磷对体外大鼠成骨细胞增殖分化及钙化功能的影响

在体外培养大鼠成骨细胞的过程中添加磷(0、1、2、4 mmol/L),检测不同时间内的细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白表达及钙化功能,探讨了磷对成骨细胞增殖分化及钙化的影响。结果表明,磷能促进成骨细胞增殖,随着磷浓度的增加,增殖作用减弱,只在添加磷后第6、7 d极显著高于对照组;磷能显著或极显著地抑制碱性磷酸酶活性,即作用第5 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组;作用第8 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组,2 mmol/L磷组极显著低于4 mmol/L磷组;磷能诱导骨桥蛋白的表达(P<0.01),12、mmol/L高于4 mmol/L磷组;磷能诱导钙化,钙化结节个数极显著高于对照组,钙化结节平均面积只有1 mmol/L磷组显著高于对照组,随着磷浓度的变大,钙化结节平均面积逐渐减小而钙化结节个数则逐渐增多。表明添加不同浓度的磷均能抑制成骨细胞的早期分化,促进其增殖,诱导细胞基质成熟及钙化,利于新骨的形成,但4 mmol/L磷组效果较差。     

磷对成骨细胞超微结构及其GJIC和Ⅰ型胶原含量的影响

在体外培养成骨细胞(OB)的基础上,添加0、1、2、4mmol/L磷,作用2d后,采用电子显微镜观察OB的超微结构,采用划痕标记染料示踪技术观察细胞间隙连接通讯(GJIC);作用2、5、8d后,用BCA法蛋白定量试剂盒、Goat Anti-rat Collagen TypeⅠ试剂盒分别检测OB内总蛋白及Ⅰ型胶原的含量,并用DⅠ型胶原/D总蛋白表示Ⅰ型胶原的含量。结果显示,作用2d,4mmol/L磷组OB内线粒体减少、肿胀。4mmol/L磷组GJIC的荧光扩散距离减弱,1、2mmol/L磷组基本不变;就Ⅰ型胶原含量而言,除1mmol/L磷组在作用2d抑制其分泌外(P<0.05),在磷作用2、5、8d均促进其分泌(P<0.05)。结果表明,添加1、2、4mmol/L磷能促进OB的分泌Ⅰ型胶原;4mmol/L磷能抑制OB的代谢活性,且能抑制OB间通讯。     

铅镉联合对体外培养大鼠肾小管上皮细胞存活及凋亡的影响

采用机械筛网结合酶消化法建立了大鼠原代肾小管上皮细胞培养模型,在传代细胞增殖活性最强时间段进行铅、镉单独染毒或联合染毒.通过CCK-8还原法和流式细胞仪检测不同时间铅、镉对细胞存活率和凋亡率的影响.结果显示,铅、镉单独染毒高剂量组从第6 h开始、低剂量组从第12 h开始,其细胞存活率显著低于对照组(P＜0.05);铅、镉联合染毒组从第3 h开始,细胞存活率显著或极显著(P＜0.05或P＜0.01)低于对照组,且存活率的降低幅度与剂量呈正相关;染毒后第12 h,各组的凋亡率均极显著高于对照组(P＜0.01),铅、镉联合染毒组的细胞凋亡率显著高于各相关单独染毒组(P＜0.05),呈明显的剂量-效应关系.     

抗运动神经元抗体对离体培养的大鼠脊髓神经元NGF低亲和力受体mRNA表达的影响

为探明特异性抗体对神经元的损伤机制，分离提取猪脊髓前角运动神经元并作为抗原免疫动物，分离纯化ＩｇＧ，观察这种ＩｇＧ（ａｎｔｉ－ＳＭＮ）对无血清培养大鼠脊髓神经元的影响。结果表明，培养的脊髓细胞中确有部分神经元表达ＬＮＧＦＲｍＲＮＡ，这些阳性细胞呈多角形、三角形或椭圆形，胞浆呈蓝黑色，胞核未着色，即为运动神经元；培养神经元暴露于ａｎｔｉ－ＳＭＮ４８ｈ后，ａｎｔｉ－ＳＭＮ组ＬＮＧＦＲ阳性细胞明显减少，狭缝杂交定量检测ａｎｔｉ－ＳＭＮ组ＬＮＧＦＲｍＲＮＡ表达量较对照组降低６０％；培养细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放量在抗体组明显增加并且呈量效关系；ａｎｔｉ－ＳＭＮ组钙结合蛋白免疫阳性神经元在培养细胞暴露于抗体４８ｈ时明显增加，胆碱酯酶（（ＡＣｈＥ）阳性细胞则显著减少。提示ＬＮＧＦＲ参与抗体介导的神经元损伤，可作为观察脊髓运动神经元的一个特异指标，ａｎｔｉ－ＳＭＮ对培养脊髓神经元有明显的细胞毒性作用     

丙酸钠和丙酮酸钠对体外培养牛肝细胞内丙酮酸羟化酶基因mRNA水平的影响

在成功构建牛肝细胞培养模型和PC基因DNA竞争模板的基础上,采用竞争RT-PCR方法检测了丙酸钠和丙酮酸钠对体外培养新生牛单层肝细胞PC基因mRNA丰度的影响。结果,随着丙酸钠浓度的升高,PC基因mRNA水平呈上升趋势,PC基因mRNA对丙酸钠的耐受范围较广;随着丙酮酸钠浓度的升高PC基因mRNA水平呈先上升后下降的趋势。结果表明,肝细胞内PC基因mRNA的表达水平受丙酮酸钠浓度的调控,在一定范围内丙酮酸钠对PC基因mRNA的转录具有促进作用,而浓度过高时则起抑制作用。     

JA1对体外培养的Hep细胞和小鼠皮下移植性Hep细胞凋亡的影响

采用噻唑蓝(MTT)还原法、流式细胞术、光镜及透射电子显微镜技术等检测了梯度浓度的JA1(沙冬青提取物)对体外培养的小鼠肝癌细胞株Hep增殖的影响及诱导Hep细胞凋亡的作用;并检测了JA1对小鼠皮下移植性Hep细胞的生长抑制及诱导凋亡作用.结果显示,JA1可显著抑制小鼠Hep细胞的增殖,且这种抑制有浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示,JA1处理后的Hep检测样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生了改变,细胞在G1期被阻滞.同时,JA1对小鼠皮下移植性Hep细胞也有明显的抑制作用.JA1灌胃试验组瘤组织细胞DNA直方图有明显的凋亡峰,细胞在G1期也被阻滞,光镜和电镜下可见大量凋亡肿瘤细胞.     

胰岛素样生长因子Ⅰ和胰高血糖素样肽Ⅰ对体外培养的脂肪细胞HSL mRNA表达的影响

为阐明胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、胰高血糖素样肽Ⅰ(GLP-Ⅰ)在乳牛脂肪代谢过程中的调控作用,应用荧光定量PCR法检测IGF-Ⅰ、GLP-Ⅰ对体外培养的脂肪细胞激素敏感脂肪酶(HSL)mRNA丰度的影响。结果显示,随着IGF-Ⅰ、GLP-Ⅰ添加浓度的升高,脂肪细胞HSL mRNA表达逐渐下降。结果表明,IGF-Ⅰ、GLP-Ⅰ直接调控脂肪细胞HSL mRNA的表达。     

阿维菌素对体外培养王鸽神经细胞内游离钙离子浓度及CaM mRNA表达的影响

提取美国王鸽8～9日龄鸽胚脑神经细胞进行体外培养,按照阿维菌素(AVM)染毒的剂量分成4组,分别为0ìg/L(Ⅰ组)、2.5 ìg/L(Ⅱ组)、5 ìg/L(Ⅲ组)和10 ìg/L(Ⅳ组),染毒24 h后,用MTT法进行细胞活性检测,应用荧光探针法检测细胞内游离Ca2+浓度,应用半定量RT-PCR法检测细胞内CaM mRNA的表达水平.结果显示,AVM能够引起王鸽神经细胞内游离Ca2+浓度升高,CaM mRNA表达水平下降.表明AVM能影响王鸽体外培养神经细胞内的钙稳态.     

缺磷日粮对笼养蛋鸡生产性能及内分泌的影响

将 12 0只 19周龄依莎蛋鸡随机分成A、B、C组 ,分别饲喂总磷含量为 5 .8、4 .4和 3.0g/kg的日粮 (相应的有效磷含量分别是 4 .0、2 .5和 1.0 g/kg) ,进行缺磷日粮对蛋鸡生产性能及内分泌的影响试验。结果表明 ,B组与A组间生产性能无显著差异 ;与A、B组相比 ,C组产蛋率、体重、蛋壳品质及骨密度 (BMD)均显著下降 (P <0 .0 1) ;各组间血钙、血磷含量无显著差异 ;C组碱性磷酸酶 (AKP)活性和血液骨钙素 (BGP)含量均比对照组显著提高 (P <0 .0 1) ;从试验开始到产蛋高峰期 (33周龄 ) ,A、B和C组雌二醇 (E2 )水平随年龄增长而上升 ,但随后E2 水平则呈下降趋势。试验结果表明 ,日粮总磷含量为 4 .4 g/kg时有助于提高和改善蛋鸡生产性能 ,若日粮总磷含量低于 4 .4 g/kg ,则会降低产蛋率、蛋重、蛋壳品质及骨量。     

抗坏血酸和NAC对水牛卵泡颗粒细胞存活的影响

体外培养水牛卵泡颗粒细胞(BFGCs),待一定阶段后撤除胎牛血清,在对照组培养基中不加任何抗氧化剂,在试验组培养基中分别加入不同浓度的抗坏血酸(AA)和N乙酰L半胱氨酸(NAC),培养6h后观察细胞生长变化,并用噻唑蓝比色法进行细胞计数,探讨了AA和NAC对撤除血清后BFGCs存活的影响。结果表明,对照组和试验组的BFGCs都有不同程度的体积变小、细胞浓缩、变圆、离壁等类似凋亡的特征。其中0.5和1.0mmol/LAA组凋亡细胞最少,150.0mmol/LAA组无存活细胞,0.5mmol/LAA组的细胞存活率显著高于对照组和除1mmol/LAA组以外的其他AA组(P<0.05)。5mmol/LNAC组凋亡的BFGCs最少,其余5个试验组随NAC浓度升高,凋亡细胞逐渐增多,5mmol/LNAC组BFGCs的存活数量显著高于对照组和其他各组(P<0.05)。说明抗氧化剂AA、NAC在低浓度时能抑制撤除血清后体外培养BFGCs的凋亡,而高浓度时可促进其凋亡,它们的作用都是双向的、剂量依赖性的。     

咖啡因对体外保存精子品质和受精力的影响

在概述咖啡因的来源、结构、饮用价值的基础上,简述了关于咖啡因对稀释的非冷冻保存精液和冷冻保存精液中精子活率和受精力影响的研究状况,认为无论在体外非冷冻保存的精液中还是在冷冻保存的精液中添加适量的咖啡因,均有助于提高精子活率、精子体外保存时间、情期受胎率和体外受精力。最后指出,研究人员应继续优化筛选咖啡因在制作冻精时的适宜添加剂量和添加时机。     

胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定(RIA)法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化I、L-2基因表达与分泌的影响。结果表明,用10 ng/mL和1 ng/mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8 h后,能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应,显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05);100 ng/mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势,但与对照组无显著差异(P>0.05)。提示,胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应,并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌,其作用与剂量大小有关。     

氟对山羊成骨细胞增殖分化及钙化功能的调节

为探讨氟化物对反刍动物骨骼代谢的影响及对成骨细胞的作用机理,以初生山羊股骨骨膜为材料,采用半消化组织块培养法分离成骨细胞,进行传代培养,并通过形态观察、扫描电镜、碱性磷酸酶(AKP)和矿化结节染色进行鉴定。通过噻唑蓝(MTT)染色、AKP活性测定和钙化结节计数,研究不同浓度的氟对山羊成骨细胞增殖、分化及钙化的影响。结果表明,加氟48 h和96 h后,1.0×10-7~1.0×10-5mol/L氟可促进成骨细胞增殖,其中1.0×10-7及1.0×10-6mol/L氟与对照组差异极显著(P<0.01),高浓度氟(1.0×10-3mol/L)则抑制成骨细胞增殖(P<0.01);而1.0×10-4及5.0×10-4mol/L氟作用48 h对成骨细胞增殖无影响,作用96 h转而抑制成骨细胞增殖(P<0.01)。1.0×10-7~1.0×10-5mol/L氟能显著增强成骨细胞AKP活性及钙化能力(P<0.01),但氟浓度高于5.0×10-4mol/L时,AKP活性及钙化能力明显下降(P<0.01)。证实,低剂量氟能促进体外培养的山羊成骨细胞增殖分化及钙化,高剂量的氟则表现抑制作用。     

非酯化脂肪酸对体外培养的牛肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA丰度及其活性的影响

采用荧光定量PCR方法、酶活性速度测定法,探讨了非酯化脂肪酸(NEFA)对体外培养的牛肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA丰度及其活性的影响.结果显示,添加1.5 mmol/L和2.0mmol/L NEFA时,PEPCK mRNA丰度显著低于对照组(P<0.05);添加0.5～2.0 mmol/L NEFA时,PEPCK的活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低.结果表明,NEFA对体外培养的牛肝细胞中PEPCK mRNA丰度和PEPCK酶活性均具有抑制作用.