F-2毒素检测方法研究——薄层层析法定量

F-2(Zearalenone)的毒性已逐渐为人们所重视,其生产真菌在我国饲料中普遍存在。为制定饲料中F-2毒索卫生标准,研制饲料中该毒素最小检出量的检测程序,已势在必行。现将试验结果报告如下:材料与方法(一)F-2标准样员(SiGMA) 以三氯甲烷稀释成每微升含0.01、0.015、0.02、0.2μg 4个浓度。(二)薄层层析板制备 板20×5cm,SilicaGel G(粒度10～14μm)1.6g,加蒸馏水(或去离子水)8.5ml,充分研磨,铺板,静止4～6小时,110℃干烤1小时(或70～80℃干烤3小时)。(三)点样 以微量进样器吸取标准F-2溶液,在板下限上3cm处点样,每板等距点0.5、10、2.0、2.5μl5个点,每个标准F-2浓度点样10个板。     

F-2毒素检测方法研究——离心薄层层析法检测

采用离心薄层层析仪分离真菌毒素,国内外尚未见报道。我们试用离心薄层层析法分离真菌毒素F-2,以便探索新的真菌毒素检测方法。材料与方法(一)仪器 ①LBC-I型离心层层析仪;②紫外线分析仪。(二)洗脱展开系统 ①甲苯:三氯甲烷:丙酮(To:TC:A 3:15:1 V/V/V);②三氯甲烷:甲基异丁酮(TC:MIBK 5:1 V/V)。     

F-2毒素的检测方法研究——薄层层析法的定性

近几年我们用薄层层析法对饲料中F-2毒素进行了分离鉴定,结果表明,它具有灵敏度高,分辨能力强,设备简单,操作方便,便于推广等优点。材料与方法(一)器材 紫外分析仪(2537(?)、3650(?)),层析槽(内径25.3×6.3×3.3cm),层析板(5×20cm),微量进样器,分液漏斗,蒸发皿,带盖三角瓶(50ml),称量瓶(2～5ml),喷雾器。(二)试剂1.提取溶剂:氯仿、正己烷、乙腈、石油醚。2.薄层层析展开剂系统:氯仿-甲醇(97:3V/V),氯仿-丙酮(9:1),甲苯-丙酮-甲醇(5:3:2V/V/V),甲苯-乙酸乙酯-氯仿(2:1:1),苯-乙醇(95:5)。     

用PCR检测鸡新城疫病毒的初步试验

用ＰＣＲ检测鸡新城疫病毒的初步试验宋长绪，刘福安（华南农业大学广州５１０６４２）鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的检测在临床诊断和口岸检疫等方面具有重要意义。尤其是在口岸检疫中，要求准确而快速，因此目前常用的血凝（ＨＡ）和血凝抑制（ＨＩ）试验远不能满足这方面的...     

奶牛分枝杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为优化分枝杆菌PCR诊断方法并监测牛分枝杆菌耐药性,本研究采用罗氏培养基自奶牛淋巴结和肺中分离分枝杆菌,优化本课题组建立的两级多重PCR方法用于分离菌株的分子诊断。一级PCR为两重PCR,靶标16SrRNA进行属和群的鉴定;二级PCR为七重PCR,根据结核分枝杆菌复合群(Mycobacte-rium tuberculosis complex,MTBC)成员染色体缺失区域的差异,设计了7对引物,依据群内不同种各自呈现特定的扩增谱型进行种的鉴定。对MTBC分离株,全菌水平用绝对浓度法对4种抗结核一线药物(RFP、INH、EMB、SM)进行药敏试验;分子水平用PCR扩增耐药基因rpoB、katG、inhA、embB、rrs,并测序分析。结果显示,本试验共分离出14株分枝杆菌,一级PCR鉴定均为分枝杆菌属成员,其中8株为MTBC成员。二级PCR中,这8株均呈现相同的扩增谱型,均为牛分枝杆菌谱型。药敏试验和耐药基因检测结果一致,8株牛分枝杆菌分离株对4种抗结核病一线药物全部敏感,基因序列分析未见突变。结果表明,本研究优化的两级多重PCR方法具有快速可靠和低成本的优势,是目前国内最新的分子诊断方法。     

用斑点金免疫渗滤试验检测牛结核分枝杆菌IgG抗体

用牛结核分枝杆菌制备牛结核菌糖脂抗原 ,并固定在NC膜上 ,将牛IgG单克隆抗体与胶体金连接。通过临床检验 ,在结核菌素皮肤试验 99例阳性牛中 ,斑点金免疫渗滤试验阳性 60例 ;皮肤试验 13 9例阴性牛中 ,金标阴性 111例。该法简便快速 ,可作为皮肤试验的辅助试验     

甘肃省奶牛副结核分枝杆菌的调查与分离鉴定

为进一步了解甘肃省某奶牛场牛副结核病的感染情况,采集该场227头奶牛血清进行ELISA抗体检测,结果,检出13头阳性奶牛,阳性率为5.73%。在13头抗体阳性奶牛中随机采集6头表现拉稀症状奶牛的直肠粪便,提取DNA进行荧光定量PCR检测,结果显示,6份粪便样品均为阳性。6份粪便样品用十六烷基氯化吡啶(HPC)处理后接种自行配制的Herrold's卵黄琼脂培养基,经过7～14周培养得到5株分离菌株。采用IS900特异性序列PCR鉴定和限制性内切酶分析(REA)鉴定,结果表明,5株分离菌株均为副结核分枝杆菌。采用IS1311特异性序列PCR-REA鉴定,结果表明,5株分离菌株均为C型MAP。     

用酶联免疫吸附试验诊断牛伊氏锥虫病的初步研究

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种凭借酶的作用,使免疫反应在底物上呈现出肉眼可见的色译,并可通过分光光度计或光电比色计读取不同的消光值来判断被检物的新技术。这种方法首先是1966年由Nakane和Avrameas等提出的,后来由Avrameas等(1969、1970、1971)作了较为全面的发展。它是通过化学与免疫学的方法,将酶与抗原或抗体结合起来,使其保持免疫学和酶的活性。当酶的结合物与相应的抗原或抗体结合之后,在遇到相应的酶     

用血细胞吸附抑制试验快速鉴定鸡毒霉形体

鸡源霉形体的鉴定,通常用已知的标准阳性血清与分离物进行生长抑制试验(GI)、代谢抑制试验(MI)或用表面免疫荧光法(epi-IF)进行,前两种方法费时,往往需要1～2周才能得出结果;后一种方法需要荧光显微镜,不易普及应用。笔者根据鸡毒霉形体菌落有很强的吸附鸡红细胞的特点,试用已知的阳性血清进行菌落血细胞吸附抑制试验(HAI)来鉴定鸡毒霉形体。结果表明,这种方法与GI、MI、epi-IF一样具有很强的特异性,而且方法简单快速,对琼脂培养基表面的菌落2小时内可得出结果。(一)材料与方法1.抗血清:鸡毒霉形体抗血清、滑液霉形体     

新型鸭肝炎病毒的分离及初步鉴定

从北京和广西发病鸭群中分离到 2株病毒 ,分别编号为B株和G株 ,病毒大小约 40nm ,无囊膜。血清中和试验表明 ,2株病毒为同一血清型 ,与 1、3型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒无血清学相关性。人工感染试验表明 ,G株对雏鸭具有很强的致病性 ,可引起典型的鸭肝炎病变 ,但死亡率随雏鸭日龄的增长而明显下降 ;B株病毒不能致死正常雏鸭 ,但雏鸭经过环磷酰胺处理后 ,感染B株病毒可引起雏鸭死亡 ,死亡鸭肝肿胀、出血     

鸡弧菌性肝炎病原的分离与初步鉴定

鸡弧菌性肝炎病原的分离与初步鉴定崔保安卢中华李新生张红英许端红（河南农业大学畜牧兽医工程学院郑州４５０００２）禽弧菌性肝炎是由禽弧菌引起仔鸡或成年鸡的以肝脏变性、坏死及破裂出血为特征的细菌性传染病。１９８６年后，我国江苏、湖南、湖北、甘肃等地有该病的...     

减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定

减蛋综合征病毒的分离与初步鉴定王砚范宋晓华李维义（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）从一产蛋突然下降的蛋用鸡群中分离到１株与减蛋综合征（ＥＤＳ）相似的腺病毒。该病毒能凝集鸡的红细胞，并且可在鸭胚尿囊腔中复制出高效价的病毒。１材料和方法１．１...     

猪败血性链球菌病病原鉴定的初步研究

能引起猪病的链球菌种类繁多,由于菌种致病力的差异及侵害组织的不同,引致的猪只疾病也甚复杂。常见的有链球菌性淋巴结炎、关节炎、脑膜炎及心内膜炎等。自六十年代初在华南部分省(区)爆发一种以急性经过、传播迅猛的猪败血性链球菌病,目前已蔓延到中南及西南等省(区),引起严重损失。对猪败血性链球菌病的病原进行正确的分群鉴定无论在理论及实践防治工作中及公共卫生上都有重大意义。 Collier(1951)首先对由猪体分离的β溶血性链球菌按Lancefield法进行分群鉴定,继后     

驱除猪细颈囊尾蚴的初步试验

选4头生长缓慢的小猪,沿腹下中线切开,直接观察腹腔内细颈囊尾蚴的数量、大小,寄生部位,并作好记录。然后用注射器将预先准备好的敌百虫溶液(用量按猪每公斤体重0.1克计算)用蒸馏水配成5％浓度,直接喷射在细颈囊尾蚴的表面,分层缝合腹壁。连续3天,每日2次测温,观察精神、食欲,未发现异常。过1星期再切开2头小猪的腹壁观察,发现虫体已萎缩,其包囊壁出现皱纹,内含液体变为混浊。另2     

地锦草有效成分鉴定及其抑菌试验

地锦草有效成分鉴定及其抑菌试验刘湘新孙志良冯琦华盛忠梅（湖南农业大学动物科技学院长沙４１０１２８）地锦草（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｈｕｍｉｆｕｓａ）又名红筋草、铺地锦、奶仔草、血见愁，系大戟科双子叶一年生草本植物，生于田野、路边、菜园边或庭院屋角。全草入药...     

牛分枝杆菌CFP-10基因的原核表达及其表达产物的变态反应原性的鉴定

以牛分枝杆菌基因组为模板,PCR扩增获得CFP-10基因,并连入pET-32a(+)载体,获得了重组质粒pET-32a-CFP-10。将重组质粒转入宿主菌大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,重组蛋白rCFP-10以可溶形式表达并被纯化,将rCFP-10在致敏豚鼠皮内做迟发型变态反应(DTH)检测,并以PPD作为阳性对照。结果显示,测得rCFP-10组豚鼠皮肤红斑直径平均值为10mm,接近于PPD组(13mm)。结果证明,以pET-32a(+)为载体进行原核表达,获得的重组蛋白rCFP-10依然具有较强的迟发型变态反应原性,同时也证明了CFP-10具有作为皮试诊断试剂抗原的潜力,这一结果为牛结核病新型DTH皮试诊断的研究奠定了基础。     

口蹄疫O亚型补体结合反应分型鉴定的初步研究

口蹄疫病毒是高度可塑性(易变性)病毒之一。本病毒在流行过程中,由于受到外界因素(特别是易感动物的免疫状态)的影响,容易发生某些变异。近年来,国外试验证明,口蹄疫正型之间和亚型之间的核糖核酸杂交是容易的,通过这种杂交后,可获得独特抗元性的新毒株。据报导,口蹄疫7个正型中的亚型多达62种,即O亚型10个,A亚型29个,C亚型4个,Asai—Ⅰ亚型5个、SAT—Ⅰ亚型7个、SAT—Ⅱ亚型3个、SAT—Ⅲ亚型4个。每个正型中的各个亚型的抗元性各有差异,例如A_1与A_2的抗元性差异较小,而A_(22)与A_1的抗元     

口蹄疫毒型鉴定的补体结合反应试验

一、反应要素: 1.溶血素:生药厂出品; 2.补体:新鲜健康公海猪血清; 3.红血球:2％公绵羊红血球悬液; 4.血清:口蹄疫O、A、C、ZB型高免海猪血清, 5.抗原:病畜水泡皮毒。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及初步鉴定

河南一些养鸡场爆发流行以呼吸道症状为临床特征，以肾脏肿胀、尿酸盐沉积为病变特征的传染病。从典型病例的肺、肾中分离出一株病毒，通过鸡胚接种盲传５代，结合雏鸡回归试验、胰酶及磷酸酯酶处理鸡红细胞凝集试验，与Ｔ＿４标准阳性血清鸡胚病毒中和试验、琼脂扩散试验，证实分离物为Ｔ＿４株肾型传染性支气管炎病毒。