日本血吸虫童虫冷冻保藏方法的改进

研究日本血吸虫童虫保藏技术的目的是为了使经冷冻的童虫直接应用于免疫预防、免疫诊断、药物治疗的感染动物模型及虫种保存。自从James(1981)首先提出冷冻保存曼氏血吸虫以来,Stirewalt等(1984)、许绶泰等(1989,1990)相继进行冷冻保存血吸虫方法的研究。本文是在上述工作的基础上,对许绶泰等的冷冻保存童虫技术进行改进,以找出可以实际应用的方法。 (一)材料和方法 冷冻用日本血吸虫尾蚴由本所钉螺室提供,所用钉螺系湖北钉螺,血吸虫为日本血吸虫中国大陆株安徽贵池品系。冻存剂采用     

日本血吸虫冷冻童虫苗免疫绵羊试验

Taylor等(1976)的研究证明,用同种血吸虫辐照尾蚴或辐照童虫免疫接种绵羊,可使其对梅氏血吸虫(S.mat-theei)产生抵抗力。该作者等1979年用同种辐照童虫苗免疫接种绵羊,证明后者对牛血吸虫(S.bovis)也能产生抵抗力。Bick-le等(1979)应用同种和异种辐照致弱童虫免疫绵羊对抗梅氏血吸虫和牛血吸虫进一步作了试验观察。但直到1985年James等才首先应用冷冻辐照致弱童虫苗免疫接种绵羊预防牛血吸虫。关于绵羊日本血吸虫病方面,尚未见到有关免疫预防的报道。绵羊是日本血吸虫的易感动物之一。在我国人畜共患血吸虫病的传播方面,绵羊具有一定的重要性。为了应用日本血吸虫冷冻童虫苗进行家畜血吸     

日本血吸虫冷冻辐照童虫苗免疫程序的研究

应用日本血吸虫冷冻童虫苗于家畜的免疫程序的研究包括免疫次数、注射部位以及佐剂使用对免疫效果和现场应用的关系。为此,特在豚鼠进行试验。试验分9组进行,共用90只豚鼠。试验结果指出,冷冻辐照童虫苗可用来作皮内注射或肌肉注射。1次皮内注射加佐剂的减虫率达50.24％(P<0.001),仅略低于不冷冻的辐照童虫苗的减虫率(53.38％P<0.001),两者差异不显著。1次肌肉注射加佐剂的减虫率达40.62％(P<0.001)。但1次肌肉注射不加佐剂的减虫率亦达40.66％(P<0.001)。2次肌注的减虫率并不显著地高于1次肌注的。可见冷冻辐照童虫苗作皮内注射要加佐剂。作肌肉注射不必加佐剂,亦不必作2次免疫。     

联合法冷冻保存日本血吸虫童虫的研究

James(1981)首先提出了冷冻保存曼氏血吸虫的乙二醇二步加入速冻法,Stirewalt等(1984)认为该法很好,但培养大量童虫并加以冷冻却有困难,因此作了改良。我们采用该二氏的基本方法,结合本实验室条件,用乙二醇二步加速冻法保存日本血吸虫童虫的研究中,取得了解冻后形态正常并活动的童虫最多占44.68％的试验结果。在此基础上,进一步找出了本文报道的“联合法”。此法可以培养大量童虫,并可在冰冻状态下进行童虫的辐照。     

日本血吸虫14d童虫凋亡现象的观察

为观察BALB/c小鼠源日本血吸虫14d童虫的细胞凋亡现象,分别采用TUNEL检测法和透射电子显微镜从DNA分子水平和细胞层面上进行定性观察,并应用FITC-Annexin-V/PI双染色法通过流式细胞仪定量检测虫体凋亡细胞比例。结果表明,采用这3种方法均能在日本血吸虫14d童虫中观察到一定程度的细胞凋亡现象,但不会导致日本血吸虫该时期童虫的异常生长发育。     

日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。     

血吸虫阳性钉螺的冰箱保藏方法

血吸虫阳性钉螺的冰箱保藏方法林邦发（中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所２００２３２）日本血吸虫中间宿主的阳性钉螺是为研究血吸虫病的治疗、诊断、预防提供尾蚴和虫苗的重要材料，但阳性钉螺在实验室常温下培养，由于受环境（非自然条件）、生物（其它寄生虫和真...     

应用高剂量X射线辐照的日本血吸虫童虫对耕牛日本血吸虫病的免疫研究

在日本血吸虫病地方性流行区内,耕牛常受感染。在中国曾发现有560000头耕牛受感染。而在某一地方性流行区(安徽省石马湖农场)曾以粪孵法查89头水牛,感染率为55.9％。由于耕牛在东方国家是经济上具有重要性的农畜,耕牛血吸虫病是急待防治控制的。再则,因为耕牛可作为人的日本血吸虫病的重要的贮蓄宿主,有效的控制牛血吸虫病,无疑     

MicroRNA-181a对日本血吸虫童虫抗原刺激巨噬细胞的免疫应答起负调节作用

用日本血吸虫童虫抗原SSA和miR-181a模拟物分别或共同刺激/转染RAW264.7巨噬细胞,再用实时定量PCR技术或流式细胞术分析细胞miR-181a和TNF-α等细胞因子及M1型和M2型巨噬细胞标记分子的表达变化。结果显示,日本血吸虫童虫抗原SSA刺激RAW264.7细胞后,miR-181a及IL-1β、IL-4、TNF-α、IL-10、IL-6等促炎因子上调表达,IL-13下调表达;miR-181a模拟物单独转染RAW264.7巨噬细胞后,细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和M1型巨噬细胞标记分子INOS等下调表达,IL-4和M2型巨噬细胞标记分子arg-1上调表达。巨噬细胞先用SSA刺激后再转染miR-181a模拟物,IL-1β、IL-4、TNF-α、IL-10、IL-6等促炎因子都下调表达。流式细胞术分析结果显示,miR-181a对M1型标记物CD16/32的表达起到下调作用,对M2型标记分子CD206的表达起上调作用。本研究提示miR-181a对日本血吸虫SSA抗原刺激的巨噬细胞的免疫应答可能起负调节作用,并促进巨噬细胞向M2型细胞转化。     

伏基弗对黄牛人工感染肝片形吸虫童虫、日本血吸虫的杀虫效果

Closantel(译名伏基弗)是比利时杨森制药公司生产的一种能杀多种家畜寄生虫的有效药物。该药对肝片形吸虫成虫有效已有记载,但对日本血吸虫是否有效尚未见报道。本试验拟以日本血吸虫成虫和4周龄肝片形吸虫人工感染黄牛,以观察该药对这两种寄生虫的杀灭效果。     

磁感应孵化日本血吸虫卵的试验

日本血吸虫卵的孵化条件,最主要的是水的性质,因其可左右毛蚴数的孵出率。本试验的目的是为了探求水分子结构改造对血吸虫毛蚴孵化率的影响。结果发现磁感应对血吸虫卵有促进孵化的作用,从而对提高阳性牛检出率增添了一种诊断手段。     

电热毯孵化日本血吸虫卵的试验

(一)材料和方法 1.血吸虫卵:采用人工接种日本血吸虫发病牛粪便,试验用量,单重20克,经淘洗后为试验样本。 2.孵化水:将自来水煮沸去氯后,冷却备用。 3.电热毯:为美国出品,Heizkissen Typsw-O.2,220V-50W,宽28.5厘米,长40厘米。开三档。商标Rowenia。毯 4.试验方法:将淘洗粪孵粪样,置300ml孵化瓶内,用冰块降至5℃,然后置电热毯上,开始升温测定,瓶内插入摄氏温度计,用棉析法观察毛蚴孵出的数量,当温度达30℃停止。每10分钟观察一次并记录。     

应用高剂量辐照童虫免疫接种耕牛预防日本血吸虫病

近年来,应用虫苗防制血吸虫病是令人感兴趣的研究课题。李书颖、徐锡藩于1969年首先提出的高剂量辐照童虫制成的致弱活苗,虽然其实际应用的可能性尚待研究,但看来是最有希望的虫苗。从1978年至1980年英国和苏丹的研究者在伦敦卫生和热带病学院的倡导下联合研究了应用辐照童虫免疫接种牛犊,使其抵抗牛血吸虫尾蚴感染的攻击,这项工作已在实验室和苏丹该病流行区自然感染的放牧区进行,减虫率和减卵率约为60％至70％,希望牛血吸虫病最终通过童虫苗的应用而在苏丹得到控制。     

日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt10a基因的克隆及其在童虫和成虫中mRNA表达量的变化

利用RACE技术从19日龄的日本血吸虫童虫中扩增了1个Wnt家族基因,并对其进行了生物信息学分析。同源性分析表明,该基因为日本血吸虫新基因,完整开放阅读框(ORF)长1896 bp,编码631个氨基酸,理论分子质量为73.3 ku。该基因编码的氨基酸序列具有Wnt家族蛋白的典型特征,与人、鼠Wnt10a的氨基酸序列同源性均为26%,推测为血吸虫的Wnt10a基因,命名为Sjwnt10a(Gen BanK登录号DQ643829)。利用实时荧光定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达情况,结果显示该基因在19日龄的日本血吸虫童虫中表达量最高,在14日龄童虫和44日龄雄虫中也有表达,但分别仅为19日龄童虫表达量的8.8%和5.0%,而在31日龄成虫和44日龄雌虫中没有检测到该基因。结果提示,童虫差异表达的Sjwnt10a基因可能对童虫的生长、发育至关重要。     

捻转血矛线虫冷冻保藏研究

用人工感染捻转血矛线虫（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓｃｏｎｔｏｒｔｕｓ）单一种试验羊粪便培养收集感染性幼虫。经０．０６％和０．０８％次氯酸钠（ＮａＯＣｌ）脱鞘，脱鞘率可达９０％以上，慢速致冷后幼虫的存活率为６４．５％。加入冷冻保护剂不能提高冷冻感染性幼虫的存活率。用正常的感染性幼虫感染试验羊后第１７ｄ即可查到虫卵，剖杀后成虫的回收率为２．６％，而相同数量的冷冻保藏的感染性幼虫感染后第２１ｄ才查到虫卵，成虫回收率为０．８％。表明冷冻保藏后的感染性幼虫发育受阻，成熟期推迟，但仍可感染易感动物。     

日本血吸虫DNA疫苗对黄牛的田间免疫试验

用VRSj2 8、VRSj2 3和VRSj2 8+VRSj2 3对黄牛免疫后 ,在日本血吸虫病流行区云南省洱源县进行日本血吸虫田间自然攻击 5 4d ,免疫牛的减成虫率为 3 3 .0 %～ 44 .0 % (P <0 .0 5 ) ,粪便和肝组织的减卵率较高 ,特异性IgG在首次免疫后显著增高。提示 ,用此类疫苗对牛进行大规模免疫预防 ,可减少人群感染的机会。     

重度感染日本血吸虫兔粪便虫卵孵化毛蚴试验

动物日本血吸虫感染强度是显示日本血吸虫病疫情和对环境污染状况的重要指数,也是选择治疗方式的主要依据。建立感染强度测定方法,可以为日本血吸虫病的防治和疫情监测提供技术和方法。由于日本血吸虫宿主动物繁多,既有各种家畜也有野生动物,其中间宿主又为两栖生活的...     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——牛边缘边虫的超低温保藏

感染有单一种边缘边虫的试验牛,当染虫率达53.11％时,自颈静脉采抗凝血,在无菌条件下离心,弃上清液,将红细胞压积分为三组:①直接加入DMSO,使终浓度为5％;②用0.2％低渗盐水使红细胞裂解,在虫体沉淀物中加入等量含10％DMSO的改良阿氏液;③加入等量上述阿氏液。分别封装于安瓿,悬于液 氮罐气相状态下0.5～1小时,然后缓缓浸入液氮。储藏至90天取出,在自来水下冲淋解冻,分别经颈部皮下各接种1头未除脾易感健康牛。三种悬液的感染均获成功,潜伏期为15～16天,染虫率分别为21.87％、12.7％、9.93％。前两组试验牛痊愈,后者死亡。     

用混合器调浆提高日本血吸虫毛蚴孵化率的试验

日本血吸虫卵因被包埋在粪内排出体外,传统用竹筷搅拌,使虫卵散入水中,才孵化毛蚴。这一工序既费人力、时间,又污染很多工具,散失虫卵,是一个急待改进的课题。我所近年来,提出用旋涡混合器来处理含卵粪便孵化毛蚴,经过试验,效果理想,不但代替手工操作,而且将粪便内虫卵释出到水中,既不污染工具,又不损伤虫卵,反有促进孵化毛蚴的作用。     

猪发生姜片吸虫童虫病的报告

姜片吸虫病是猪肠道主要寄生虫病之一。多因生喂未经消毒处理的假水仙、水浮莲等青饲料而引起,在南方各省发生较多。1978年下半年,海南长昌煤矿猪场新购进92头中、小猪,不久出现拉稀、食欲减退、体质消瘦、水肿等症状,并陆续发生死亡。经我县畜牧兽医站确诊为患严重的姜片吸虫童虫病。