基于分子佐剂EDA的弓形虫DNA疫苗研究

为构建分子佐剂纤维连接蛋白外域A(EDA)与弓形虫表面膜蛋白1(SAG1)基因融合的真核表达载体并探讨其对小鼠的免疫原性,以本实验室保存的质粒为模板,进行PCR扩增,获得EDA-SAG1与SAG1目的片段,再分别连接到真核表达载体pVAX1上,构建出重组质粒pVAX1-EDA-SAG1和pVAX1-SAG1。将构建的质粒pVAX1-EDA-SAG1、pVAX1-SAG1同空载体pVAX1通过肌肉注射的方式免疫小鼠,通过ELISA、CCK-8法和小鼠攻虫试验对该DNA疫苗的免疫效果进行评价。经PCR扩增获得的SAG1片段长为855 bp,EDA-SAG1片段长为1 131 bp。双酶切和测序结果显示成功构建了上述重组质粒。在ELISA检测中,实验组血清中抗体Ig G、Ig G1、Ig G2a水平和细胞因子IL-4、IL-10、IL-12p70及IFN-γ的质量浓度较高,与对照组相比差异显著(P0.05)。在脾淋巴细胞增殖试验中,分子佐剂EDA-SAG1组的增殖效果最明显(P0.05)。攻虫后,pVAX1-EDA-SAG1实验组小鼠存活时间最长,较空白对照组多存活4 d。实验组pVAX1-EDA-SAG1相对于对照组pVAX1-SAG1具有较好的免疫效果,分子佐剂EDA可以显著地增强弓形虫SAG1的免疫原性。     

用ELISA和PCR检测异常妊娠妇女弓形虫感染

为了解兰州市妊娠妇女近年弓形虫感染情况 ,探讨异常妊娠与弓形虫感染的关系 ,分别采用ELISA和PCR检测了异常妊娠妇女血清中TOX IgM和TOX DNA。结果 ,1 3 5例异常妊娠妇女血清TOX IgM和TOX DNA阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 1 2 .5 9% (1 7/1 3 5 ) ,总阳性率为 1 3 .3 3 % (1 8/1 3 5 ) ,组间无显著差异 (P >0 .0 5 )。异常妊娠史妇女与妊娠期无异常孕妇的血清TOX IgM阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 6.0 2 % (3 2 /5 3 2 ) ,组间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,相对危险度为1 .85。调查结果显示 ,兰州市弓形虫血清抗体阳性率较 1 994年略有上升 ,弓形虫感染的孕前检查应联合应用ELISA和PCR为宜。     

哥斯达黎加缘何取得经济与社会的协调发展

哥斯达黎加是中美洲的小国 ,多年来政局稳定 ,享有“中美洲的民主橱窗”“中美洲的瑞士”等美誉。近年来 ,哥斯达黎加经济发展较快 ,颇受世人的瞩目。 1 998年哥斯达黎加国内生产总值( GDP)增长 6.6% ,1 999年增长 8.3% ,( GDP)由1 998年的 1 0 8.6亿美元上升到 1 41 .4亿美元 ,人均 ( GDP)由 32 0 1美元增加到 390 0美元。通货膨胀率由 1 998年的 1 2 .36%降至 1 999年的 1 1 %。特别值得关注的是 ,哥斯达黎加在促进经济发展的同时 ,重视社会的协调发展 ,贫困人口和失业率呈逐年下降的趋势。哥斯达黎加贫困家庭的比重由 1 996年的 2 1 …     

羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗联合免疫小鼠的免疫应答研究

为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将p VAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ和TNF-α)、Th2型(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ和TNF-α细胞因子水平均显著高于pVAX1-F1L组,与p VAX1组、PBS组相比差异极显著(P0.01);pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6和IL-10细胞因子水平均显著高于pVAX1组和PBS组,与pVAX1-F1L组相比差异不显著(P0.05);且pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-F1L组、pVAX1组和PBS组(P0.01)。结果表明,p VAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠,能诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫,p VAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能促进Th1型细胞因子的分泌。     

猪圆环病毒Ⅰ型ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1)ORF1基因序列,设计合成了1对引物,对PCV1 ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(939 bp)克隆入pMD18-T载体,将筛选获得的重组质粒命名为pMD-ORF1。测序分析表明,克隆的ORF1与广东分离株DQ659154的核苷酸序列同源性高达99.6%,推导的氨基酸序列同源性为99.4%。将ORF1双酶切产物插入原核表达载体pET-41a,得到的重组子命名为pET-ORF1。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明,PCV1ORF1在pET-41a中获得了高效融合表达,其表达蛋白的分子质量约为67.6 ku。     

印度2001年人口普查结果

20 0 1年 3月 ,印度进行了十年一度的全国人口普查 (上次人口普查时间为 1 991年 )。根据印度正式公布的本次人口普查结果 ,截止 2 0 0 1年 3月 1日零时 ,印度总人口已达1 0 2 70 1 52 47人 ,超过 1 0亿 ,居世界第二位。一、印度总人口情况1 .总人口 :1 0 2 70 1 52 472 .男性人口 :53 1 2 770 783 .女性人口 :49573 81 694.男女比例 :1 0 0 0 :93 35. 1 991～ 2 0 0 1年 1 0年人口增长率 :　　总人口 :2 1 . 3 4 %　　男性人口 :2 0 . 93 %　　女性人口 :2 1 . 79%6. 0～ 6岁人口 :　　总数 :1 57863 1 45(占印度总人口的 1 5. 42 % )　　…     

羊口疮病毒F1L与B2L基因核酸疫苗联合免疫小鼠特性的研究

为评价羊口疮病毒(OrfV)F1L与B2L基因核酸疫苗PVAX1-F1L、PVAX1-B2L联合免疫小鼠诱导体液和细胞免疫的应答效果,分别将PVAX1-F1L+PVAX1-B2L、PVAX1-B2L、PVAX1-F1L、PVAX1空载体与PBS通过后腿肌肉注射方式免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫不同时间段的小鼠血清中OrfV特异性抗体及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ,并通过MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ细胞因子水平显著(P<0.05)高于PVAX1-F1L和PVAX1-B2L单独免疫组,IL-4细胞因子水平差异不明显,但均与PVAX1空载体和PBS组差异极显著(P<0.01);PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖水平与PVAX1-F1L和PVAX1-B2L单独免疫组相比,差异显著(P<0.05),与PVAX1空载体和PBS组相比,差异极显著(P<0.01)。结果表明,PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫小鼠能够增强OrfV特异性抗体的分泌和细胞免疫应答,这为羊口疮新型疫苗的研制奠定了理论基础。     

猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388~609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。     

犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型转移载体的构建及真核表达

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型(FHV1)转移质粒pBS-TK-NcAMA1,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,扩增犬新孢子虫AMA1基因,并将其亚克隆至重组质粒pBS-TK。通过转染试剂PEI将pBS-TK-NcAMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的小鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用间接免疫荧光试验和Western-blot对基因的表达情况进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-NcAMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白的分子质量为68ku。这一研究成果为犬新孢子虫AMA1基因的重组猫疱疹病毒1型载体疫苗的研制奠定了基础。     

《“9·1 1”后的国际形势》论文集出版

“9·1 1”事件给国际形势带来重大而深刻的影响 ,引起国内外学术界的广泛重视和研究。和平与发展研究中心在跟踪和研究这一重大事件影响的过程中 ,得到各国际问题研究机构的大力支持 ,京内外许多知名专家、学者为《和平与发展》季刊撰写了颇有见地的研究文章。值此“9·1 1”事件两周年和《和平与发展》季刊创刊 1 5周年之际 ,我们特将本刊发表的有关论文汇编成《“9·1 1”后的国际形势》论文集 ,以飨读者。论文集分为四个部分 :“9·1 1”后的世界战略形势 ;“9·1 1”后的美国全球战略及其反恐战争 ;“9·1 1”后的大国关系 ;“9·1 1”…     

IFN-λ1作为乙型脑炎病毒DNA疫苗佐剂的免疫效应研究

为了评估IFN-λ1作为免疫佐剂能否提高乙型脑炎病毒DNA疫苗的免疫效应,利用RT-PCR方法扩增猪源IFN-λ1基因,构建重组真核表达载体pVAX1-IFN-λ1,通过Western-blot和间接免疫荧光试验鉴定免疫效果。结果表明,转染pVAX1-IFN-λ1重组质粒的BHK21细胞能够正确表达IFN-λ1;将重组IFN-λ1与p VAX1-prME DNA疫苗免疫小鼠后,与对照组p VAX1-prME相比,IFN-λ1可以诱导小鼠产生乙型脑炎病毒EⅢ蛋白特异性抗体水平、乙脑病毒特异性中和抗体效价和淋巴细胞增殖水平显著提高。结论,重组猪源IFN-λ1作为乙型脑炎病毒DNA疫苗的分子免疫佐剂能够在小鼠动物模型上提高乙型脑炎病毒DNA疫苗的免疫效应。     

甲型流感病毒通过调控TGF-β1介导的ORM2抑制CCL3表达

为探究甲型流感病毒（IAV）感染对类黏蛋白（ORM）表达的调控作用,利用H1N1、H9N2亚型流感病毒感染A549和DF1细胞,检测发现ORM1和ORM2的表达水平显著升高;H1N1亚型流感病毒感染BALB/c小鼠后,小鼠肺中ORM1和ORM2的表达水平同样显著升高。进一步筛选发现,IAV感染激活的转化生长因子β1(TGF-β1)能够显著诱导ORM1和ORM2的表达,使用TGF-β1受体抑制剂处理可以阻断IAV和TGF-β1诱导的ORM表达水平的升高。为探究ORM蛋白在流感病毒感染中发挥的作用,使用IAV感染ORM1和ORM2过表达及干扰细胞系。结果显示,细胞中干扰或过表达ORM1和ORM2后对IAV的复制没有影响,但ORM2能够抑制趋化因子CCL3的表达。综上所述,IAV通过TGF-β1介导的ORM2抑制趋化因子CCL3的表达,从而抑制体内炎症反应,拮抗宿主天然免疫应答。     

黄曲霉毒素检测方法简介

黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一种强烈致癌性物质。目前已鉴定出13种,分为两大类——B_1及其衍生物和G_1及其衍生物。B_1的衍生物包括B_2、B_2a、M_1、M_2、P_1、Q_1、四氢脱氧B_1和黄曲霉毒素醇;G_1的衍生物包括G_2、G_2a和GM_1。食品与饲料中污染的A-FT主要有B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2。由于AFT的毒性大、污染广且难以去毒,对人们的健康危害很大,因此对AFT的监测显得十分重要。自60年代初以来,建立的检测AFT的方法已达30余种,这些方法可归成三大类,即生物学方法、化学方法和免疫学方法。(一)生物学方法 有10种,主要用于定性。     

青海省细粒棘球蚴线粒体cox1基因和nad1基因多态性的研究

分析了采自青海省7个县共19个细粒棘球蚴分离株样品的nad1基因和cox1基因核苷酸序列的多态性和单倍型。结果显示,18个细粒棘球蚴分离株属于G1型,1个分离株属于G3型。G1型分离株可根据nad1基因和cox1基因的核苷酸序列变异分为不同的单倍型,其中nad1基因的单倍型共有5种,变异位点只有5个,单倍型序列之间碱基差异1~4个,变异率达0.45%;而cox1基因的单倍型共有9种,涉及变异位点共27个,单倍型序列之间碱基差异1~11个,变异率达0.68%。突变碱基多位于密码子第3位碱基上,属于同义突变。cox1基因的多态性比nad1基因的多态性丰富。用于细粒棘球蚴G1型内分离株之间核苷酸多态性的分析则分辨率相对较高。上述研究结果为进一步开展棘球蚴病分子流行病学调查积累了数据。     

DEC205单链抗体增强巨型艾美耳球虫核酸疫苗免疫原性的评价

为了探究scFvDEC205(DEC205单链抗体)能否增强巨型艾美耳球虫优势抗原片段EmIMP1C的免疫原性,构建重组质粒pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C,转染HEK-293T细胞检验其体外表达情况,于试验鸡大腿肌肉处定期3次注射该重组质粒。结果显示:成功构建重组质粒pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C,并能在HEK-293T细胞中表达。pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C组的IgG抗体效价最高,达3 200。第3次免疫后,pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C组血清中IFN-γ质量浓度显著高于其他组(P0.05);用流式细胞仪检测试验鸡产生的CD4~+和CD8~+T细胞比例,用CCK8法刺激鸡脾淋巴细胞增殖,结果均显示pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C组显著高于其他实验组(P0.05)。病理切片结果提示pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C组的病变程度最轻。结论:重组质粒pVAX1-scFvDEC205-EmIMP1C能有效诱导鸡产生免疫效应,scFvDEC205具有增强EmIMP1C抗原免疫原性的效果,为今后开发靶向鸡球虫疫苗给予了有力的支持。     

新城疫病毒调控宿主YB-1蛋白的初步研究

为了揭示YB-1蛋白在新城疫病毒(NDV)感染中的作用,对NDV感染细胞中YB-1表达水平以及亚细胞定位的变化进行了初步探索。利用RT-PCR技术,从鸡胚成纤维细胞中扩增了鸡源YB-1蛋白基因,序列分析结果显示其与其他物种YB-1有较高的相似性,与人YB-1的核苷酸和氨基酸相似性分别为88.3%和78.9%。随后利用间接免疫荧光技术检测了感染NDV强毒株Herts/33的He La和DF-1细胞中内源性YB-1蛋白的亚细胞定位变化,用q RT-PCR方法检测了YB-1 m RNA表达水平,通过Western-blot检测了YB-1蛋白水平的时相变化。结果显示,He La细胞中YB-1主要存在于细胞质,而禽源DF-1细胞YB-1集中在细胞核内;感染NDV后,两种细胞中的YB-1蛋白均在细胞质内呈现颗粒化聚集,同时在NDV感染后期He La细胞中YB-1蛋白出现少量降解。该研究初步揭示了NDV感染过程中YB-1蛋白的迁移现象,推测与NDV的复制过程相关,其具体的作用机制以及对NDV复制的影响尚待更深入的研究。     

Netrin-1在伪狂犬病病毒触发的抗病毒天然免疫反应中作用的研究

为探究轴突导向生长因子Netrin-1在病毒感染中的功能,以猪伪狂犬病病毒感染MEF细胞为模型,通过荧光定量PCR检测Netrin-1基因mRNA在感染前后表达水平的变化,结果表明,伪狂犬病病毒刺激可以使得细胞下调Netrin-1 mRNA的表达水平。以小鼠Netrin-1基因保守序列设计1对特异性引物,成功将Netrin-1克隆入pcDNA3.1载体,在MEF细胞中瞬时转染重组质粒,并用伪狂犬病病毒感染细胞,针对炎症因子IL-6、干扰素IFN-β与干扰素刺激基因IFIT1和ISG15的mRNA进行qPCR验证,结果表明,Netrin-1对于干扰素与干扰素刺激基因的表达具有抑制作用。免疫印迹试验结果证明,过表达Netrin-1使得细胞核因子P65亚基表达下调。表明Netrin-1对免疫反应具有抑制作用,细胞在受到病毒感染时下调Netrin-1的表达以促进免疫反应。     

简论拉美新自由主义的演变

新自由主义在特定的历史背景下出现在拉美 ,它经历了从一个比较极端的经济学的解释 ,到“华盛顿共识”的政策体现 ,再到实践上的智利模式的演变。在 2 1世纪初它会以比较缓和的形式左右拉美的改革 ,同时 ,新结构主义也将是替代范式之一。一什么是新自由主义 ?新自由主义是自由主义产生后的第三种自由主义。第一种自由主义是古典自由主义 ,存在的时间大约从 1 7世纪到 1 9世纪后期。这一思想和理论体系是由许多资产阶级学者共同创立和发展的 ,如英国的洛克 ( 1 632～ 1 70 4 )、休谟 ( 1 71 1～1 776)和边沁 ( 1 748～ 1 832 ) ,法国的孟德斯…     

猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定

为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RTPCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pColdmSAMHD1。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白。以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9。Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价。交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应。本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。     

沙冬青生物碱对MDCC-MSB1细胞增殖抑制与诱导凋亡的影响

采用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)还原法、透射电子显微镜观察及流式细胞技术检测梯度浓度沙冬青总生物碱对体外培养鸡马立克氏病肿瘤HDCC-MSB1细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用。结果显示,沙冬青生物碱可显著抑制HDCC-MSB1细胞增殖,且这种抑制具有剂量和时间效应关系。经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒(亚G1期峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞增殖在G1被阻滞,并进一步诱导HDCC-MSB1细胞凋亡。电子显微镜观察也表明,经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中,大量HDCC-MSB1细胞凋亡。结果表明,沙冬青生物碱对HDCC-MSB1细胞增殖有显著抑制效应,其抑制机理为诱导HDCC-MSB1细胞凋亡。