朊病毒致病机理的研究进展

就细胞型朊蛋白PrPc的分子生物学特性、朊蛋白的生理功能、致病性朊蛋白PrPsc对免疫系统的影响、朊病毒的外周致病机理以及相关细胞因子、化学因子与朊病毒神经侵袭之间的关系、朊病毒从外周到中枢的转运机制、入侵门户、血液传播及朊病的其他病理标志和检测方法的研究做一综述。     

朊病毒病及朊病毒的研究进展(二)

长期以来,对传染性海绵状脑病(ＴＳＥｓ)病原因子的本质认识不一,曾提出种种假说,诸如住肉孢子虫说、滤过性病毒说、慢病毒说、类病毒说和非寻常病毒说等,直至1982年Ｐｒｕｓｉｎｅｒ等获得了纯化的痒病病原因子,提出朊病毒假说,才取得了实质性进展。近十多年来朊病毒研究...     

犬细小病毒病基因工程疫苗的研究进展

从犬细小病毒病亚单位疫苗、表位疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗等方面,论述了近年来国内外在犬细小病毒病新型疫苗研究方面的新进展,并对各种新型疫苗的优缺点及应用前景进行了讨论,为犬细小病毒病新型疫苗的研制提供理论基础。提出各种犬细小病毒病基因工程疫苗互有优劣,可以通过技术手段采用不同种类的新型疫苗的交叉组合、免疫原的集成使用等研制出更理想、更有效的疫苗。     

鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达

为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白(ChPrP),根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G+C含量等特点对目的基因PrP(25~248)进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目的片段,之后将两种目的片段分别连接于pPIC9K表达载体并转化至毕赤酵母GS115中,经PCR,选择培养基MM、MD方法鉴定表型后以甲醇进行诱导获得目的蛋白,最后以SDS-PAGE检测蛋白表达。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,成功构建了真核表达重组载体pPIC9K-PrP(25~248),并在毕赤酵母GS115中获得鸡朊蛋白,其与未经密码子优化的目的蛋白相比,具有更高的表达量。本研究通过毕赤酵母表达系统成功获得了鸡朊蛋白,为后续研究奠定了基础,也通过密码子优化前后蛋白表达量比对,再一次证实毕赤酵母具有较高的密码子偏好性。     

朊病毒及其与公共卫生学的关系

朊病毒(Virino)又称感染性蛋白质粒子(protei-naceous infectious par-ticle,简称prion),是美国加州大学旧金山分校动物病毒学家Prusiner 1982年在研究羊痒病的病原体时发现的一种新的致病因子。朊病毒与病毒、类病毒及细菌质粒都不相同,它是一种极其微小、非常简单的特殊病原体。其大小不到半个血红蛋白分子,至今尚找不到这种病毒含有任何核酸成分。但与一般病毒有很多相同之处,如可滤过性、传染性、致病性、对宿主细胞的特异性以及干扰现象、侵染机体后有黑暗期等,所以人们仍称之为病毒。     

非洲狮朊蛋白基因的克隆与序列分析

根据已报道的哺乳动物朊蛋白基因序列设计了1对引物,采用PCR方法扩增了16只非洲狮的朊蛋白基因,序列分析结果表明,所得到的非洲狮朊蛋白基因片段长678 bp、编码226个氨基酸的前体蛋白,其核苷酸序列的同源性为99.79%以上,发现了4个核苷酸多态性位点,无氨基酸变异。经与已报道的猫、貂、绵羊、牛、鼠和犬等哺乳动物的氨基酸序列进行比较,与猫(AF003087,96.7%)和绵羊(96.2%)的氨基酸同源性最高。     

猪的副黏病毒病简介

简要介绍了猪的副黏病毒病 ,包括“蓝眼病”(blueeyedisease)、尼帕病毒病 (Nipahvirusdisease)和梅那哥病毒病(Menanglevirusdisease)的病原学、流行病学、发病机理及该病的诊断和防制措施。     

马西尼罗河病毒病的诊断方法

西尼罗河病毒病 (WestNilevirusdisease)是一种虫媒性病毒病 ,其病原为西尼罗河病毒 (WestNilevirus)。该病毒属黄病毒科的乙型脑炎病毒血清群 ,可引起人类及马、鸟类出现脑炎症状 ,马是该病毒的终宿主。近年来 ,西尼罗河病毒病频繁发生于欧洲、北美洲及中东、西亚的一些国家和地区 ,如1999年美国发现西尼罗河病毒病病例 ,当年有 2 5匹马发病 ,2 0 0 0年有 6 0匹马发病 ,2 0 0 1年增加到738匹 ,2 0 0 2年剧增至 15 2 5 7匹 ,2 0 0 3年截至 9月初有 1185匹马发病。马西尼罗河病毒病可通过赛马和旅游娱乐马广泛传播 ,对公共卫生造成严重威胁…     

美国申大为、高恒博士来兰进行学术活动

美国华盛顿州立大学申大为博士夫妇、高恒博士夫妇,应中国农业科学院邀请,于5月29日来兰州进行学术交流。在有130多人参加的报告会上,他们作了“动物病毒研究的新趋势”,“羊蓝舌病”、“慢病毒病”的学术报告,介绍了美国当前防制病毒病及兽用疫苗研制情况,以及酶标、荧光抗体、放射免疫分析、琼脂扩散,单克隆抗体等技术及核酸限制内切酶的研究情况;阐述了蓝舌病在世界及美国的流行情况、病原分型、诊断及免疫方法;较详细的讲述了在世界许多地方流行的梅迪维斯纳病、羊肺腺瘤样病、山羊关节炎脑炎、绵羊痒病、水貂阿留申病等慢病毒病的病原、流行病学、临床表现、诊断及防制问题。随后,我     

朊毒体蛋白的构象及其特性的研究进展

概述了朊毒体(包括构象不同的细胞型朊毒体和痒病型朊毒体)蛋白的构象特征、朊毒体及其突变体的特性,阐明了PrPsc是由PrPc通过构象转变而成的,不同物种PrP的三维结构有相似的球形结构域(125~228位)和N-末端无规卷曲尾,其球形结构域均由3个螺旋(144~154、173~194和200~228位)以及1对反平行的β-折叠(128~131和161~164)组成,但其结构和表面电荷分布存在一些区别。     

武威驴PrP基因序列与结构特征的分析

以武威驴朊蛋白(PrP)基因序列与结构特征分析为基础,通过比对找到奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因的差异,探究朊病毒病在奇蹄动物与偶蹄动物之间传播的种间屏障及其形成机制。分别从8头武威驴全血中提取基因组总DNA,用设计的特异性引物以聚合酶链反应扩增出细胞型朊蛋白基因(PrPC),并将其克隆到pGEM-T Easy载体。测序之后使用生物信息学方法与软件进行相关分析。序列测定分析表明,所克隆的武威驴PrP基因片段的大小为768bp,包含了驴PrP基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框。本次克隆的武威驴PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码九肽/八肽PQGGGGWGQ/PHGGGWGQ重复子。8个驴PrP基因之间核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性分别介于99.2%~99.8%和98.4%~100%之间。武威驴与西吉驴、马之间PrP基因序列的同源性分别为99.2%和98.7%,与牛、绵羊、马之间PrP基因C端约100个残基区域的三级结构的相似性分别为91.84%、92.04%和97.35%。结果表明,奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因存在明显的差异与进化分歧。     

马麝朊蛋白基因的克隆与原核表达

为了解马麝朊蛋白基因的结构特征和其细胞型朊蛋白的性质,应用分子克隆和DNA重组技术进行了马麝朊蛋白基因的克隆、序列分析及其原核表达.序列分析表明,马麝朊蛋白基因编码区是包含在单一外显子内的完整开放阅读框,全长为771 bp,与马鹿、白尾鹿以及乳牛和绵羊朊蛋白基因相比,核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为97.3%～98.1%和97.7%～98.8%,说明朊蛋白基因在同科和不同科的反刍动物间是保守的;成功构建了马麝重组朊蛋白(85～233 aa)原核表达栽体pGEX-MuPrP(85～233),并转化E.coli BL21(DE3),获得重组表达菌E.coli GST-MuPrP(85～233),该重组菌可产生预期大小约为42.4ku的融合蛋白GST-MuPrP(85～233),在优化表达条件下,可产生占细菌总蛋白量30%以上的融合蛋白,免疫印迹检测显示表达蛋白可与抗牛单克隆抗体4C11反应,表明该基因的各氨基酸突变并未影响其单抗4C11的识别表位.     

应用电镜技术快速诊断动物病毒病

应用电镜技术快速诊断动物病毒病李成（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）电镜技术对诊断形态特征性强的动物病毒（如正粘和副粘病毒、正痘和副痘病毒、疱疹病毒、轮状病毒、弹状病毒、冠状病毒及腺病毒等）感染引起的动物病毒病，既快速又准确。尤其对混合感...     

麋鹿朊蛋白全基因的克隆及序列分析

为获得中国麋鹿朊蛋白(PRNP)的全基因,并利用DNAStar软件与已报道的其他动物的朊蛋白全基因序列进行同源性分析,根据GenBank中马鹿朊蛋白基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从提取的总基因组中扩增得到麋鹿PRNP基因;将其连接到pGEM-T Easy载体中,获得克隆产物并测序。结果,成功扩增出了中国麋鹿PRNP基因,构建了重组质粒pGEM-T-ML;对克隆产物的序列分析表明,麋鹿PRNP基因的开放阅读框包含771bp,编码256个氨基酸的前体蛋白,前体蛋白的分子质量约为28 200u;与已报道的其他鹿科动物朊蛋白全基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性均在98.8%以上,与几种非鹿科动物的同源性在96.5%～98.4%之间。结果表明,麋鹿PRNP基因的核苷酸和编码蛋白的氨基酸序列与其他鹿科动物的序列具有高度保守性,而与几种非鹿科动物间的同源性也较高,说明朊蛋白是一种古老的高度保守的蛋白。     

我国猪A型塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展

A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）是一种新发生的猪水疱性传染病病原,被感染猪的临床症状为口鼻及蹄冠部水疱性损伤、跛行、厌食、仔猪腹泻甚至急性死亡等。这与猪的口蹄疫、水疱病、水疱性口炎的临床症状非常相似,临床上难以鉴别诊断,只能依赖实验室确诊。近年来,在美国、加拿大、中国等多个国家发生猪塞内卡病毒病,似乎正在成为一种全球性流行的猪病,给养猪业带来了不同程度的经济损失和潜在威胁。本文对我国猪塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展进行了综述,以期为该病的科学防控提供参考。     

食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的克隆与序列分析

以外周血液的基因组DNA为模板,运用PCR方法扩增了食蟹猴和猕猴的朊蛋白基因,并将其克隆到pGEM-T Easy载体中进行测序,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析.结果表明,所克隆的食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的开放阅读框片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,含有762个核苷酸,该基因内无内含子,编码253个氨基酸的前体蛋白,推测其分子质量约27.6 ku.与已报道的其他多种动物朊蛋白基因序列做比较,发现其与多种哺乳动物都有较高的同源性,其中与人的同源性最高.氨基酸点突变分析除发现了已报道的多态性位点N97S、H100N外,在食蟹猴和猕猴均发现了未报道的S242L点突变位点.此外,在食蟹猴还发现了I8M、C151R点突变位点.     

尼帕病毒病及其病原的研究进展

概述了尼帕病毒病在国外的流行状况、尼帕病毒(Nipah virus,NiV)的变异及我国的研究现状,着重阐述了近年来在其基础病毒学、诊断技术及防治方面的研究进展,主要包括病毒蛋白的功能及其相互作用、受体的发现、动物模型、荧光PCR及ELISA诊断技术、抑制NiV感染及治疗等方面的研究成果,为该病的深入研究提供了参考。     

西尼罗河病毒病

20 0 2年 ,美国很多州流行西尼罗河病毒 (WestNilevirus ,WNV)病 ,目前 ,有关西尼罗河病毒病的报道很多[1～ 10 ] 。该病为人畜共患传染病 ,患病的人和动物出现脑炎症状 ,如果与其他疾病混合感染 ,则可以导致死亡。因目前尚无治疗西尼罗河病毒病的有效方法 ,造成了人们对WNV的恐惧。本文仅就西尼罗河病毒病的病原学、流行病学及流行情况等作一介绍 ,以使人们正确认识西尼罗河病毒病的危害及其防治。1　病原学WNV是RNA病毒 ,属于黄病毒科 ,其病毒质粒大小约为 4 0nm。本病毒的核酸为不分节段的单股正链RNA。本病毒RNA依赖的RNA聚合…     

浅谈慢病毒及其所致的疾病

慢病毒病也叫迟延性病毒病。本病的特点是潜伏期长,可达数月或数年之久,病程长,无急性期或缓解期;治疗和免疫均无效,最后导致死亡。此病是Cuille等在1936年研究痒病时首次发现。1954年Sigurdsson在研究羊的梅地—维士那病时得出慢病毒的概念。1957年,Gajdusek等发现了库鲁病,后来Hadlow发现丁库鲁病与痒病的临床和病理组织学相似,从而得出了人的海绵状脑病感染特性的论据。这类疾病由于长期持续感染人和动物,给人的健康和国民经济造成很大损失,因而已引起人医和兽医的极大关注。现将几种主要的慢病毒及其所致的疾病简介如下,供同道参考。     

传染性羊痒病抗性基因分型方法的建立

根据GenBank中登录的绵羊朊蛋白编码基因PRNP序列,设计并合成了可用于单核苷酸多态性(SNP)快速分析的3对引物和7条分别标记了FAM和VIC荧光染料的MGB探针,建立了一种利用荧光定量PCR扩增反应对羊痒病抗性基因进行筛选的方法。结果表明,设计的引物及探针具有特异性和高效扩增性,能够用于PRNP羊痒病抗性基因的快速分型。借助该方法可建立一整套完善的预警监测体系来预防该病的发生,也可用于羊痒病的常规实验室诊断。