,为铁皮石斛药材的加工方法提供科学依据。方法 采用红外线、烘干、微波、真空冷冻4种方法干燥铁皮石斛,采用比色法测定多糖含量、高效液相色谱法测定甘露糖含量,分析比较不同干燥方法对多糖及甘露糖含量变化的影响。结果 不同干燥方法得到的铁皮石斛中多糖和甘露糖含量存在较大差异,真空冷冻干燥样品中多糖和甘露糖含量最高,明显优于另外3种干燥样品（P<0.05）。结论 真空冷冻干燥法能最大程度地保留样品中的多糖和甘露糖。